目录 3
第二版前言 3
第一版前言 3
第一篇 生化分离技术 3
第一章 提取与沉淀分离技术 3
第一节 细胞破碎 3
一、机械破碎法 3
二、物理破碎法 4
三、化学破碎法 5
四、酶促破碎法 6
第二节 提取 6
一、提取的方法 7
二、影响提取的因素 8
第三节 沉淀分离 9
一、盐析沉淀法 9
二、等电点沉淀法 14
三、有机溶剂沉淀法 14
五、金属盐沉淀法 15
四、复合沉淀法 15
六、选择性变性沉淀法 16
第四节 实验 16
实验1-1 大肠杆菌细胞的超声波破碎 16
实验1-2 枯草杆菌碱性磷酸酶的提取与盐析 17
实验1-3 枯草杆菌DNA的提取与分离 20
实验1-4 酵母RNA的提取与分离 21
实验1-5 大蒜细胞SOD的提取与分离 22
实验1-6 大鼠肝rRNA的提取与分离 24
一、非膜过滤的分类 26
第二章 过滤与膜分离技术 26
第一节 非膜过滤 26
二、非膜过滤的操作过程 27
第二节 膜分离技术 28
一、膜分离的分类 28
二、膜分离的操作过程及其控制 30
第三节 实验 32
实验2-1 胰凝乳蛋白酶的透析脱盐 32
实验2-2 糖化酶的超滤分离 33
二、有机溶剂萃取的操作过程 36
一、有机溶剂的选择 36
第三章 萃取分离技术 36
第一节 有机溶剂萃取 36
第二节 双水相萃取 37
一、双水相萃取的原理 37
二、双水相萃取的操作过程 38
第三节 超临界萃取 40
一、超临界萃取的原理 40
二、超临界萃取的操作过程 41
二、反胶束萃取的操作过程 43
一、反胶束萃取的原理 43
第四节 反胶束萃取 43
第五节 实验 45
实验3-1 青蒿素的超临界萃取分离 45
实验3-2 人生长激素的双水相萃取分离 46
实验3-3 穿心莲内酯的有机溶剂萃取 47
第四章 层析分离技术 49
第一节 吸附层析 49
一、吸附层析原理 49
二、吸附柱层析 50
三、聚酰胺薄膜层析 54
四、其他吸附层析 54
第二节 分配层析 55
一、纸层析 55
二、薄层层析 60
三、气相层析 63
第三节 离子交换层析 72
一、离子交换剂的选择与处理 72
二、离子交换层析的操作过程 75
第四节 凝胶层析 76
一、凝胶层析的基本原理 76
二、凝胶的选择与处理 78
三、凝胶层析操作过程 80
第五节 亲和层析 82
一、亲和层析母体和配基 83
二、亲和层析方法 83
二、pH梯度的形成 86
一、交换剂和缓冲液体系 86
第六节 层析聚焦 86
三、层析聚焦的操作过程 87
第七节 实验 88
实验4-1 蛋白质溶液的凝胶层析脱盐 88
实验4-2 氨基酸的纸层析 89
实验4-3 核苷酸的离子交换层析 91
实验4-4 胰蛋白酶的亲和层析 93
实验4-5 凝胶层析测定蛋白质的相对分子质量 95
实验4-6 DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析 97
实验4-7 醇酯成分的气相层析 98
实验4-8 胆酸混合液的薄层层析 101
第五章 电泳技术 103
第一节 电泳的基本原理 103
第二节 纸电泳 105
一、缓冲液的选择 105
二、滤纸的选择与剪裁 105
三、电泳操作要点 105
第三节 薄层电泳 107
第四节 薄膜电泳 108
第五节 凝胶电泳 109
一、聚丙烯酰胺凝胶的制备原理 109
二、不连续电泳中样品压缩成层的原理 111
三、SDS-凝胶电泳原理 112
四、凝胶电泳的操作要点 112
第六节 等电点聚焦电泳 114
一、稳定pH梯度的形成 114
二、两性电解质载体 115
三、支持pH梯度的介质 115
四、等电点聚焦电泳的操作要点 116
第七节 实验 117
实验5-1 核苷酸的纸电泳 117
实验5-2 蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳 119
实验5-3 DNA的琼脂糖凝胶电泳 120
实验5-4 蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 122
实验5-5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量 124
实验5-6 蛋白质的二元凝胶电泳 127
三、超速离心机 129
二、高速离心机 129
第一节 离心机的选择 129
第六章 离心分离技术 129
一、常速离心机 129
第二节 离心方法的选择 131
一、差速离心 131
二、密度梯度离心 131
三、等密度梯度离心 133
一、离心力 134
二、离心时间 134
第三节 离心条件的确定 134
三、温度 135
四、pH值 135
第四节 实验 136
实验6-1 细菌核糖体的分离 136
实验6-2 大肠杆菌细胞膜的分离 137
实验6-3 RNA的蔗糖密度梯度离心分离 138
实验6-4 大鼠肝细胞核的分离 139
一、兰-爱农（Lane-Eynon）法 143
第一节 糖类的化学检测 143
第二篇 生化检测技术 143
第七章 化学检测技术 143
二、斐林试剂快速法 144
三、次碘酸钠法 145
四、铜试剂法 147
第二节 蛋白质和氨基酸的化学检测 148
一、定氮法测定蛋白质的含量 148
二、双缩脲试剂法测定蛋白质含量 150
三、福林-酚试剂法测定蛋白质含量 150
五、蛋白质的氨基酸排列顺序测定——Edman法 152
四、蛋白质N-末端氨基酸DNS测定法 152
六、蛋白质N-末端氨基酸FDNB测定法 156
七、茚三酮显色法测定氨基酸含量 157
八、甲醛滴定法测定氨基酸 159
第三节 蛋白质的免疫化学检测 159
一、基本概念与原理 159
二、蛋白质的免疫化学检测方法 160
第四节 核酸的化学检测 162
一、定磷法测定核酸含量 162
二、二苯胺法测定DNA含量 163
三、地衣酚法测定RNA含量 164
第五节 实验 164
实验7-1 斐林试剂置换法测定还原糖 164
实验7-2 葡萄糖淀粉酶的活力测定 166
实验7-3 微量凯氏定氮法测定总氮量 167
实验7-4 福林-酚试剂法测定蛋白质含量 169
实验7-5 丹磺酰化法分析蛋白质N-末端氨基酸 170
实验7-6 异硫氰酸苯酯分析法测定肽链的氨基酸排列次序 172
实验7-7 茚三酮显色法测定氨基酸含量 174
实验7-8 双向免疫扩散法测定抗血清效价 175
实验7-9 定磷法测定核酸含量 176
实验7-10 地衣酚显色法测定RNA含量 178
实验7-11 二苯胺显色法测定DNA含量 179
第八章 光学检测技术 181
第一节 旋光检测技术 181
一、原理 181
二、操作要点 182
第二节 荧光检测技术 182
一、邻苯二甲醛荧光分析法测定氨基酸 183
二、荧光胺荧光分析法测定肽含量 184
第三节 分光光度检测技术 185
一、原理 185
二、操作要点 186
第四节 实验 188
实验8-1 旋光法测定味精的纯度 188
实验8-2 荧光法测定核黄素含量 189
实验8-3 荧光法测定氨基酸含量 190
实验8-4 紫外吸收法测定核酸含量 191
实验8-5 紫外吸收法测定蛋白质含量 192
第九章 气体检测技术 194
第一节 华勃氏呼吸仪检压法 195
第二节 范·斯莱克检测仪测定α-氨基酸含量 198
第三节 实验 198
实验9-1 酵母细胞耗氧量的测定 198
实验9-2 华勃氏呼吸仪测定L-谷氨酸脱羧酶活力 199
实验9-3 华勃氏呼吸仪测定L-谷氨酸含量 201
一、毒性试验 203
第一节 安全性试验 203
第十章 生物检测技术 203
二、局部刺激性试验 205
三、溶血试验 205
四、热原试验 205
五、过敏试验 206
第二节 生长抑制物质的生物效价测定 206
一、稀释法 207
二、扩散法 207
第三节 生长促进物质的生物效价检测 209
四、滴定法 210
实验10-1 卡那霉素的效价测定 210
第四节 实验 210
一、稀释法 210
三、比浊法 210
二、扩散法 210
实验10-2 二环素的杀菌能力测定 212
实验10-3 细胞病变抑制法测定干扰素的效价 213
实验10-4 热原试验 215
二、放射性同位素的衰变与射线 217
一、放射性同位素 217
第十一章 放射性同位素检测技术 217
第一节 基本知识 217
三、衰变规律 218
四、放射线的防护 219
第二节 放射性同位素的检测 219
一、放射自显影技术 220
二、盖革计数管探测 220
三、闪烁计数器探测 221
第三节 放射性同位素的搀入 223
第四节 实验 224
实验11-1 γ-32P-ATP的酶促合成 224
实验11-2 3H-蛋白质的生物合成 225
实验11-3 3H-蛋白质凝胶的放射荧光显影 225
第三篇 酶、基因和细胞操作技术 229
第十二章 酶技术 229
第一节 酶生物合成的调节技术 229
一、酶的诱导合成 229
二、酶生物合成的阻遏 231
第二节 酶反应动力学的研究 233
一、酶反应初速度的测定 233
二、底物浓度对反应速度的影响——Km和νmax的测定 233
三、最适温度、热稳定性和活化能的测定 235
四、最适pH值的测定 237
五、酶的激活与抑制 237
第三节 酶、细胞和原生质体固定化技术 238
一、吸附法固定化技术 238
二、包埋法固定化技术 239
三、结合法固定化技术 240
四、交联固定化技术 242
第四节 酶分子修饰技术 242
一、金属离子置换修饰 243
二、大分子结合修饰 243
三、酶的侧链基团修饰 245
四、肽链有限水解修饰 248
五、核苷酸链剪切修饰 249
六、氨基酸置换修饰 249
七、核苷酸置换修饰 250
第五节 实验 251
实验12-1 β-半乳糖苷酶的诱导合成 251
八、酶分子的物理修饰 251
实验12-2 无机磷酸对枯草杆菌碱性磷酸酶生物合成的阻遏作用 253
实验12-3 碱性磷酸酶的反应动力学性质 254
实验12-4 L-谷氨酸脱羧酶的固定化 256
实验12-5 枯草杆菌细胞固定化 257
实验12-6 谷氨酸棒杆菌原生质体固定化 258
实验12-7 固定化原生质体生产谷氨酸脱氢酶 259
一、分离法 261
第十三章 基因克隆技术 261
第一节 基因的获取技术 261
二、反转录法 262
三、化学合成法 264
四、聚合酶链反应（PCR）技术 265
第二节 载体的制备技术 267
一、载体的分类 268
二、载体的制备 269
一、黏性末端连接 271
第三节 DNA体外重组技术 271
二、平头末端连接 272
三、修饰末端连接 273
第四节 重组DNA引入受体细胞技术 274
一、受体细胞的筛选与处理 274
二、外源DNA引入受体细胞 274
第五节 重组DNA的鉴定技术 276
一、DNA印迹技术 276
二、RNA印迹技术 278
四、DNA序列测定技术 279
三、蛋白质印迹技术 279
第六节 实验 283
实验13-1 大肠杆菌Col EⅠ质粒的分离 283
实验13-2 重组DNA的细胞转化 285
实验13-3 Sanger法测定基因的序列 286
实验13-4 DNA印迹杂交 287
实验13-5 PCR扩增目的基因 289
实验13-6 碱裂解法提取质粒DNA 290
第一节 动物细胞融合技术 292
第十四章 细胞融合技术 292
一、细胞的制备 293
二、细胞融合 293
三、融合子的筛选 294
第二节 原生质体融合技术 295
一、原生质体制备 295
二、原生质体融合 299
三、细胞壁的再生 300
四、融合子的筛选 300
第三节 细胞拆合技术 301
一、细胞器的分离 302
二、细胞器重组 303
第四节 实验 305
实验14-1 枯草杆菌原生质体的制备 305
实验14-2 酵母原生质体的分离与再生 305
实验14-3 从胡萝卜细胞分离原生质体 307
实验14-4 动物细胞微核体和胞质体的制备 308
附录 310
主要参考文献 321