现代医学实验技巧全书 上PDF电子书下载

第一篇 形态学与病理学 3

第一章 光学显微镜技术 3

第一节 概说 3

第二节 各种显微镜的性能和使用 4

第三节 显微照相技术 10

第四节 制片技术 14

第二章 组织化学 105

第一节 固定与制片 105

第二节 蛋白质、糖类、脂质及核酸组织化学反应 107

第三节 酶组织化学 135

第四节 免疫组织化学 165

第五节 原位核酸分子杂交 190

第六节 原位聚合酶链反应及其他原位标记技术 236

第三章 电子显微镜技术 241

第一节 超薄切片技术 241

第二节 扫描电镜标本制备技术 252

第三节 冷冻复型电镜技术 260

第四节 电镜细胞化学 263

第五节 免疫电镜技术 279

第六节 扫描隧道显微镜标本制备技术 296

第七节 电镜生物X射线微区分析技术 305

第四章 定量形态学 316

第一节 研究范围 316

第二节 基本原理 317

第三节 样本的采集及制备 317

第四节 测试工具 332

第五节 二维图像参数 347

第六节 体视学参数 359

第七节 结构成份总量计算 387

第八节 数值修约和书写表达 388

第九节 形态计量学参数的应用 390

第十节 定量细胞化学 410

第十一节 流式细胞技术 413

第二篇 细胞生物学 429

第一章 细胞和器官培养技术 429

第一节 人和动物组织的原代培养 429

第二节 培养细胞的传代 431

第三节 人皮肤成纤维细胞培养 432

第四节 人外周血淋巴细胞培养 433

第五节 人羊水细胞培养 434

第六节 人绒毛膜细胞培养 435

第七节 培养细胞的冻存与复苏 436

第八节 器官培养 437

第九节 细胞杂交技术 440

第二章 细胞生物学研究技术 444

第一节 培养细胞增殖动力学分析 444

第二节 体外细胞系的建立 447

第三节 放射自显影技术 451

第四节 缩时电影显微照相术 456

第五节 培养细胞的显微注射法 457

第六节 细胞骨架及核骨架技术 458

第三章 细胞分离技术 461

第一节 细胞分离的一般技术和注意事项 461

第二节 液体样品中的细胞分离 466

第三节 从组织器官分离细胞 469

第四节 肝脏灌流分离肝细胞 472

第五节 细胞淘洗法 474

第六节 细胞电泳分离技术 476

第四章 细胞通讯研究技术 482

第一节 前言 482

第二节 细胞通讯研究方法 483

第三节 细胞通讯研究方法的应用和实验设计 489

第一节 凝胶过滤层析技术 493

第一章 层析技术 493

第三篇 生物化学与生物物理学 493

第二节 离子交换层析技术 504

第三节 亲和层析技术 509

第四节 吸附层析技术 515

第二章 电泳技术 519

第一节 电泳技术的基本原理及电泳类型 519

第二节 纸电泳和醋酸纤维素薄膜电泳 521

第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 521

第四节 琼脂糖凝胶电泳 527

第五节 等电聚焦 531

第六节 细胞电泳 532

第七节 毛细管电泳 533

第八节 Phast系统 535

第一节 利用溶解度差别的分离方法 537

第三章 蛋白质分离纯化技术 537

第二节 利用分子大小不同的分离纯化方法 539

第三节 根据蛋白质分子带电性质不同的分离方法 545

第四节 利用蛋白质吸附性质不同的分离方法 549

第五节 利用蛋白质的特异性配体分离方法--亲和层析 549

第四章 蛋白质分子量测定技术 551

第一节 离心技术测定大分子物质的分子量 551

第二节 凝胶过滤层析法测定大分子物质的分子量 554

第三节 十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定大分子物质的分子量 555

第五章 蛋白质定量测定技术 557

第一节 凯氏定氮法 557

第二节 双缩脲法 558

第三节 Folin(福林)-酚试剂法(Lowry法) 559

第四节 紫外分光光度法 561

第五节 考马斯亮蓝G-250染色法 561

第六节 BCA法 562

第一节 化学分析法 564

第六章 蛋白质序列分析方法 564

第二节 测定核苷酸的顺序推断蛋白质的一级结构 574

第七章 蛋白质折叠、磷酸化、转运和分泌的研究方法 576

第一节 蛋白质折叠 576

第二节 蛋白质磷酸化 579

第三节 蛋白质的转运和分泌 583

第八章 DNA和RNA的提取 586

第一节 DNA的提取 586

第二节 DNA浓度测定 592

第三节 DNA的纯化 592

第四节 DNA溶液的浓缩与储存 594

第五节 细菌基因组DNA的储备 595

第六节 RNA的提取 596

第七节 从小量样品中同时提取高分子量DNA和RNA 601

第一节 基本概念 604

第九章 酶活力及其动力学常数的测定 604

第二节 酶活力的测定方法 605

第三节 同工酶的测活 612

第四节 Km及Vm的测定 613

第十章 生物膜研究技术 616

第一节 细胞膜的分离及某些成份的生化测定 616

第二节 差示扫描量热技术 625

第三节 自旋标记顺磁共振波谱技术 631

第四节 冰冻断裂电子显微镜技术 640

第五节 荧光偏振技术 648

第六节 激光拉曼技术 650

第七节 核磁共振技术 654

第八节 圆二色性技术 657

第十一章 自由基研究技术 663

第一节 生物化学方法 663

第二节 化学发光法 670

第三节 自旋捕捉技术 676

第一节 蛋白多糖和糖胺多糖 679

第十二章 细胞外间质成分的实验技术 679

第二节 胶原蛋白 684

第三节 弹性蛋白 690

第四节 结构糖蛋白 691

第四篇 分子生物学 697

第一章 重组质粒 697

第一节 质粒DNA的抽提与纯化 697

第二节 外源DNA片段与质粒载体的重组 702

第三节 大肠杆菌感受态细胞的制备和重组DNA的转化 706

第四节 重组质粒DNA克隆的筛选和鉴定 712

第五节 利用粘粒载体构建基因组DNA文库 718

第二章 重组噬菌体 731

第一节 λ噬菌体的培养纯化和DNA的提取 731

第二节 外源DNA与λ噬菌体载体重组 736

第三节 重组λ噬菌体DNA的体外包装 741

第四节 重组λ噬菌体DNA克隆的筛选和分析 744

第五节 单链丝状噬菌体M13的繁殖及其DNA的制备 749

第三章 大片段DNA分析技术 755

第一节 大分子基因组DNA的制备与酶解 755

第二节 脉冲场梯度凝胶电泳 757

第四章 人工酵母梁色体克隆 761

第一节 YAC载体 761

第二节 宿主菌 762

第三节 YAC文库构建的主要步骤 762

第四节 YAC克隆的筛选和验证 766

第五节 YAC文库的贮存 767

第六节 YAC克隆的应用 767

第七节 存在问题 768

第五章 mRNA的统纯化和分析 770

第一节 RNA提取 770

第二节 mRNA纯化 770

第三节 Northern印迹杂交 771

第四节 DNA酶Sl分析 773

第五节 RNA酶保护分析 775

第六节 cDNA合成 778

第七节 mRNA末端分析--RACE 781

第八节 转录中止的RNA恢复延伸分析 783

第六章 cDNA文库的构建 787

第一节 外源双链cDNA的合成与修饰 787

第二节 克隆用噬菌体载体 793

第三节 双链cDNA的分子克隆 797

第七章 cDNA文库的筛选和扩增 801

第一节 cDNA文库的筛选 801

第二节 cDNA文库的扩增 808

第三节 递减杂交 809

第八章 寡核苷酸引物及探针的制备 813

第一节 寡核苷酸探针的设计 813

第二节 寡核苷酸的合成 813

第三节 寡核苷酸的纯化与质量鉴定 815

第四节 寡核苷酸的标记 817

第九章 DNA聚合酯链反应(PCR) 819

第一节 基本原理与操作 819

第二节 未知序列的扩增 823

第三节 PCR产物直接测序 825

第四节 PCR体外致突变 826

第五节 PCR中低效非特异扩增和PCR产物夹带污染的对策 828

第六节 用少量细胞直接进行聚合酶链反应 829

第七节 干血样和石蜡包埋组织的PCR方法 831

第八节 PCR扩增大片段DNA 832

第十章 DNA限制性内切酶图谱分析 834

第一节 双酶解法 834

第二节 DNA-端标记加部分酶解法 835

第三节 片段杂交法 835

第四节 DNA复制法 836

第六节 双酶解法操作步骤 837

第五节 根据全序列推测法 837

第七节 DNA一端标记加部分酶解法操作步骤 839

第八节 片段杂交法操作步骤 840

第十一章 核酸序列分析 842

第一节 化学法测定DNA核苷酸序列 842

第二节 末端终止法测定DNA核苷酸序列 865

第三节 RNA核苷酸序列测定简介 889

第十二章 重组DNA转染哺乳类细胞及其因表达产物的检测 900

第一节 哺乳类基因转移的遗传选择标记 900

第二节 外源基因导入哺乳类细胞的载体 901

第三节 外源DNA导入哺乳类细胞的方法 904

第四节 基因表达产物的检测 909

第十三章 基因表达调控的研究技术 917

第一节 核抽提物的制备 917

第二节 DNA探针的制备 919

第四节 离体DNase I足迹分析 923

第三节 凝胶阻滞分析 923

第五节 甲基化保护分析 926

第六节 蛋白质-核酸紫外交联 927

第七节 应用生物素/链亲和素系统纯化DNA结合蛋白 929

第八节 滤膜结合法分离蛋白结合的DNA 932

第九节 编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定 934

第十节 Southwestern印迹杂交 937

第十一节 DNase I超敏感位点的测定 940

第十二节 氯霉素乙酰转移酶分析(CAT分析) 943

第十三节 荧光素酶检测系统 944

第十四节 转录起始位点的测定 947

第十五节 体外转录体系 948

第十四章 转基因动物技术 950

第一节 原理和方法 950

第二节 仪器试剂 953

第三节 实验动物的规格和准备 956

第四节 操作方法 959

第五节 转基因动物技术中有关的分子生物学实验方法 971

第六节 讨论 975

第五篇 医学遗传学 981

第一章 细胞遗传学研究技术 981

第一节 实验室装备及常规技术 981

第二节 染色体标本制备法 989

第三节 高分辨染色体分析 999

第四节 染色体脆位点显示 1002

第五节 姐妹染色单体交换及微核 1003

第六节 去透明带地鼠卵穿透试验和人精子染色体离体检测系统 1005

第七节 建立永久性类淋巴母细胞样细胞系 1014

第八节 间期核研究(性染色质) 1016

第九节 染色体原位杂交 1018

第二章 生化遗传学研究技术 1028

第一节 氨基酸代谢病的筛查 1028

第二节 细菌抑制法测血氨基酸--Guthrie试验 1038

第三节 溶酶体酶活性测定 1041

第四节 粘多糖初筛和35S参入试验 1055

第三章 分子遗传学研究技术 1061

第一节 DNA探针的分离和制备 1061

第二节 Sorthern印迹杂交 1078

第三节 PCR及相关技术在基因诊断中的应用 1100

第四节 多态性连锁分析 1108

第五节 亲子鉴定和个体识别 1121

第六节 产前诊断与遗传咨询 1128

第四章 遗传毒理学研究技术 1132

第一节 概述 1132

第二节 基因突变的测定 1133

第三节 染色体畸变的检测 1140

第四节 DNA初级损伤的检测 1145

第五节 细胞转化试验 1149

第六节 分子生物学技术在遗传毒理学中的应用 1152