目录 1
实验须知 1
蛋白质和核酸化学 1
实验1蛋白质等电点的测定 3
实验2蛋白质的沉淀反应(盐析、有机溶剂、重金属、生物碱试剂) 4
实验3血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 9
实验4聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测定牛血清白蛋白等电点 16
实验5凝胶层析分离蛋白质 18
一、血红蛋白和鱼精蛋白的分离 18
二、脲酶的分离 19
实验6氨基酸的薄层层析 33
实验7DEAE纤维素离子交换层析法分离血清蛋白质 34
实验8血清γ-球蛋白提纯与纯度鉴定 37
实验9血红蛋白及其衍生物的吸收光谱测定 38
实验10蛋白质定量 46
一、微量凯氏(Kieldahl)定氮法 46
二、比色法 46
三、紫外分光光度法 46
实验11牛胰核糖核酸酶的变性及复性 51
四、核酸的测定酶 56
三、DNA、RNA的碱基分离 56
一、肝细胞浆、核的分离与鉴定 56
二、DNA、RNA的提取 56
实验12肝细胞核酸提取、鉴定和测定 56
实验13蔗糖酶的专一性 71
实验14影响酶活性的因素 72
一、温度对酶活性的影响附注:关于酶的最适温度的讨论 72
二、pH对酶活性的影响附注:酶的最适pH 72
三、激动剂和抑制剂对酶活性的影响 72
附注:米氏常数的意义及应用 80
二、过氧化氢酶的Km值测定 80
一、胰蛋白酶的Km值测定 80
实验15酶的米氏常数(Km)测定 80
实验16乳酸脱氢酶的组分及作用 87
实验17乳酸脱氢酶同工酶(聚丙烯酰胺凝胶)电泳 90
实验18胡萝卜素的色层分析 94
实验19维生素C的定量(2,4-二硝基苯肼法) 95
实验21肝糖元的提取、鉴定与定量 102
一、肝糖元的提取与鉴定 102
二、肝糖元定量测定 102
实验22饱食、饥饿和激素对肝糖元含量的影响 104
二、邻-甲苯胺法 105
实验23血糖测定 105
一、吴宪-Fo1in法 105
实验24胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 110
实验25运动对血中乳酸含量的影响 111
实验26血清脂蛋白的电泳 112
一、血清脂蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 112
二、血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 112
三、血清脂蛋白聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳 112
实验27转氨基作用(圆形纸层析法) 116
实验28精氨酸酶的作用 118
实验29细胞色素氧化酶的作用及其抑制与解毒 120
实验30Warburg氏呼吸计测压法 121
一、肝组织耗氧量的测定 121
二、谷氨酸含量的测定 121
实验31放射性同位素示踪 132
一、3H-胸苷掺入DNA的试验 132
二、32P掺入磷脂的试验附注放射性同位素技术临床生化 132
实验32血清总胆固醇的测定 140
实验33血清三酸甘油酯的测定(抽提法) 142
三、改良穆氏法 144
二、赖氏法 144
实验34血清谷丙转氨酶活性测定 144
一、金氏法 144
实验35全血非蛋白氮(NPN)测定 149
一、消化法 149
二、改良帕波特Rappoport氏滴定法 149
实验36血清钾钠测定(火焰光度法) 154
实验37血清钾的测定(四苯硼钠比浊法) 159
实验38血清钙的测定 161
一、草酸盐-高锰酸钾滴定法 161
二、乙二胺四乙酸二钠滴定法 161
二、滴定法 164
实验39血浆二氧化碳结合力的测定 164
一、量积法 164
实验40尿淀粉酶活性的测定(Winslow氏法) 170
实验设计 172
生化实验中的对照设置 172
附录Ⅰ常用缓冲液及酸碱指示剂的配制方法 174
附录Ⅱ电动离心机的使用 178
附录Ⅲ常用容量仪器的规格、使用、清洗及洗液的配制 181
附录Ⅳ几种动物生化常数表 189
主要参考书目 190