细胞和分子免疫学实验技术PDF电子书下载

第一章 免疫血清的制备 1

一、兔免疫血清的制备 1

二、利用NC膜结合抗原制备多克隆抗体 4

三、新型免疫佐剂（小鼠用）ImmunEasy的应用 6

第二章 小鼠淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术 9

一、细胞融合前准备 9

二、细胞融合及杂交瘤的选择 11

三、抗体的检测 13

四、杂交瘤的克隆化和冻存 13

五、单克隆抗体的大量生产 15

六、单克隆抗体的鉴定 16

七、影响因素、失败原因分析 16

第三章 免疫球蛋白纯化技术 18

一、盐析法纯化人血清免疫球蛋白 18

二、辛酸-硫酸铵法纯化单克隆抗体 20

三、DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化免疫球蛋白 22

四、Q Sepharose Fast Flow柱层析纯化小鼠腹水IgGl 24

五、SPA- Sepharose CL-4B亲和层析纯化IgG及IgG亚类 26

六、高效液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体 28

七、单克隆抗体亲和层析柱纯化重组人α2a干扰素（rHu IFN-α2a） 29

第四章 免疫球蛋白标记技术 31

一、辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体 31

二、异硫氰酸荧光素（FITC）标记抗体技术 36

三、藻红蛋白（PE）标记抗体技术 37

四、生物素标记抗体技术 39

五、125I标记单克隆抗体技术 42

第五章 标记抗体的应用 44

一、酶联免疫吸附试验（ELISA） 44

二、生物素-亲合素放大的酶联免疫吸附试验（BA-ELISA） 46

三、荧光素-抗荧光素抗体放大的ELISA 49

四、免疫沉淀和免疫印迹（Western Blotting） 50

（Ⅰ）免疫沉淀 51

（Ⅱ）免疫印迹（Western Blotting） 53

五、化学发光免疫分析 55

六、125I标记单克隆抗体竞争结合试验 58

第六章 细胞分离技术 61

一、Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 61

二、Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化细胞 65

三、免疫磁珠法分离细胞 66

第七章 溶血空斑形成试验 70

第八章 常用检测免疫细胞膜分子的免疫阻化技术 72

一、亲和免疫细胞化学技术SABC 72

二、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶（APAAP）免疫组化染色技术检测淋巴细胞表面标记 74

第九章 免疫荧光染色和流式细胞术（FCM）分析 78

一、间接免疫荧光染色和FCM分析 78

二、直接免疫荧光染色（单色、双色、多色）和FCM分析 80

三、细胞周期检测 81

四、应用Annexin V荧光染色检测细胞凋亡 82

五、胞内细胞因子以及Th1/Th2和Tc1/Tc2的检测 84

六、流式细胞术检测细胞黏附功能 88

第十章 淋巴细胞增殖功能的测定 90

第十一章 人脐带静脉内皮细胞的分离培养与增殖试验 92

第十二章 杀伤细胞功能的检测 95

一、自然杀伤细胞（NK）和淋巴因子激活杀伤功能（LAK）的检测 95

二、混合淋巴细胞培养 98

三、重导向杀伤功能的检测 99

第十三章 细胞因子生物学活性的检测 102

一、白细胞介素-1（IL-1）生物学活性检测 102

（Ⅰ）ConA刺激小鼠胸腺检测IL-1生物学活性 102

（Ⅱ）应用EL-4和CTLL检测IL-1生物学活性 103

（Ⅲ）IL-1依赖D10 G4.1细胞系检测IL-1生物学活性 105

二、白细胞介素-2（IL-2）生物学活性检测 106

三、白细胞介素-4（IL-4）生物学活性检测 108

四、白细胞介素-6（IL-6）生物学活性检测 110

（Ⅰ）IL-6依赖的7TD1细胞检测IL-6生物学活性 110

（Ⅱ）M1细胞系检测IL-6生物学活性 111

五、白细胞介素-10（IL-10）生物学活性检测 112

六、白细胞介素-15（IL-15）生物学活性检测 114

七、干扰素（IFN）生物学活性检测 115

八、凋亡诱导配体生物学活性检测 117

（Ⅰ）肿瘤坏死因子（TNF）生物学活性检测 117

（Ⅱ）TRAIL生物学活性检测 119

第十四章 细胞因子及其受体的免疫学方法检测 121

一、夹心ELISA检测可溶性白细胞介素-2受体（sIL-2R） 121

二、夹心ELISA检测人白细胞介素-4（IL-4） 122

三、夹心ELISA检测人白细胞介素-6（IL-6） 124

四、夹心ELISA检测人白细胞介素-8（IL-8） 126

五、夹心ELISA检测人γ干扰素（IFN-γ） 127

六、夹心ELISA检测人α2a、α2b干扰素 129

七、夹心ELISA检测人肿瘤坏死因子（TNF-α） 130

八、夹心ELISA检测人可溶性TRAIL（sTRAIL） 131

九、夹心ELISA检测可溶性DR4/DR5 133

十、酶联免疫斑点法（ELISpot）检测单个细胞水平上产生细胞因子频率 134

第十五章 检测生物大分子相互作用的生物传感器技术 137

附录：ELISA试剂及器材 141