第一部分 实验室基本知识 1
一、实验室规则 1
二、实验室基本操作 2
三、实验记录与实验报告 3
四、实验误差与数据处理 5
五、植物样品的采取、处理与保存 10
六、缓冲溶液 12
第二部分 实验 16
第一章 糖 16
实验一 植物组织中糖含量的测定 16
实验二 还原糖含量的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法) 19
实验三 糖的定量测定(蒽酮法) 21
第二章 氨基酸和蛋白质 23
实验四 氨基酸的纸层析 23
实验五 脯氨酸含量的测定 25
实验六 蛋白质及氨基酸的呈色反应 27
实验七 蛋白质的沉淀反应 29
实验八 蛋白质的两性反应和等电点的测定 32
实验九 蛋白质含量的测定 34
Ⅰ 双缩脲法测定蛋白质含量 34
Ⅱ 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 35
Ⅲ 紫外分光光度法测定蛋白质含量 37
Ⅳ Folin-酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质含量 39
实验十 细胞色素C的制备和测定 41
实验十一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)测定蛋白质相对分子质量 45
实验十二 凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量 50
第三章 酶和维生素 56
实验十三 酶的特异性 56
实验十四 温度、pH值对淀粉酶活性的影响 58
Ⅰ 温度对淀粉酶活性的影响 58
Ⅱ pH值对淀粉酶活性的影响 59
实验十五 过氧化氢酶活性的测定 61
实验十六 过氧化物酶活性的测定 63
实验十七 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳测定过氧化物同工酶 65
实验十八 植物组织中硝酸还原酶活性的测定 70
实验十九 淀粉酶活性的测定 72
实验二十 酶浓度对酶促反应速度的影响——碱性磷酸酶活性的测定 75
实验二十一 底物浓度对酶促反应速度的影响——米氏常数的测定 77
实验二十二 溶菌酶的提取和系列性质测定 79
Ⅰ 溶菌酶的提取 79
Ⅱ 蛋白质浓度、酶活力测定 81
Ⅲ 酶促动力学(Km测定、脲的抑制) 82
Ⅳ 酶的最适pH值 84
Ⅴ 酶的最适温度 85
Ⅵ 分子筛层析测酶相对分子质量 86
Ⅶ SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定酶相对分子质量及其纯度鉴定 87
实验二十三 维生素C含量的测定 90
第四章 核酸 92
实验二十四 DNA的制备 92
Ⅰ DNA的制备及其含量测定(浓盐分离法) 92
Ⅱ 植物组织中核酸的提取及定量测定 94
实验二十五 DNA的含量测定 97
Ⅰ 紫外吸收法测定DNA含量 97
Ⅱ 定磷法测定DNA含量 99
Ⅲ 二苯胺显色法测定DNA含量 101
实验二十六 离子交换柱层析分离核苷酸 103
第三部分 附录 107
一、离心技术 107
二、分光光度计说明与原理 111
三、常用蛋白质相对分子质量(Mr)标准参照物 115
四、常用缓冲溶液的配制方法 115
五、实验室中常用酸碱的密度和浓度 120
六、硫酸铵饱和度的常用表 121