第一节 材料的选择与处理 3
一 材料的选择 3
第一章 生命大分子物质的制备 3
二材料的处理 4
第二节 确立测定方法 5
一 目的与要求 5
二 常用的测定方法 5
第三节 细胞的破碎 8
一 机械破碎 9
二 溶胀和自溶 9
一 抽提的含义 10
二 抽提有效成分的影响因子 10
三 化学处理 10
第四节 抽提 10
四 生物酶降解 10
第五节 浓缩 13
一 沉淀法 14
二 吸附法 14
三 超过滤法 14
四 透析法 14
一 纯化方案的设计 15
第六节 纯化方案的设计与评价 15
五 减压蒸馏法 15
六 冰冻干燥法 15
二 纯化方案的评价 17
第七节 有效成分纯度和性质的分析 18
第八节 应用实例 18
思考题与参考文献 19
一 基本原理 23
二 制备蛋白质 23
第一节 基本原理与沉淀类型 23
第二章 沉淀法 23
三 制备核酸 33
第二节 应用实例 36
一 脾磷酸二酯酶的纯化 36
二 细菌染色化DNA的制备 36
思考题与参考文献 37
第三章 吸附层析 39
第一节 吸附柱层析 40
一 常用术语 40
二 基本原理 41
三 吸附剂 42
四 洗脱剂 45
五 层析柱的制备与层析操作 45
六 应用与实例 48
第二节 薄层层析 51
一 操作及注意事项 52
二 应用实例 58
第三节 聚酰胺簿膜层析 59
一 基本原理 59
二 应用实例 59
思考题与参考文献 63
第四章 疏水层析 64
第一节 基本原理 64
第二节 操作与应用 65
一 层析拄的制备 65
二 加样与洗脱 66
三 应用实例 66
思考题与参考文献 69
第五章 离子交换层析 70
第一节 基本原理 70
一 分类 72
第二节 离子交换剂的分类及性质 72
二 性质 80
第三节 离子交换剂与缓冲液的选择 88
一 离了交换剂的选择 88
二 缓冲液的选择 89
三 加样量的确定 92
第四节 操作 92
一 离子交换剂的处理、再生和转型 92
二 分离物质的交换 93
三 物质的洗脱与收集 94
一 制备、纯化生命物质 96
第五节 应用 96
二 测定蛋白质的等电点 99
思考题与参考文献 100
第六章 凝胶过滤 101
第一节 凝胶的分类及性质 101
一 葡聚糖凝胶 102
二 琼脂糖凝胶 104
三 聚丙烯酰胺凝胶 106
四 Sephacry1 106
五 Superdex 108
第二节 基本原理 109
一 凝胶的选择和处理 111
第三节 操作 111
二 凝胶柱的制备 112
三 加样与洗脱 113
四 凝胶住的再生及保存 117
第四节 应用 118
一 脱盐和浓缩 118
二 分离生命物质 118
三 去热源物质 120
四 测定分子质量 120
思考题与参考文献 123
五 其他 123
第七章 亲和层析 124
第一节 基本原理 124
第二节 操作 126
一 基质的选择 126
二 配体的选择 127
三 亲和吸附剂的制备 129
四 特异性吸附 131
五 分离大分子物质 132
一 在配体和基质之间引入“手臂” 134
六 亲和层析柱的再生 134
第三节 提高吸附剂的操作容量 134
二 增加配体取代的程序 135
三 配体与基质以最小的链连接 137
四 基质多孔性的影响 137
五 其他 137
第四节 应用实例 138
一 纯化大分子物质 138
二 研究酶的结构与功能 141
三 实例 142
思考题与参考文献 145
第一节 基本原理 146
一 多缓冲剂和多缓冲剂交换剂 146
二 聚焦层析原理 147
第二节 操作 150
一 多缓冲剂的选择 150
二 多缓冲交换剂用量的确定 150
三 多缓冲交换剂的处理 151
四 样品的准备 152
五 上样和洗脱 152
一 分离模型蛋白质 153
六 样品中多缓冲剂的去除 153
第三节 应用 153
二 分离复杂的物质 154
三 鉴定某些酶的性质 154
思考题与参考文献 156
第九章 高效液相色谱 157
第一节 基本原理 158
第二节 反相高效液相色谱 161
一 固定相、流动相和色谱柱 162
二 分离纯化糖基化白蛋白肽片段 164
一 定性和定量分析 166
第三节 应用 166
二 测定酶活性 167
三 测定蛋白质分子质量 167
四 分离核酸和蛋白质 168
思考题与参考文献 174
第十章 固定化的酶与微生物 175
第一节 制备方法 176
一 固定化酶 176
二 固定化微生物 179
一 酶的相对活力 180
第二节 制品的性质 180
二 活力曲线与最适pH值 181
三 稳定性 182
四 米氏常数 183
五 其他 184
第三节 应用 184
一 工业方面 184
二 医学方面 185
三 生化分析方面 186
四 应用实例 188
思考题与参考文献 190
第十一章 标记 193
第一节 核酸标记 193
一 标记物的制备及类型 193
二 非核素标记 194
三 核素标记 208
四 标记物纯化 211
五 探针的鉴定 213
六 应用实例 216
一 标记方法 220
第二节 蛋白质(酶、抗体)标记 220
二 核素和非核素标记 226
思考题与参考文献 234
第十二章 重组DNA 235
第一节 重组DNA的部件 236
一 工具酶 236
二 载体 238
三 目的基因 241
第二节 重组 247
一 黏性末端连接法 247
四 T-A连接法 249
五 同聚物加尾连接法 249
二 平端连接法 249
三 平黏连接法 249
六 人工接头连接法 250
第三节 DNA扩增 252
一 重组DNA导入宿主细胞 252
二 重组体的筛选与鉴定 254
三 表达产物的纯化 256
三 RCR扩增及其产物纯化 257
二 反转录合成第一链cDNA 257
一 分离总RNA和mRNA 257
第四节 应用实例 257
四 PCR产物的克隆 258
五 重组质粒的提取及限制性内切核酸酶分析 258
思考题与参考文献 260
第十三章 DNA序列测定 260
第一节 双脱氧链终止法 260
一 基本原理 260
二 载体系统 262
三 测序试剂 265
四 测序操作 268
五 变性电泳 271
六 序列读取 271
第二节 PCR法 273
一 直接测序 273
二 循环测序 274
第三节 化学降解法 275
一 测序原理 276
二 一般程序 277
三 具体操作 277
四 应用实例 280
思考题与参考文献 281
第十四章 生物芯片 282
第一节 基因芯片 282
一 基本原理和工作流程 282
二 制备及操作 285
三 应用实例 291
第二节 蛋白质芯片 296
一 原理及特点 297
二 制备与操作 297
三 应用实例 299
一 芯片实验室的特点 303
第三节 芯片实验室 303
二 应用实例 304
思考题与参考文献 307
第十五章 聚合酶链反应 308
第一节 基本原理 308
一 反应系统 308
二 反应过程及条件 313
第二节 PCR的类型 315
一 普通PCR 315
三 反转录PCR 316
二 原位PCR 316
四 反向PCR 317
五 不对称PCR 318
六 巢式PCR 318
七 彩色PCR 319
第三节 应用 320
一 构建cDNA文库 320
二 直接测序 320
三 标记DNA探针 320
四 寻找新基因 320
思考题与参考文献 321
五 检测环境中的致病菌与指示菌 321
第十六章 细胞凋亡 322
第一节 基本原理与主要特性 322
一 基本原理 322
二 主要特性 334
第二节 检测细胞凋亡的方法 337
一 形态学 337
二 DNA片段 339
三 酶活性与组蛋白 340
四 流式细胞仪 342
一 抗肿瘤药物的研究和开发 344
二 疾病的诊断和治 344
第三节 应用 344
思考题与参考文献 346
第十七章 生物传感器 347
一 离子选择电极 348
二 生物活性材料 349
一 类型 350
二 制备 350
第二节 类型与制备 350
第三节 应用 351
一 工业方面 351
二 医学方面 352
三 环境监测方面 353
思考题与参考文献 353
第十八章 电泳 355
第一节 基本原理 356
第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 358
一 基本原理 359
二 一般操作 364
第三节 琼脂糖凝胶和半干式聚丙烯酰胺凝胶电泳 383
一 琼脂糖凝胶电泳 384
三 半干式聚丙烯酰胺凝胶电泳（分离DNA） 387
第四节 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 388
一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 389
二 尿素-聚丙类酰胺凝胶电泳 390
三 SDS-尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳 391
第五节 聚丙烯酰胺凝胶电聚焦 392
一 基本原理 393
二 载体两性电解质的理化性质 393
三 载体两性电解质的pH范围与用量选择 394
四 测定蛋白质等电点的操作 395
第六节 毛细管电泳 399
一 基本原理与类型 399
二 电泳装置 402
三 应用实例 405
第七节 印迹法(转移电泳) 407
一 基本原理 408
二 操作及注意事项 409
三 应用 411
思考题与参考文献 413
一 抗体的性质 414
第十九章 免疫分析 414
第一节 抗体的性质、制备及纯化 414
二 多克隆抗体的制备 415
三 单克隆抗体的制备 421
四 抗体的检测 425
五 抗体的纯化 428
第二节 抗原抗体反应 430
一 凝集反应 430
二 免疫扩散 434
三 免疫电泳 436
五 免疫微球测定 449
四 固相免疫吸附（含ELISA） 449
思考题与参考文献 454
第二十章 气相色谱 456
第一节 基本原理 457
一 常用术语 457
二 原理 458
第二节 气相色谱仪的构造 460
一 载气流速的控制和测量 460
四 色谱柱 461
三 恒温室 461
二 进样系统 461
五 检定器 465
第三节 操作 466
一 操作要点 466
二 条件的选择 467
第四节 定性和定量检测 467
一 定性检测 467
二 定量检测 468
二 分析核酸 472
三 分析糖类物质 472
一 分析蛋白质和氨基酸 472
第五节 应用 472
四 分析脂肪酸 473
五 分析农药 474
思考题与参考文献 474
参考文献 475
附录 484
一、 常用数据 484
二、 常用缓冲液的配制 494
缩写词索引 499