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第一章 生物大分子的基本制备技术 1

一、材料选择及预处理 1

二、细胞的破碎及细胞器的分离 2

三、提取 5

（一）蛋白质和酶的提取 5

（二）核酸的提取 7

四、分离纯化 8

（一）蛋白质和酶的分离纯化 9

（二）核酸的分离纯化 12

五、浓缩、干燥、保存 13

六、实验实例 13

（一）人胎盘丙种球蛋白的制备 13

（二）胰岛素的制备 15

（三）碱性磷酸酶的提取分离及比活性的测定 17

（四）具有生物活性DNA的制备 22

（五）酵母RNA的提取和定性 24

第二章 分光光度法 27

一、基本原理 27

二、分光光度计的结构原理 31

（一）光源 31

（二）单色器 33

（三）狭缝 34

（四）比色杯 34

（五）检测系统 35

三、实验实例 36

（一）考马斯亮兰法测定蛋白质含量 36

（二）紫外吸收法测定核酸的含量 38

（三）血糖定量（邻甲苯胺比色法） 41

（四）谷丙转氨酶活性的测定（赖氏法） 43

第三章 纸上分配层析技术 48

一、基本原理 49

二、影响Rf值的主要因素 50

（一）物质结构与极性的影响 51

（二）层析溶剂的影响 52

（三）pH的影响 53

（四）展开方式与Rf值的关系 54

（五）温度的影响 54

（六）滤纸的影响 54

三、具体操作 56

（一）样品的处理 56

（二）点样 56

（三）展开 57

（四）显色 62

（五）Rf值测量 64

（六）定量分析 64

四、实验实例：圆形滤纸层析法分离氨基酸 65

第四章 离子交换层析技术 68

一、基本原理 68

二、交换剂 71

（一）交换剂的基本类型 71

（二）交换剂的选择 74

（三）交换剂的处理、再生与转型 78

三、离子交换层析的方法 81

（一）层析柱 81

（二）装柱与加样 82

（三）洗脱与收集 83

四、实验实例 89

（一）离子交换树脂法分离核苷酸 89

（二）离子交换层析分离氨基酸 92

第五章 凝胶层析技术 95

一、基本原理 95

二、常用于凝胶层析的凝胶种类 98

三、凝胶层析操作 101

（一）凝胶的选择和用量 101

（二）凝胶的制备 103

（三）凝胶柱的制备 104

（四）装柱 105

（五）凝胶柱平衡 106

（六）上样 107

（七）洗脱 109

（八）样品的检测 110

四、凝胶柱的保存、干燥和再生 110

五、实验实例：凝胶层析法测蛋白质分子量 112

第六章 亲和层析技术 116

一、基本原理 116

二、载体及载体选择 118

（一）载体 118

（二）常用凝胶 118

三、配基及配基的选择条件 121

（一）常用配基 122

（二）配基的选择 123

（三）配基浓度 125

（四）配基大小的选择 126

四、载体活化与配基的偶联 126

（一）载体对配基固相化的影响 126

（二）载体的活化及配基偶联 128

五、吸附和洗脱 133

（一）影响吸附的因素 133

（二）常用洗脱方法 134

（三）亲和柱的再生 135

六、实验实例：亲和层析法提纯胰蛋白酶 135

第七章 电泳技术 140

一、基本原理 140

二、影响电泳的几项因素 143

（一）溶液的离子强度 143

（二）电场强度 144

（三）溶液的pH值 145

（四）电渗现象 145

三、电泳技术的分类及应用 146

（一）滤纸电泳 146

（二）琼脂和琼脂糖凝胶电泳 148

（三）醋酸纤维素薄膜电泳 148

（四）聚丙烯酰胺凝胶电泳 149

四、实验实例 158

（一）血清蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳 158

（二）聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白 164

第八章 酶的固定化技术 172

一、固定化酶的主要制备方法 172

（一）吸附法 172

（二）包埋法 175

（三）共价化学偶联法 176

（四）直接交联固相法 178

（五）固定化细胞法 179

二、固定化酶的性质及应用 180

（一）固定化酶的性质 180

（二）固定化方法的选择及应用 181

三、实验实例：糖化酶的固定化 185

第九章 离心技术 191

一、离心分离的基本原理 191

（一）沉降和离心 191

（二）离心力和沉降速度 192

二、离心技术的应用 194

（一）离心机的类型和用途 194

（二）制备超速离心技术 197

三、实验实例：蔗糖密度梯度离心分离RNA混合物 203

第十章 几种生化产品的制备工艺 209

一、胰岛素－胰酶联产工艺 209

二、工业胰酶的制备工艺 215

三、脑氨肽的制备工艺 217

四、胆固醇的制备工艺 219

五、胃膜素－胃蛋白酶联产工艺 221

六、胸腺素的制备工艺 224

七、人绒毛膜促性腺激素（HCG）的制备工艺 227

八、溶菌酶的制备工艺 231

九、肝素钠的制备工艺 234

十、血红素的制备工艺 241

十一、尿激酶的制备工艺 243

十二、SOD的制备工艺 249

十三、胱氨酸的制备工艺 252

十四、植酸的生产工艺 257

十五、植酸钙的生产工艺 258

第十一章 常规与临床检验实验 260

一、蛋白质的颜色反应 260

二、蛋白质的变性、沉淀、凝固反应 268

三、酪蛋白的提取 272

四、酪蛋白的等电点测定 274

五、微量凯氏定氮法 275

六、维生素C含量的测定 282

七、酶的性质实验 284

八、脂肪酸的β－氧化 289

九、血尿素氮测定 291

十、血乳酸测定 294

十一、血尿酸测定 297

十二、血清胆固醇测定 299

十三、血红蛋白的定量测定 301

十四、尿糖定性实验 302

十五、尿肌酐测定 303

十六、尿中酮体定性实验 306