1 概论 1
短期试验 2
一组试验的必要性 3
试验项目的选择 5
2 鼠伤寒沙门氏菌营养缺陷型回复突变试验(Ames试验) 13
菌株的基因型及生物学特性的测试 18
操作 19
组氨酸缺陷型(his~-) 19
深度粗糙突变(rfa)——结晶紫抑菌试验 20
氨苄青霉素/四环素平板 20
R因子——抗氨苄青霉素试验 21
AuvrB突变——紫外线敏感试验 22
自发回复突变(his~+) 23
回变特性——诊断性试验 23
测试菌株的保藏和应用 24
常用试剂及培养基的配方 26
常用试剂 26
营养肉汤 29
营养肉汤琼脂培养基 29
改良Vogel—Bonner(V—B)10E 29
顶层软琼脂 30
最低营养V—B培养基 30
组氨酸/生物平板 30
氨苄育霉素平板 30
0.5mM L—组氨酸/0.5mM D—生物系溶液 31
0.2M磷酸钠缓冲液 31
哺乳动物肝S9的制备及应用 31
诱导方法和S9的制备 32
合并诱导方法 32
S9混合液的配制 34
受试化学物 35
诱变试验操作与结果判断 35
溶剂 35
斑点试验(Spot test)与阳性判断依据 36
平板掺入试验车阳性判断标准 37
假阳性与假阴性 38
平板掺入试验的发展 40
预培养法 40
干燥器内试验法 40
尿中诱变剂的俭出 41
其他辅助因子的补给 41
波动试验 42
菌株 42
试剂、贮存液及培养液的配制 42
操作程序 45
试验结果的统汁评价 46
安全预防措施 48
附录 48
肝匀浆S9组分蛋白质含量测定 48
肝匀浆S9组分细胞色素P—450测定 51
细胞色素P—450芳烃羟化酶(AHH)活性测定 52
3 大肠杆菌营养缺陷型回复突变试验 56
菌株 57
菌株基因型鉴定 58
色氨酸需要 58
乳糖、硫胺素需要 59
△uvrA/B——紫外线敏感试验 59
R因子——氨苄青霉素敏感试验 60
回变特性 60
自发回变 61
菌种保藏 62
悬液深低温 63
主要培养基和溶液的配制 63
营养肉汤培养基、营养肉汤琼脂培养基、半固体培养基、Davis—Mingioli盐液的配制 63
20％葡萄糖水溶液 63
20％乳糖水溶液 63
5mg％硫胺素水溶液 63
0.1％L—色氨酸水溶液 63
10％酪蛋白水解物水溶液 63
定期移植 63
选择培养基顶层 64
选择培养基底层 64
4倍稀释D—M盐溶液 65
生长培养液 65
肝微粒体的应用 65
检品的配制和预试 65
试验方法 66
点试及操作步骤 66
平板掺入法及操作步骤 67
对本试验的评价 69
平板掺入法 69
数据处理与结果分析 69
点试法 69
4 大肠杆菌DNA聚合酶缺陷型修复试验 73
菌株的性状鉴定和菌种保藏 75
培养基和溶液的配制 76
HA＋T琼脂培养基 76
贮存盐溶液 77
肝微粒体的应用 77
HA＋T液体培养基 77
HA＋T软琼脂培养基 77
受试物的配制和对照试剂 78
试验方法 78
标准纸片扩散法及其操作步骤 78
平板掺入法及其操作步骤 80
液体法及其操作步骤 80
结果判断和数据处理 82
对本试验的评价 83
5 枯草杆菌重组缺陷型重组试验 87
特性鉴定 89
菌种保藏 89
培养基和溶液的配制 90
B—2肉汁培养基 90
B—2肉汁琼脂培养基 90
“干燥”平板制备 90
改良的Schaeffer培养基 90
B—2肉汁软琼脂培养基 91
50％(W/V)甘油水溶液 91
M/15磷酸盐缓冲液 91
缓冲盐溶液 91
肝微粒体在试验小的应用 92
受试物的配制和对照试剂的选择 92
试验方法 93
划线法 93
芽胞法 95
液体法 96
结果判断和数据处理 98
菌株的性状鉴定和菌种保藏 98
对本试验的评价 101
6 哺乳类细胞DNA损伤的检测 105
原理 110
碱性蔗糖梯度沉降试验 110
操作步骤 112
碱性洗脱试验 116
原理 116
操作步骤 117
7 哺乳类细胞DNA修复反应的检测 125
DNA损伤的切除修复及其检测 125
等密度梯度沉降试验 128
原理 128
操作步骤 129
溴尿嘧啶光解试验 133
原理 133
操作步骤 135
程序外DNA合成(UDS)试验 138
原理 138
UDS放射自显影显示法的操作步骤 140
UDS液体闪烁计数显示法的操作步骤 143
原理 148
实验步骤 148
DNA合成抑制试验 148
8 哺乳类细胞诱变试验 153
野生型细胞的选择 154
CHO细胞系 155
V79细胞系 155
L5178Y细胞系 155
人二倍体成纤维细胞 155
常用基因座位的特征 155
h9prt座位 156
质膜Na~+/K+ATP酶座位(乌本苷耐受性) 157
tk座位 158
白喉毒素耐受座位(dip~r) 159
实验设计模式和影响实验结果的因素 159
自发突变率 160
突变表现型的“表达时间” 161
代谢协同作用与选择时的细胞密度 161
集落分裂 162
其他 162
V79(CHO)/hgprt系统 163
几个哺乳类细胞诱变试验系统 163
V79/oua~r系统 166
HF/dip~r系统 166
L5178Y(tk~+/tk~-)/tk系统 168
9 细胞转化试验 173
SHE细胞转化试验 175
SHE细胞的分离及冷冻贮存 176
检测步骤 177
C3H/1CT1/2及BALB/C—3T3细胞系系统 183
检测步骤 184
细胞系的培养和贮存 184
BHK—21/软琼脂系统 187
BHK—21/C1—?3的培养条件 188
检测步骤 189
·附录·细胞培养基本技术 190
10 体细胞染色体畸变试验 195
体外染色体畸变的试验 199
细胞株的测试 199
人外周血细胞染色体畸变试验 202
取样时间 203
给药次数、途径与剂量 203
动物选择 203
体内骨髓细胞染色体畸变试验 203
制片步骤 204
染色体畸变分析 206
染色体数目的变化 206
染色体结构的变化 207
11 微核试验 218
哺乳动物骨髓嗜染红细胞(PCE)微核试验 220
细胞群的选择 220
动物选择 220
剂量及分组 221
给药方式及制片时间 222
对照组 224
制片方法 224
染色 225
嗜多染红细胞及微核计数 227
数据处理 228
结果评价 228
哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验的优缺点 229
原理 230
胚胎转移微核试验 230
试验方法 231
讨论 232
其他细胞微核试验 233
哺乳动物减数分裂细胞的微核试验 233
肝细胞微核试验 234
细胞培养微核试验 234
小鼠睥脏微核试验 234
外周血微核试验 234
与SCE同时进行微核试验 235
12 姊妹染色单体交换试验 236
原理 237
哺乳类细胞体外SCE试验 238
哺乳类动物体内SCE试验 240
实验设计 240
BUdR的预处理 240
操作步骤 242
统计处理及结果评价 245
SCE方法的优缺点 246
SCE的基线频率 246
13 睾丸染色体畸变试验 249
精子发生过程 250
试验方法 252
动物 252
给药剂量及途径 252
精原细胞畸变观察 253
初级精母细胞畸变观察 253
精子畸形试验与致癌性的关系 263
14 精子畸形试验 264
动物 265
给药和剂量 265
对照 265
精子采样与检查 265
精子畸形试验方法 265
统计分忻与评价 266
精子畸形与诱变性的关系 267
特异座位试验 267
可遗传易位试验 267
显性致死试验 267
小鼠精子畸形试验的灵敏度和特异性 268
精子试验的优缺点 269
有待进一步研究的问题 270
15 显性致死试验 272
原理 272
试验方法 273
动物选择 273
剂量、动物分组及给药方式 273
交配方法 275
结果统计分析 277
胎仔检查 277
结果判断 278
讨论 279
16 果蝇伴性隐性致死试验 282
试验方法 282
原理 282
果蝇 284
预试 285
阳性和阴性对照 286
样本的大小 286
给予受试物 287
交配程序 288
结果的判断、统计处理及评价 289
结果的判断标准 289
统计处理及评价 289
注意事项 290
对方法学的评价 290
应用及发展概况 291
17 致畸试验与生殖毒性试验 294
有关致畸的基本概念 296
致畸性 296
胚胎毒性 296
母体毒性 296
畸形和畸胎发生 296
致畸指数 296
影响畸胎发生的因素和致畸机理 296
发育阶段 297
遗传的感受性 297
化学物的剂量 298
化学物的理化性质 298
致畸机理 299
美国的生殖毒性试验规范 299
FDA的两代生殖试验结合致畸试验 300
FDA的三代生殖试验结合致畸试验 302
FDA的致畸试验要点 302
FDA的三段致畸试验 305
EPA的禽类生殖试验 307
大鼠致畸试验 308
我国的生殖毒性试验方案 308
喂养生殖试验结合致畸试验 308
生殖毒性试验的发展 310
18 诱癌试验 312
实验动物 312
动物种属和品系的选择 312
动物的需要量 313
动物的饲养管理 314
经口给药 316
经皮肤给药 316
给药途径 316
腹腔内注入 317
静脉内注入 317
呼吸道给药 317
预备试验 318
急性试验 318
两周重复给药试验 318
亚慢性试验 318
动物随机分组 320
诱癌试验实施方法 320
动物的自发性肿瘤 320
给药剂量和实验时限 323
日常观察和处理 324
病理学检查 324
诱癌试验结果的评价 325
肿瘤的发生率 325
诱癌试验阳性的判断标准 325
提高诱癌试验敏感性的措施 326
经胎盘诱癌试验 326
新生动物中诱癌 327