环境工程微生物学实验须知 1
第一章 环境工程微生物学基本实验技术 2
第一节 准备实验——接种工具与瓶塞及其使用 2
一、接种工具 2
二、瓶塞（过滤塞） 4
第二节 常用器皿及其包装 5
一、常用玻璃器皿的种类、规格及使用 5
实验1-1 常用玻璃器皿的清洗和包装 15
二、环境工程微生物学实验常用设备及使用 17
第三节 培养基及其配制 22
一、培养基的种类 22
二、培养基的配制 24
实验1-2 培养基的配制 25
第四节 消毒与灭菌技术 27
一、湿热灭菌 27
二、干热灭菌 29
三、紫外灭菌 29
四、过滤除菌 29
实验1-3 消毒与灭菌 31
第五节 接种与无菌操作技术 33
一、接种概念 33
二、无菌操作的概念 33
三、接种与无菌操作的基本要求 33
四、接种前的具体准备 34
五、接种方法 34
六、思考题 37
第六节 环境工程微生物的分离与纯化技术 37
一、控制培养条件的方法 37
二、菌落水平上的分离与纯化 38
实验1-4 纯种分离 40
三、细胞水平上的分离与纯化 42
第七节 菌落形态观察与计数 43
一、细菌和酵母菌菌落的异同点 44
二、放线菌和霉菌菌落形态的异同点 44
实验1-5 微生物培养特征的观察 45
第八节 环境工程微生物显微技术 46
一、普通光学显微镜 47
实验1-6 微生物形态的观察 52
实验1-7 显微镜直接计数与微生物悬滴观察 53
实验1-8 微生物细胞大小的测定 55
二、暗视野显微镜 57
实验1-9 暗视野显微镜的使用及活菌体的观察 58
三、相差显微镜 59
实验1-10 相差显微镜的使用及微生物（酵母）细胞内部结构的观察 60
四、荧光显微镜 61
实验1-11 荧光显微镜的使用及微生物（酵母和细菌）形态结构的观察 63
五、透射电子显微镜 63
实验1-12 透射电子显微镜微生物样品的制备与观察 66
六、扫描电子显微镜 69
实验1-13 扫描电子显微镜微生物样品的制备与观察 71
第九节 微生物的制片与染色技术 73
一、微生物制片技术 73
二、微生物的染色技术 74
三、细菌和放线菌的制片与简单染色技术 76
实验1-14 细菌和放线菌的制片、简单染色与形态观察 76
实验1-15 细菌荚膜、芽孢和鞭毛的制片、简单染色与形态观察 77
四、霉菌和酵母菌的制片与简单染色技术 79
实验1-16 酵母菌和霉菌的制片、染色技术及形态观察 79
实验1-17 革兰染色 80
第二章 综合实验 环境工程微生物的群体生长特性与培养技术 83
实验2-1 微生物生长曲线的制作（光电比浊计数法测定） 83
实验2-2 环境因素（pH、温度、渗透压、化学药物等）对微生物生长的影响 85
实验2-3 好氧微生物的培养 90
实验2-4 厌氧微生物的培养 93
实验2-5 病毒（噬菌体）的培养 96
第三章 研究性实验 污染物降解菌的分离与活性测定技术 100
实验3-1 酚降解菌的分离与降解活性的测定 100
实验3-2 有机磷降解菌的分离与降解活性的测定 102
实验3-3 纤维素降解菌（产纤维素酶细菌）的分离与降解活性的测定 104
实验3-4 淀粉降解菌（产淀粉酶细菌）的分离与降解活性的测定 107
实验3-5 蛋白质降解菌（产蛋白酶细菌）的分离与降解活性的测定 109
实验3-6 石油降解菌的分离与降解活性的测定 111
实验3-7 氰化物降解菌的分离与降解活性的测定 113
实验3-8 硝化细菌的分离与硝化活性的测定 116
实验3-9 氨化细菌的分离与活性的测定 119
实验3-10 聚磷菌的分离与活性测定 121
第四章 环境工程微生物学应用研究型实验 125
实验4-1 微生物产沼气 125
实验4-2 微生物制氢 129
实验4-3 微生物制取酒精（酵母菌的乙醇发酵试验） 132
实验4-4 微生物吸附剂的制备 136
实验4-5 水中大肠菌群数的测定 138
实验4-6 利用Biolog自动分析系统分离鉴定微生物菌群 142
第五章 环境工程微生物学现代分子实验技术 146
实验5-1 扩增片段长度多态性分析（AFLP） 146
实验5 2 限制性片段长度多态性分析（RFLP） 150
实验5-3 随机引物扩增多态性DNA分析（RAPD） 151
实验5-4 聚合酶链反应（PCR） 154
知识拓展 环境工程微生物菌种的保藏 156
附录一 常用培养基的配方 161
附录二 常用试剂和溶液的配制 166
附录三 常用染色液的配制 170
附录四 菌种保藏技术 172
参考文献 173