第一章 家蚕的分子生物学 1
第一节 家蚕的生物学特性 1
1生活史 1
2蚕的外部形态 2
3家蚕的生长与发育 2
4养蚕的环境标准 3
第二节 杆状病毒基因组学 3
1杆状病毒及其侵染机制 3
2杆状病毒基因组学研究 7
3杆状病毒基因结构与功能 20
第三节 蚕蛹的小RNA研究 35
1蚕蛹小RNA的研究 35
2蛹mRNA-like小RNA的研究 43
第四节 家蚕蛹cDNA文库的构建和蛋白质组学 75
1家蚕蛹cDNA文库的构建 75
2家蚕蛹蛋白质组学 79
第五节 基于家蚕杆状病毒表面展示技术的膜蛋白组学 90
1基于家蚕杆状病毒表面展示技术分离膜蛋白的方法 91
第二章 以核型多角体病毒为载体的昆虫表达系统 98
第一节 昆虫细胞/NPV表达系统的原理和经典操作方法 98
1原理 98
2转移载体质粒的构建 98
3重组病毒的组建和筛选 101
第二节 最新发展的改进型操作方法 102
1 NPV DNA线性化 102
2 NPV DNA线性化并删除ORF1629 103
3在S．cerevisiae中YAC介导的NPV重组 103
4在E．coli中转座子介导的NPV重组 104
5体外定点重组 104
6 Bac to Bac系统 105
7杆状病毒表面展示技术 109
第三节 外源基因的表达、转录及转译后加工 112
1真核生物、病毒、细菌、霉菌等多种来源基因的表达 112
2转录后加工 112
3糖基化 113
4磷酸化、脂肪酰化和酰胺化 113
5蛋白水解 114
6细胞内定位和分泌 114
7高级结构的形成 114
第四节 昆虫细胞/NPV表达系统的优越性和缺陷 115
1昆虫细胞/NPV表达系统的优越性 115
2家蚕/BmNPV表达系统相对于Sf细胞/AcMNPV表达系统的优势 115
第五节 BmBacPAK病毒的组建 116
1 BmBacPAK病毒的组建技术 116
2 BmBacPAK病毒 118
第六节 BmBacPAK载体病毒在家蚕细胞中进行报告基因的表达 121
1质粒的构建 121
第七节 家蚕核型多角体病毒p26基因及同源重复区hr3的克隆和序列分析 125
第八节 家蚕核型多角体病毒同源重复区hr5的克隆和序列分析 128
1 BmNPV DNA KpnⅠ-D片段的克隆及两端序列分析 128
2 BmNPV hr5全序列分析 128
第九节 BmNPV hr5的重复起始区功能 130
1含BmNPV hr5结构的质粒在BmNPV感染的BmN细胞中的复制 130
2 pB hr5和pB hr5 a质粒在AcMNPV感染的Sf21细胞中的复制 131
3 AcMNPV的hr序列是一种增强子 131
4不同NPV在不同宿主细胞中功能和结构不同 132
第三章 家蚕组织细胞系的构建 133
第一节 家蚕细胞研究概述 133
1全能性和多能性昆虫干细胞 134
2限制性和单能性昆虫干细胞 137
第二节 家蚕组织细胞系的建立 140
1细胞系的核型分析 140
2细胞系的有丝分裂 141
3细胞系的同工酶检测 142
4细胞对BmNPV的敏感性分析 142
5家蚕胚胎细胞系的构建 143
6家蚕卵巢细胞系的建系方法 144
附录 145
1细胞培养用液的配制与消毒 145
2培养细胞的细胞生物学 147
3家蚕细胞显微注射技术 154
第四章 家蚕生物反应器及其应用 157
第一节 何谓家蚕生物反应器 157
1家蚕生物反应器的定义、分类及建立方法 157
2转基因家蚕 157
3家蚕杆状病毒表达载体系统（BmNPV） 159
第二节 利用家蚕生物反应器生产生物制品 162
1多肽与蛋白质类药物给药系统的研究状况 162
2家蚕生物反应器生产重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 169
3家蚕生物反应器表达霍乱毒素B亚基（CTB）与胰岛素B链融合蛋白对治疗糖尿病的研究 190
4家蚕生物反应器表达的人破骨细胞形成抑制因子及其突变体生物活性研究 230
5重组人促红细胞生成素（EPO）胶囊的药效学研究 235
6家蚕杆状病毒表达系统表达的人乳铁蛋白rhLF的药效学研究 237
第五章 家蚕生物反应器的应用前景 241
1家蚕生物反应器的特点 242
2家蚕生物反应器的主要应用方向 243
3家蚕生物反应器的主要应用现状 244
4家蚕生物反应器发展趋势 246
5家蚕生物反应器生产新型人用禽流感疫苗 247
第六章 家蚕生物反应器生产生物制品的标准 281
1重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子胶囊中试产品制造和检定规程草案 281
附件一 rhGM-CSF生物活性测定 285
附件二 外源病毒污染检查 287
附件三 ELISA检测rhGM-CSF含量 287
附件四 蛋白质电泳 288
附件五 家蚕表达的rhGM-CSF的纯化 289
2重组人的促红生成素（EPO）胶囊的中试产品制造和检定规程草案 290
附件一 ELISA检测EPO含量 294
附件二 家蚕表达的EPO的纯化 295
3重组人胰岛素（CTB）胶囊中试产品制造和检定规程草案 295
附件一 外源病毒污染检查 299
附件二 ELISA检测CTB含量 299
附件三 蛋白质电泳 300
附件四 家蚕表达人胰岛素（CTB）的纯化 302
4重组人破骨细胞形成抑制因子（OPG）胶囊中试产品制造和检定规程草案 302
5重组人乳铁蛋白（hLF）胶囊中试产品制造和检定规程草案 306
附件一 外源病毒污染检查 310
附件二 ELISA检测hLF含量 310
附件三 蛋白质电泳 311
附件四 家蚕表达的hLF的纯化 312
参考文献 314