第一篇 分子生物学实验技术及原理 1
第一章 常用工具与方法 1
第一节 载体 1
第二节 常用工具酶 9
第三节 电泳 14
第二章 核酸操作技术 21
第一节 DNA的定性和定量分析 21
第二节 RNA的定性和定量分析 30
第三节 DNA重组技术 40
第四节 核酸文库构建 44
第三章 蛋白质研究技术 52
第一节 蛋白质分离与纯化 52
第二节 蛋白质定量 56
第三节 蛋白质免疫印迹 61
第四节 流式细胞分析技术 64
第五节 免疫共沉淀 67
第四章 基因功能研究相关技术 71
第一节 基因表达与调节 71
第二节 转基因技术 78
第三节 基因敲除 81
第四节 基因沉默 84
第五章 细胞研究技术 88
第一节 细胞培养 88
第二节 细胞凋亡的检测 91
第二篇 分子生物学实验 95
第六章 DNA操作实验 95
实验一 质粒DNA的微量快速提取 95
实验二 外周血白细胞DNA的微量快速提取（离心柱法） 97
实验三 质粒DNA的酶切与鉴定 98
实验四 聚合酶链反应技术（PCR） 100
实验五 DNA序列测定（双脱氧测序银染法） 101
实验六 DNA印迹杂交技术（Southern印迹法） 106
实验七 DNA重组与鉴定 110
实验八 克隆化DNA的定点突变实验 113
第七章 RNA操作实验 116
实验一 肝总RNA的制备 116
实验二 Northern印迹法 118
实验三 利用RT-PCR对大鼠肝组织SOD基因进行半定量分析 121
实验四 实时荧光定量PCR（2-△△Ct法）检测大鼠不同组织中碱性成纤维细胞生长因子bFGF基因表达水平的差异 123
实验五 cDNA文库构建 128
第八章 蛋白质研究相关实验 134
实验一 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定 134
实验二 肝组织蛋白质定量 136
实验三 小鼠肝β-actin蛋白免疫印迹检测 140
实验四 免疫组织化学 144
实验五 免疫荧光染色方法 146
实验六 流式细胞仪对血小板活化的测定 148
实验七 免疫共沉淀 151
第九章 基因表达与调节实验 154
实验一 利用荧光素酶报告基因系统检测启动子的转录活性 154
实验二 染色质免疫沉淀技术 156
实验三 DNA甲基化特异性PCR 158
实验四 Red同源重组技术对大肠埃希菌ClpP基因的敲除 162
实验五 siRNA技术沉默基因 163
实验六 microRNA技术沉默基因 165
第十章 转基因实验 168
实验一 绿色荧光蛋白基因真核表达载体的构建及其在酿酒酵母中的表达 168
实验二 原核表达载体构建 173
实验三 哺乳动物细胞的转染 178
实验四 用电穿孔方法将重组质粒转化细菌 179
实验五 克隆化基因在大肠埃希菌的诱导表达 180
实验六 转基因动物的建立 181
第十一章 细胞研究实验 185
实验一 小鼠原代细胞培养 185
实验二 细胞培养实验 186
实验三 细胞凋亡检测 187
第三篇 分子生物学软件应用 190
第十二章 PCR引物设计及相关软件使用 190
第十三章 核酸序列分析与预测 203
第一节 核酸序列分析一般内容 203
第二节 miRNA序列数据库及靶点预测 219
第十四章 蛋白质序列分析与结构预测 225
第一节 蛋白质序列分析 225
第二节 二级结构及三级结构预测 234
第十五章 科研论文中的图片处理 240
第一节 基本概念 240
第二节 图片的获取与保存 241
第三节 图片的修复、编排与标注 242
第四节 图片的制作规范 242
第五节 结语 242
第十六章 EndNote软件的安装及其在医学文献管理和科研写作中的应用 243
第一节 EndNote X7的安装 243
第二节 EndNote X7的简介 245
第三节 EndNote X7的使用 247
参考文献 259
附录 260
附录1 分子生物学实验室常用设备介绍 260
附录2 分子生物学及基因工程常用试剂 276