第一章 免疫血清的制备 1
一、兔免疫血清的制备 1
二、利用NC膜结合抗原制备多克隆抗体 4
三、新型免疫佐剂（小鼠用）ImmunEasy的应用 6
第二章 小鼠淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术 9
一、细胞融合前准备 9
二、细胞融合及杂交瘤的选择 11
三、抗体的检测 13
四、杂交瘤的克隆化和冻存 13
五、单克隆抗体的大量生产 15
六、单克隆抗体的鉴定 16
七、影响因素、失败原因分析 16
第三章 免疫球蛋白纯化技术 18
一、盐析法纯化人血清免疫球蛋白 18
二、辛酸-硫酸铵法纯化单克隆抗体 20
三、DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化免疫球蛋白 22
四、Q Sepharose Fast Flow柱层析纯化小鼠腹水IgGl 24
五、SPA- Sepharose CL-4B亲和层析纯化IgG及IgG亚类 26
六、高效液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体 28
七、单克隆抗体亲和层析柱纯化重组人α2a干扰素（rHu IFN-α2a） 29
第四章 免疫球蛋白标记技术 31
一、辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体 31
二、异硫氰酸荧光素（FITC）标记抗体技术 36
三、藻红蛋白（PE）标记抗体技术 37
四、生物素标记抗体技术 39
五、125I标记单克隆抗体技术 42
第五章 标记抗体的应用 44
一、酶联免疫吸附试验（ELISA） 44
二、生物素-亲合素放大的酶联免疫吸附试验（BA-ELISA） 46
三、荧光素-抗荧光素抗体放大的ELISA 49
四、免疫沉淀和免疫印迹（Western Blotting） 50
（Ⅰ）免疫沉淀 51
（Ⅱ）免疫印迹（Western Blotting） 53
五、化学发光免疫分析 55
六、125I标记单克隆抗体竞争结合试验 58
第六章 细胞分离技术 61
一、Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 61
二、Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化细胞 65
三、免疫磁珠法分离细胞 66
第七章 溶血空斑形成试验 70
第八章 常用检测免疫细胞膜分子的免疫阻化技术 72
一、亲和免疫细胞化学技术SABC 72
二、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶（APAAP）免疫组化染色技术检测淋巴细胞表面标记 74
第九章 免疫荧光染色和流式细胞术（FCM）分析 78
一、间接免疫荧光染色和FCM分析 78
二、直接免疫荧光染色（单色、双色、多色）和FCM分析 80
三、细胞周期检测 81
四、应用Annexin V荧光染色检测细胞凋亡 82
五、胞内细胞因子以及Th1/Th2和Tc1/Tc2的检测 84
六、流式细胞术检测细胞黏附功能 88
第十章 淋巴细胞增殖功能的测定 90
第十一章 人脐带静脉内皮细胞的分离培养与增殖试验 92
第十二章 杀伤细胞功能的检测 95
一、自然杀伤细胞（NK）和淋巴因子激活杀伤功能（LAK）的检测 95
二、混合淋巴细胞培养 98
三、重导向杀伤功能的检测 99
第十三章 细胞因子生物学活性的检测 102
一、白细胞介素-1（IL-1）生物学活性检测 102
（Ⅰ）ConA刺激小鼠胸腺检测IL-1生物学活性 102
（Ⅱ）应用EL-4和CTLL检测IL-1生物学活性 103
（Ⅲ）IL-1依赖D10 G4.1细胞系检测IL-1生物学活性 105
二、白细胞介素-2（IL-2）生物学活性检测 106
三、白细胞介素-4（IL-4）生物学活性检测 108
四、白细胞介素-6（IL-6）生物学活性检测 110
（Ⅰ）IL-6依赖的7TD1细胞检测IL-6生物学活性 110
（Ⅱ）M1细胞系检测IL-6生物学活性 111
五、白细胞介素-10（IL-10）生物学活性检测 112
六、白细胞介素-15（IL-15）生物学活性检测 114
七、干扰素（IFN）生物学活性检测 115
八、凋亡诱导配体生物学活性检测 117
（Ⅰ）肿瘤坏死因子（TNF）生物学活性检测 117
（Ⅱ）TRAIL生物学活性检测 119
第十四章 细胞因子及其受体的免疫学方法检测 121
一、夹心ELISA检测可溶性白细胞介素-2受体（sIL-2R） 121
二、夹心ELISA检测人白细胞介素-4（IL-4） 122
三、夹心ELISA检测人白细胞介素-6（IL-6） 124
四、夹心ELISA检测人白细胞介素-8（IL-8） 126
五、夹心ELISA检测人γ干扰素（IFN-γ） 127
六、夹心ELISA检测人α2a、α2b干扰素 129
七、夹心ELISA检测人肿瘤坏死因子（TNF-α） 130
八、夹心ELISA检测人可溶性TRAIL（sTRAIL） 131
九、夹心ELISA检测可溶性DR4/DR5 133
十、酶联免疫斑点法（ELISpot）检测单个细胞水平上产生细胞因子频率 134
第十五章 检测生物大分子相互作用的生物传感器技术 137
附录：ELISA试剂及器材 141