第一章 蛋白质分析与纯化 2
第一节 蛋白质浓度测定 2
一、Bradford法 2
二、Lowry法测蛋白质含量 3
三、紫外吸收法测蛋白质含量 4
第二节 蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 5
第三节 Western印迹 7
第四节 蛋白质纯化 9
第五节 离子交换层析 11
第六节 亲和层析 13
一、谷胱甘肽亲和层析 14
二、金属螯合亲和层析 15
三、ProteinA、ProteinG亲和层析 17
第七节 疏水作用层析 17
参考文献 19
第二章 抗体制备技术 20
第一节 多克隆抗体的制备 20
双向免疫扩散法测定抗血清效价 21
第二节 单克隆抗体的制备 23
一、动物免疫 23
二、细胞融合技术 24
三、杂交瘤细胞克隆化 26
四、单抗亚类测定 26
五、单克隆抗体的大量制备 28
参考文献 28
第三章 抗体纯化和标记技术 29
第一节 抗体的纯化 29
一、IgG的纯化 29
二、IgM的纯化 33
第二节 抗体片段的制备 34
一、IgG片段的纯化 34
二、IgM片段的纯化 37
第三节 放射性同位素标记抗体技术 38
一、氯胺T法 38
二、Iodogen法 39
第四节 荧光素标记抗体技术 40
第五节 酶标记抗体技术 41
第六节 生物素标记抗体技术 42
第七节 铕标记抗体技术 43
第八节 胶体金标记抗体技术 45
参考文献 46
第四章 免疫检测技术 47
第一节 免疫荧光技术 47
间接细胞免疫荧光技术 47
第二节 酶免疫技术 49
一、双抗体夹心法检测抗原 49
二、间接法测定抗体 51
三、竞争法 52
第三节 放射免疫技术 53
一、放射免疫分析 54
二、免疫放射分析 55
第四节 化学发光免疫分析技术 56
化学发光酶联免疫分析 56
参考文献 58
第五章 免疫细胞分离技术 59
第一节 密度梯度分离技术 59
第二节 黏附分离技术 61
第三节 磁珠分离技术 62
第四节 流式细胞仪分离技术 64
参考文献 65
第六章 细胞功能检测 66
第一节 细胞增殖试验 66
第二节 吞噬试验 67
第三节 细胞黏附试验 68
第四节 抗体依赖的细胞毒试验 70
第五节 补体介导的细胞毒试验 71
第六节 凋亡检测 72
一、细胞凋亡的形态学检测 72
二、磷脂酰丝氨酸外翻分析 73
三、线粒体膜势能的检测 73
四、DNA片段化检测 73
五、Caspases活性的检测 73
第七章 免疫组织化学和免疫电镜 75
第一节 免疫组织化学 75
第二节 免疫电镜 77
参考文献 79
第八章 细胞因子及其活性的检测 80
第一节 ELISA法定量检测细胞因子 80
第二节 ELISPOT法检测细胞因子分泌细胞 82
第三节 流式细胞仪检测细胞内细胞因子 84
第四节 细胞因子依赖细胞株检测细胞因子活性 86
MTT比色分析法 86
参考文献 87
第九章 生物信息学简介 90
第十章 核酸与蛋白质数据库 93
第一节 核酸数据库 93
一、子数据库及其命名 94
二、核酸序列数据库格式 94
三、核酸数据库的检索 96
第二节 蛋白质序列数据库 97
一、蛋白质序列数据库简介 97
二、蛋白质序列数据库的检索 99
第三节 蛋白质结构数据库 105
一、PDB数据库检索 106
二、PDB数据库格式 107
第十一章 序列比对分析 110
第一节 两序列比对分析 110
一、两序列对比分析 110
二、序列两两比对的数据库相似性检索分析 112
第二节 多序列比对分析 115
第十二章 核酸与蛋白质结构预测 119
第一节 核酸结构预测 119
一、核酸序列的一级结构及翻译 119
二、密码子偏好性分析 122
三、RNA二级结构预测 125
第二节 蛋白质序列分析 127
一、蛋白质一级序列分析 127
二、蛋白质序列的反向翻译 134
第三节 蛋白质二级结构及其预测 135
一、蛋白质二级结构 135
二、蛋白质二级结构预测 136
第四节 蛋白质空间结构预测及常用在线预测方法 139
一、蛋白质空间结构预测 139
二、常用在线预测方法 140
三、常用在线预测方法实例 140
第十三章 蛋白质相互作用理论模拟 149
第十四章 抗原表位预测 154
第十五章 免疫信息学 165
一、IMGT数据库 165
二、KABAT数据库 165
三、dbMHC 165
四、AntiJen 165
五、SYFPEITHI 166
六、HDB 166
七、MHCBN 166
八、BCIPEP 167
第十六章 免疫学相关重要Web网站的简介 169
参考文献 177
第十七章 基本分子生物学技术 180
第一节 质粒DNA的分离、纯化和鉴定 180
第二节DNA酶切及凝胶电泳 186
第三节 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 189
第四节 RNA的提取和cDNA合成 191
第五节 重组质粒的连接、转化及筛选 195
第六节 基因组DNA的提取 198
一、细菌基因组DNA的制备 198
二、基因组DNA的检测 199
参考文献 199
第十八章 PCR技术 200
第一节 PCR克隆基因 200
第二节 PCR法进行基因突变 203
第三节 PCR法全合成新基因 205
参考文献 208
第十九章 分子文库的构建及筛选 209
第一节 cDNA文库的构建及筛选 209
第二节 噬菌体展示文库的构建及筛选 214
参考文献 217
第二十章 分子杂交技术 218
第一节 核酸探针以及制备方法 218
一、双链DNA探针及其标记方法 218
二、单链DNA探针 220
三、末端标记DNA探针 221
四、寡核苷酸探针 222
五、RNA探针 223
六、几种常见的非同位素标记探针的方法 223
第二节 几种常见的杂交 227
一、Southern杂交 227
二、Northern杂交 229
三、菌落原位杂交 230
四、斑点杂交 231
第三节 杂交反应的条件及参数的优化 232
参考文献 233
第二十一章 RNAi技术 234
参考文献 239
第二十二章 信号转导蛋白的活化水平分析 242
第一节 免疫细胞化学 242
第二节 激酶活性测定 244
第三节 凝胶阻滞电泳 247
参考文献 249
第二十三章 第二信使含量测定 250
第一节 Ca2+测定 250
第二节 IP3的测定 251
第三节 cAMP的测定 253
参考文献 254
第二十四章 亚细胞定位分析 255
第一节 细胞分步分离法 255
第二节 免疫荧光结合激光共聚焦显微镜分析 256
参考文献 258
第二十五章 蛋白-蛋白相互作用分析 259
第一节 免疫共沉淀检测蛋白-蛋白相互作用 259
第二节 GST pull down 261
第三节 采用GFP和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用 262
第四节 酵母双杂交 264
参考文献 274
第二十六章 蛋白-DNA相互作用分析 275
第一节 CHIP Assay 275
第二节 报道分子测定 278
参考文献 280
第二十七章 磷酸化多肽双向作图和磷酸氨基酸分析 281
第一节 磷酸化多肽双向作图 281
第二节 磷酸氨基酸分析 284
参考文献 287
第二十八章 蛋白质组学的双向电泳与生物质谱 288
第一节 双向电泳技术 288
第二节 生物质谱技术 292
考马斯亮蓝染色的胶内酶切 292
参考文献 294