绪论 1
0.1 细胞工程简介 1
0.2 细胞工程的发展史 3
思考题 4
第一篇 细胞工程的技术基础第1章 细胞培养的设施与基本条件 7
1.1 细胞工程实验室的设置 7
1.1.1 动物细胞工程实验室的设置 7
1.1.2 植物细胞工程实验室的设置 8
1.2 常用仪器与设备 9
1.2.1 动物与植物细胞工程实验室通用的仪器设备 9
1.2.2 动物细胞工程实验室的常用仪器设备 13
1.2.3 植物细胞工程实验室的常用仪器设备 14
1.3 实验室的生物安全 15
思考题 16
第2章 清洗与消毒 17
2.1 清洗 17
2.1.1 玻璃器皿的清洗 17
2.1.2 胶塞的清洗 18
2.1.3 塑料制品的清洗 18
2.1.4 G6除菌滤器的清洗 19
2.1.5 不锈钢除菌滤器的清洗 19
2.1.6 包装 19
2.2 消毒 19
2.2.1 物理灭菌法 19
2.2.2 化学消毒法 20
思考题 21
附 实验1 器械的清洗与消毒 21
第3章 细胞培养的基本方法 24
3.1 无菌操作技术 24
3.1.1 实验器具和材料的准备 25
3.1.2 培养室和超净台的消毒 25
3.1.3 洗手和着装 25
3.1.4 无菌培养操作 25
3.2 培养细胞的观察 26
3.2.1 相差显微镜观察 26
3.2.2 培养细胞的观察 27
3.3 细胞培养中常用的染色方法 28
3.3.1 活体染色 28
3.3.2 染料排除检测法 29
3.4 细胞培养的污染和检测 29
3.4.1 污染途径 30
3.4.2 污染对培养细胞的影响及检测 30
3.4.3 污染的预防 32
3.4.4 污染的排除 32
思考题 33
第二篇 动物细胞工程 37
第4章 细胞培养 37
4.1 培养细胞的生物学特征 38
4.1.1 体外培养细胞的分型 38
4.1.2 培养细胞的生长特点 39
4.1.3 培养细胞的生长与增殖过程 40
4.1.4 培养细胞的遗传学特征 42
4.1.5 体内外细胞的差异及培养细胞的分化 42
4.2 细胞培养液 42
4.2.1 细胞培养的常用液体 43
4.2.2 培养基 44
4.3 细胞的基本培养技术 51
4.3.1 原代培养 51
4.3.2 传代培养 55
4.3.3 常用培养技术 56
4.4 细胞系和细胞株的建立 65
4.4.1 细胞系和细胞株的种类 65
4.4.2 建立细胞系（或株）的要求 66
4.4.3 细胞系和细胞株的鉴定 67
4.5 细胞的冻存、复苏和运输 68
4.5.1 细胞的冻存 68
4.5.2 细胞的复苏 68
4.5.3 细胞的运输 68
思考题 69
附 实验2 细胞培养液的配制 69
实验3 原代细胞培养 70
实验4 培养细胞的增殖及活力测定 71
实验5 细胞的传代培养 73
实验6 细胞的冻存和复苏 74
第5章 细胞融合与单克隆抗体 76
5.1 单克隆抗体技术 77
5.1.1 单克隆抗体技术的原理 77
5.1.2 杂交瘤制备 78
5.1.3 单克隆抗体的大量制备 85
5.2 人源性单克隆抗体制备 86
5.2.1 EB病毒转化技术 86
5.2.2 细胞工程单克隆抗体技术 87
5.2.3 人单抗制备技术的发展 90
5.3 单克隆抗体在医学上的应用 92
5.3.1 单克隆抗体靶向制剂 92
5.3.2 单克隆抗体在肿瘤诊断与治疗中的应用 93
思考题 94
附 实验7 动物细胞融合 95
第6章 胚胎工程 96
6.1 胚胎发育的基本过程和机制 96
6.1.1 胚胎发育的基本过程 97
6.1.2 胚胎发育的基本机制 101
6.2 体外受精 104
6.2.1 体外受精的研究历史 105
6.2.2 体外受精技术 105
6.3 胚胎移植技术 107
6.3.1 胚胎移植的研究历史 108
6.3.2 胚胎移植技术 108
6.4 胚胎分割技术 110
6.4.1 胚胎分割的方法 110
6.4.2 分割胚的培养 111
6.4.3 胚胎分割目前存在的问题和发展前景 111
6.5 早期胚胎的体外培养 112
6.5.1 胚胎的发育阻滞 112
6.5.2 克服胚胎发育阻滞的方法 112
6.6 胚胎冷冻保存技术 114
6.6.1 抗冻保护剂和冷冻溶液 114
6.6.2 胚胎的冷冻方法 114
6.7 动物的性别控制 115
6.7.1 动物的性别决定 115
6.7.2 性别控制的方法与技术 116
6.7.3 性别控制的意义 120
思考题 120
附 实验8 哺乳动物体外受精和早期胚胎的体外培养 121
第7章 干细胞与组织工程 124
7.1 胚胎干细胞 125
7.1.1 胚胎干细胞的研究概况 125
7.1.2 胚胎干细胞的生物学特性 125
7.1.3 胚胎干细胞的建系 127
7.1.4 ES细胞的鉴定 128
7.1.5 ES细胞的应用前景及面临的难题 128
7.2 成体干细胞 130
7.2.1 造血干细胞 130
7.2.2 神经干细胞 130
7.2.3 胰岛干细胞 131
7.2.4 皮肤干细胞 131
7.3 组织工程 131
7.3.1 组织工程化皮肤 131
7.3.2 组织工程化骨骼 132
7.3.3 组织工程化血管 132
7.3.4 组织工程化管状器官 132
7.3.5 组织工程化腺体器官 132
思考题 133
第8章 核移植技术与动物克隆 134
8.1 核移植技术 135
8.1.1 核移植技术的类型 135
8.1.2 核移植技术的一般操作程序 135
8.2 核移植技术的应用 137
8.2.1 核移植技术的应用 137
8.2.2 核移植技术存在的问题 138
思考题 138
附 实验9 鱼类核移植实验 138
实验10 哺乳类细胞核移植实验 139
第9章 转基因动物与动物生物反应器 141
9.1 转基因动物的培育技术 142
9.1.1 基因显微注射法 142
9.1.2 逆转录病毒感染法 143
9.1.3 胚胎干细胞介导法 143
9.1.4 精子载体导入法 144
9.1.5 YAC介导的基因转移 144
9.1.6 细胞核移植技术 144
9.2 转基因动物的应用 144
9.2.1 改良动物品种 144
9.2.2 生物制药 145
9.2.3 建立诊断和治疗人类疾病的动物模型 145
9.2.4 生产可用于人体器官移植的动物器官 145
9.2.5 基因治疗 145
9.2.6 基因打靶 146
9.2.7 转基因动物应用面临的问题 147
9.3 动物乳腺生物反应器 148
9.3.1 动物乳腺生物反应器的制备 148
9.3.2 动物乳腺生物反应器的优点 149
9.3.3 动物乳腺生物反应器的应用 149
9.3.4 动物乳腺生物反应器存在的问题 150
思考题 151
附 实验11 磷酸钙沉淀法转染细胞 151
实验12 电穿孔和电融合技术 152
第10章 动物染色体工程 155
10.1 动物染色体倍性改造 155
10.1.1 动物的多倍体育种 155
10.1.2 动物的单倍体育种 158
10.2 动物染色体结构的改造 160
10.2.1 染色体片段的删除和重排 160
10.2.2 染色体的易位工程 160
10.3 人工染色体 161
10.3.1 酵母人工染色体 161
10.3.2 细菌人工染色体 162
10.3.3 哺乳类人工染色体 162
10.3.4 人工染色体的应用 163
思考题 163
推荐网址 164
第三篇 植物细胞工程 167
第11章 植物组织培养 167
11.1 植物组织培养的理论基础 168
11.1.1 植物的无性繁殖 168
11.1.2 植物细胞全能性理论 169
11.1.3 植物细胞的脱分化和再分化 169
11.2 植物组织培养 171
11.2.1 实验材料的清洗和消毒 171
11.2.2 培养基 173
11.2.3 接种 178
11.2.4 种质保存 179
11.2.5 植物细胞的大规模培养技术 181
思考题 184
附 实验13 植物组织培养培养基的配制 184
实验14 植物细胞的悬浮培养及其次生代谢产物的生产 186
实验15 植物叶片的脱分化和再分化培养 187
第12章 植物的快速繁殖 189
12.1 植物快速无性繁殖 189
12.2 植物脱毒 191
12.3 植物快速繁殖和试管苗工厂化生产中的注意事项 192
思考题 192
附 实验16 月季快繁 192
第13章 体外单倍体诱导与单倍体育种 194
13.1 植物小孢子发育过程 195
13.2 花药和花粉培养 195
13.2.1 花药培养 195
13.2.2 花粉培养 196
13.2.3 小孢子母细胞培养 196
13.3 花药与花粉培养方法 197
13.3.1 材料的选择 197
13.3.2 材料的预处理 198
13.3.3 培养基 199
13.3.4 接种与再生植株的培育 201
13.4 单倍体育种在生产实践中的应用 202
思考题 203
第14章 植物胚胎培养 204
14.1 胚培养 204
14.1.1 成熟胚培养 204
14.1.2 幼胚培养 205
14.1.3 胚培养的意义 205
14.2 子房培养 206
14.3 被子植物胚乳培养 207
14.3.1 植物胚乳的发育特性 207
14.3.2 影响胚乳培养的因素 208
14.3.3 胚乳培养的意义 208
思考题 208
附 实验17 植物幼胚培养 208
实验18 玉米成熟胚的培养 209
第15章 体细胞胚胎发生和人工种子 211
15.1 愈伤组织与体细胞胚胎发生 211
15.1.1 愈伤组织的诱导 212
15.1.2 愈伤组织器官的发生 212
15.2 人工种子 213
15.2.1 人工种子的制备 213
15.2.2 人工种子的研究现状 215
思考题 216
第16章 植物原生质体融合技术 217
16.1 植物原生质体的制备 218
16.1.1 植物原生质体的分离 218
16.1.2 影响植物原生质体数量和活力的因素 218
16.1.3 植物原生质体的纯化 219
16.1.4 植物原生质体的培养方法 219
16.2 植物原生质体的融合 219
16.2.1 植物原生质体的融合技术 219
16.2.2 融合体 221
16.3 杂种细胞的筛选 221
16.3.1 遗传互补选择法 221
16.3.2 可见标记法 222
16.4 体细胞杂种的鉴定 222
16.5 体细胞融合的意义 222
思考题 223
附 实验19 植物体细胞原生质体的制备及融合 223
第17章 植物染色体工程 226
17.1 植物染色体倍性改造 226
17.1.1 染色体加倍技术 227
17.1.2 植物的多倍体育种 228
17.1.3 植物的单倍体育种 231
17.2 植物染色体非整倍体改造 233
17.2.1 染色体的削减 233
17.2.2 染色体的添加 234
思考题 235
第18章 植物转基因技术 236
18.1 植物基因转化技术 237
18.1.1 农杆菌介导转化法 237
18.1.2 基因枪介导转化法 239
18.2 转基因植物 240
18.2.1 植物抗虫基因工程 240
18.2.2 植物抗病基因工程 240
18.2.3 植物抗逆基因工程 241
18.2.4 植物品质改良的基因工程 241
18.2.5 植物叶绿体基因工程 241
18.2.6 植物生物反应器 241
思考题 241
附 实验20 土壤农杆菌的转化实验（叶盘法） 242
推荐网址 244
参考文献 245
附录 250
英文专业名词索引 255