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第一部分 生物化学技术概论 3

1 生物化学须知 3

1.1 生物化学实验技术发展简史 3

1.2 实验室规则 6

1.3 实验室安全及防护知识 8

1.4 实验报告 12

1.5 实验室基本操作 13

1.6 缓冲溶液与pH测定 17

1.7 生化实验室的基本设施与装备 24

2 生物大分子提取与分离 29

2.1 实验材料的处理 29

2.2 生物材料处理的常用方法 34

2.3 目的物分离与提取 39

2.4 目的物的沉淀分离 49

2.5 过滤与膜分离技术 58

2.6 溶剂萃取法 64

2.7 反胶束萃取 72

2.8 超临界（流体）萃取 79

3 分光光度法及比色分析法 86

3.1 原理 86

3.2 分光光度计的构造 88

3.3 7220型分光光度计 89

4 电泳法 92

4.1 电泳的基本原理 92

4.2 影响电泳的主要因素 92

4.3 区带电泳的分类 93

4.4 几种常见的电泳方法 94

5 层析技术 98

5.1 层析技术概述 98

5.2 凝胶层析 105

5.3 离子交换层析 115

5.4 亲和层析 122

5.5 具体的一些层析方法 129

5.6 高效液相色谱 134

6 离心技术 145

6.1 基本原理 145

6.2 离心机的主要构造和类型 146

6.3 离心技术的应用 148

6.4 电动离心机的使用方法及注意事项 150

7 透析 151

7.1 膜 151

7.2 溶剂 151

7.3 物理条件 152

7.4 董南（Donnan）膜平衡 152

第二部分 生物化学实验 155

实验1 生物化学基础实验 155

实验1.1 糖类的性质实验（糖的颜色反应） 155

实验1.2 糖类的性质实验（糖的还原作用） 157

实验1.3 总糖的测定——硫酸蒽酮法 158

实验1.4 血糖的定量测定 161

实验1.5 3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量 164

实验1.6 糖的薄层层析 166

实验1.7 粗脂肪的定量测定——索氏抽提法 171

实验1.8 脂肪酸的β-氧化 173

实验1.9 碘值的测定 174

实验1.10 酸价的测定 177

实验1.11 胆固醇的测定 178

实验1.12 卵磷脂的提取及鉴定 182

实验1.13 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 183

实验1.14 氨基酸分离——双向层析法 186

实验1.15 蛋白质的沉淀反应、颜色反应及等电点的测定 189

实验1.16 双缩脲法测定蛋白质含量 197

实验1.17 Folin-酚法测定蛋白质含量 199

实验1.18 微量凯氏定氮法 201

实验1.19 SDS-PAGE测定蛋白质分子量 205

实验1.20 葡聚糖凝胶层析脱盐 212

实验1.21 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 215

实验1.22 血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳 221

实验1.23 考马斯亮蓝法测蛋白质浓度 224

实验1.24 紫外吸收法测定蛋白质含量 226

实验1.25 脲酶Km值简易测定法 229

实验1.26 正交法测定几种因素对酶活力的影响 231

实验1.27 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 235

实验1.28 酶的性质及其影响因素 236

实验1.29 硫酸铵分级沉淀及透析脱盐纯化过氧化氢酶 240

实验1.30 淀粉酶活力的测定 242

实验1.31 血清乳酸脱氢酶同工酶测定 245

实验1.32 酵母核糖酸的提取 250

实验1.33 RNA的测定——定磷法 252

实验1.34 钼酸铵比色法测定L-抗坏血酸的含量 254

实验1.35 还原型维生素C的测定 256

实验1.36 总维生素C的测定——2,4-二硝基苯肼比色法 259

实验1.37 维生素A的提取及含量测定 262

实验1.38 胡萝卜素的柱层析分离法 263

实验1.39 叶绿素含量的测定 266

实验1.40 细胞色素氧化酶作用及其抑制 267

实验2 综合性实验 269

实验2.1 植物基因组DNA的提取和浓度测定 269

实验2.2 植物基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳 270

实验2.3 质粒DNA的提取和纯化 271

实验2.4 PCR基因扩增 273

实验2.5 总RNA的提取 275

实验2.6 DNA重组技术——酶切、连接 276

实验2.7 DNA重组技术连接 278

实验2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 279

实验2.9 重组质粒的筛选 281

实验2.10 重组质粒的筛选（抗生素平板筛选和α互补筛选） 282

实验3 设计性实验 285

实验3.1 双孢菇多糖分离纯化与性质测定 285

实验3.2 大豆磷脂提取工艺 287

实验3.3 大豆磷脂的定量测定 288

实验3.4 植物叶蛋白的提取 289

实验3.5 植物组织中核酸的提取和测定 292

附录 296

1 清洗液的种类、去污原理及配制方法 296

2 常用核酸蛋白换算数据 296

3 常用表 297

主要参考文献 312