第一篇 形态学与病理学 3
第一章 光学显微镜技术 3
第一节 概说 3
第二节 各种显微镜的性能和使用 4
第三节 显微照相技术 10
第四节 制片技术 14
第二章 组织化学 105
第一节 固定与制片 105
第二节 蛋白质、糖类、脂质及核酸组织化学反应 107
第三节 酶组织化学 135
第四节 免疫组织化学 165
第五节 原位核酸分子杂交 190
第六节 原位聚合酶链反应及其他原位标记技术 236
第三章 电子显微镜技术 241
第一节 超薄切片技术 241
第二节 扫描电镜标本制备技术 252
第三节 冷冻复型电镜技术 260
第四节 电镜细胞化学 263
第五节 免疫电镜技术 279
第六节 扫描隧道显微镜标本制备技术 296
第七节 电镜生物X射线微区分析技术 305
第四章 定量形态学 316
第一节 研究范围 316
第二节 基本原理 317
第三节 样本的采集及制备 317
第四节 测试工具 332
第五节 二维图像参数 347
第六节 体视学参数 359
第七节 结构成份总量计算 387
第八节 数值修约和书写表达 388
第九节 形态计量学参数的应用 390
第十节 定量细胞化学 410
第十一节 流式细胞技术 413
第二篇 细胞生物学 429
第一章 细胞和器官培养技术 429
第一节 人和动物组织的原代培养 429
第二节 培养细胞的传代 431
第三节 人皮肤成纤维细胞培养 432
第四节 人外周血淋巴细胞培养 433
第五节 人羊水细胞培养 434
第六节 人绒毛膜细胞培养 435
第七节 培养细胞的冻存与复苏 436
第八节 器官培养 437
第九节 细胞杂交技术 440
第二章 细胞生物学研究技术 444
第一节 培养细胞增殖动力学分析 444
第二节 体外细胞系的建立 447
第三节 放射自显影技术 451
第四节 缩时电影显微照相术 456
第五节 培养细胞的显微注射法 457
第六节 细胞骨架及核骨架技术 458
第三章 细胞分离技术 461
第一节 细胞分离的一般技术和注意事项 461
第二节 液体样品中的细胞分离 466
第三节 从组织器官分离细胞 469
第四节 肝脏灌流分离肝细胞 472
第五节 细胞淘洗法 474
第六节 细胞电泳分离技术 476
第四章 细胞通讯研究技术 482
第一节 前言 482
第二节 细胞通讯研究方法 483
第三节 细胞通讯研究方法的应用和实验设计 489
第一节 凝胶过滤层析技术 493
第一章 层析技术 493
第三篇 生物化学与生物物理学 493
第二节 离子交换层析技术 504
第三节 亲和层析技术 509
第四节 吸附层析技术 515
第二章 电泳技术 519
第一节 电泳技术的基本原理及电泳类型 519
第二节 纸电泳和醋酸纤维素薄膜电泳 521
第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 521
第四节 琼脂糖凝胶电泳 527
第五节 等电聚焦 531
第六节 细胞电泳 532
第七节 毛细管电泳 533
第八节 Phast系统 535
第一节 利用溶解度差别的分离方法 537
第三章 蛋白质分离纯化技术 537
第二节 利用分子大小不同的分离纯化方法 539
第三节 根据蛋白质分子带电性质不同的分离方法 545
第四节 利用蛋白质吸附性质不同的分离方法 549
第五节 利用蛋白质的特异性配体分离方法--亲和层析 549
第四章 蛋白质分子量测定技术 551
第一节 离心技术测定大分子物质的分子量 551
第二节 凝胶过滤层析法测定大分子物质的分子量 554
第三节 十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定大分子物质的分子量 555
第五章 蛋白质定量测定技术 557
第一节 凯氏定氮法 557
第二节 双缩脲法 558
第三节 Folin(福林)-酚试剂法(Lowry法) 559
第四节 紫外分光光度法 561
第五节 考马斯亮蓝G-250染色法 561
第六节 BCA法 562
第一节 化学分析法 564
第六章 蛋白质序列分析方法 564
第二节 测定核苷酸的顺序推断蛋白质的一级结构 574
第七章 蛋白质折叠、磷酸化、转运和分泌的研究方法 576
第一节 蛋白质折叠 576
第二节 蛋白质磷酸化 579
第三节 蛋白质的转运和分泌 583
第八章 DNA和RNA的提取 586
第一节 DNA的提取 586
第二节 DNA浓度测定 592
第三节 DNA的纯化 592
第四节 DNA溶液的浓缩与储存 594
第五节 细菌基因组DNA的储备 595
第六节 RNA的提取 596
第七节 从小量样品中同时提取高分子量DNA和RNA 601
第一节 基本概念 604
第九章 酶活力及其动力学常数的测定 604
第二节 酶活力的测定方法 605
第三节 同工酶的测活 612
第四节 Km及Vm的测定 613
第十章 生物膜研究技术 616
第一节 细胞膜的分离及某些成份的生化测定 616
第二节 差示扫描量热技术 625
第三节 自旋标记顺磁共振波谱技术 631
第四节 冰冻断裂电子显微镜技术 640
第五节 荧光偏振技术 648
第六节 激光拉曼技术 650
第七节 核磁共振技术 654
第八节 圆二色性技术 657
第十一章 自由基研究技术 663
第一节 生物化学方法 663
第二节 化学发光法 670
第三节 自旋捕捉技术 676
第一节 蛋白多糖和糖胺多糖 679
第十二章 细胞外间质成分的实验技术 679
第二节 胶原蛋白 684
第三节 弹性蛋白 690
第四节 结构糖蛋白 691
第四篇 分子生物学 697
第一章 重组质粒 697
第一节 质粒DNA的抽提与纯化 697
第二节 外源DNA片段与质粒载体的重组 702
第三节 大肠杆菌感受态细胞的制备和重组DNA的转化 706
第四节 重组质粒DNA克隆的筛选和鉴定 712
第五节 利用粘粒载体构建基因组DNA文库 718
第二章 重组噬菌体 731
第一节 λ噬菌体的培养纯化和DNA的提取 731
第二节 外源DNA与λ噬菌体载体重组 736
第三节 重组λ噬菌体DNA的体外包装 741
第四节 重组λ噬菌体DNA克隆的筛选和分析 744
第五节 单链丝状噬菌体M13的繁殖及其DNA的制备 749
第三章 大片段DNA分析技术 755
第一节 大分子基因组DNA的制备与酶解 755
第二节 脉冲场梯度凝胶电泳 757
第四章 人工酵母梁色体克隆 761
第一节 YAC载体 761
第二节 宿主菌 762
第三节 YAC文库构建的主要步骤 762
第四节 YAC克隆的筛选和验证 766
第五节 YAC文库的贮存 767
第六节 YAC克隆的应用 767
第七节 存在问题 768
第五章 mRNA的统纯化和分析 770
第一节 RNA提取 770
第二节 mRNA纯化 770
第三节 Northern印迹杂交 771
第四节 DNA酶Sl分析 773
第五节 RNA酶保护分析 775
第六节 cDNA合成 778
第七节 mRNA末端分析--RACE 781
第八节 转录中止的RNA恢复延伸分析 783
第六章 cDNA文库的构建 787
第一节 外源双链cDNA的合成与修饰 787
第二节 克隆用噬菌体载体 793
第三节 双链cDNA的分子克隆 797
第七章 cDNA文库的筛选和扩增 801
第一节 cDNA文库的筛选 801
第二节 cDNA文库的扩增 808
第三节 递减杂交 809
第八章 寡核苷酸引物及探针的制备 813
第一节 寡核苷酸探针的设计 813
第二节 寡核苷酸的合成 813
第三节 寡核苷酸的纯化与质量鉴定 815
第四节 寡核苷酸的标记 817
第九章 DNA聚合酯链反应(PCR) 819
第一节 基本原理与操作 819
第二节 未知序列的扩增 823
第三节 PCR产物直接测序 825
第四节 PCR体外致突变 826
第五节 PCR中低效非特异扩增和PCR产物夹带污染的对策 828
第六节 用少量细胞直接进行聚合酶链反应 829
第七节 干血样和石蜡包埋组织的PCR方法 831
第八节 PCR扩增大片段DNA 832
第十章 DNA限制性内切酶图谱分析 834
第一节 双酶解法 834
第二节 DNA-端标记加部分酶解法 835
第三节 片段杂交法 835
第四节 DNA复制法 836
第六节 双酶解法操作步骤 837
第五节 根据全序列推测法 837
第七节 DNA一端标记加部分酶解法操作步骤 839
第八节 片段杂交法操作步骤 840
第十一章 核酸序列分析 842
第一节 化学法测定DNA核苷酸序列 842
第二节 末端终止法测定DNA核苷酸序列 865
第三节 RNA核苷酸序列测定简介 889
第十二章 重组DNA转染哺乳类细胞及其因表达产物的检测 900
第一节 哺乳类基因转移的遗传选择标记 900
第二节 外源基因导入哺乳类细胞的载体 901
第三节 外源DNA导入哺乳类细胞的方法 904
第四节 基因表达产物的检测 909
第十三章 基因表达调控的研究技术 917
第一节 核抽提物的制备 917
第二节 DNA探针的制备 919
第四节 离体DNase I足迹分析 923
第三节 凝胶阻滞分析 923
第五节 甲基化保护分析 926
第六节 蛋白质-核酸紫外交联 927
第七节 应用生物素/链亲和素系统纯化DNA结合蛋白 929
第八节 滤膜结合法分离蛋白结合的DNA 932
第九节 编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定 934
第十节 Southwestern印迹杂交 937
第十一节 DNase I超敏感位点的测定 940
第十二节 氯霉素乙酰转移酶分析(CAT分析) 943
第十三节 荧光素酶检测系统 944
第十四节 转录起始位点的测定 947
第十五节 体外转录体系 948
第十四章 转基因动物技术 950
第一节 原理和方法 950
第二节 仪器试剂 953
第三节 实验动物的规格和准备 956
第四节 操作方法 959
第五节 转基因动物技术中有关的分子生物学实验方法 971
第六节 讨论 975
第五篇 医学遗传学 981
第一章 细胞遗传学研究技术 981
第一节 实验室装备及常规技术 981
第二节 染色体标本制备法 989
第三节 高分辨染色体分析 999
第四节 染色体脆位点显示 1002
第五节 姐妹染色单体交换及微核 1003
第六节 去透明带地鼠卵穿透试验和人精子染色体离体检测系统 1005
第七节 建立永久性类淋巴母细胞样细胞系 1014
第八节 间期核研究(性染色质) 1016
第九节 染色体原位杂交 1018
第二章 生化遗传学研究技术 1028
第一节 氨基酸代谢病的筛查 1028
第二节 细菌抑制法测血氨基酸--Guthrie试验 1038
第三节 溶酶体酶活性测定 1041
第四节 粘多糖初筛和35S参入试验 1055
第三章 分子遗传学研究技术 1061
第一节 DNA探针的分离和制备 1061
第二节 Sorthern印迹杂交 1078
第三节 PCR及相关技术在基因诊断中的应用 1100
第四节 多态性连锁分析 1108
第五节 亲子鉴定和个体识别 1121
第六节 产前诊断与遗传咨询 1128
第四章 遗传毒理学研究技术 1132
第一节 概述 1132
第二节 基因突变的测定 1133
第三节 染色体畸变的检测 1140
第四节 DNA初级损伤的检测 1145
第五节 细胞转化试验 1149
第六节 分子生物学技术在遗传毒理学中的应用 1152