第一章 层析法概述 1
一 层析法的产生及发展 1
二 层析法的定义 2
三 层析过程 2
四 层析法的分类 3
（一）按分离原理分类 3
（二）按操作形式分类 3
（三）按两相所处的状态分类 3
第二章 反流分布法 4
一 基本原理 4
二 溶剂的选择 8
三 反流分布仪器 9
（一）分液漏斗 9
（二）不锈钢反流分布分析器 10
（三）玻璃反流分布分析器 10
四 应用 10
（一）分离混合物 10
（二）提纯化合物 13
（三）判断化合物的纯度 13
（四）鉴定化合物 13
第三章 柱层析法 14
第一节 吸附柱层析法 14
一 基本原理 14
二 吸附等温线 14
三 分配系数与保留体积 16
四 吸附剂 16
五 溶剂与洗脱剂 20
六 操作方法 22
第二节 分配柱层析法 23
一 基本原理 23
二 分配系数与保留体积的关系式 23
三 支持剂 24
四 固定液 24
五 流动相与溶剂 25
六 操作方法 25
第三节 应用实例 26
一 菠菜叶色素的分离 26
二 中药青蒿化学成分的提取与分离 27
三 脂蛋白脂酶（LPL）和肝一甘油三酯酶（H—TGL）的分离 27
四 血清蛋白质成分的分离 27
五 多核甘酸磷酸化酶的分离 28
第四章 纸层析法 28
一 基本原理 28
（一）化学结构与分配系数的关系 29
（二）溶质的极性与分配系数的关系 31
（三）溶质与溶剂间的互相作用与分配系数的关系 32
（四）PH与分配系数的关系 33
（五）展开方式与Rr值的关系 33
二 层析滤纸的选择与处理 34
三 固定相 35
四 展开剂的选择 35
五操作方法 36
（一）点样 36
（二）展开 37
（三）显色 39
（四）比移值（Rf）的测定 39
六 定性、定量分析 41
（一）定性分析 41
（二）定量分析 41
七 应用实例 41
（一）磺胺类药物的分离与鉴定 41
（二）香豆精类化合物的分离 42
（三）强心甙的分离 42
（四）羟基蒽醌类的分离 42
（五）氨基酸的分离与鉴定 43
（六）对合成CDP一胆碱的鉴定 44
第五章 薄层层析法 44
一 基本原理 44
二吸附剂的选择 45
（一）吸附剂的种类 45
（二）吸附剂颗粒的大小 46
（三）吸附剂的选择 46
三 展开剂的选择 46
四 固定相、展开剂（流动相）和被分离物质三者的关系 46
五 操作方法 47
（一）制板 47
（二）点样 50
（三）展开 50
（四）显色 54
（五）Rr值的测定 54
六 定性、定量分析 54
（一）定性分析 54
（二）定量分析 55
七 应用实例 57
（一）药剂制剂中维生素A与维生素E的分离 57
（二）苦参素针剂中氧化苦参碱和氧化槐果碱的分离 57
（三）心律片中苦参碱和槐果碱的分离与测定 57
（四）四季青和丹参中原儿茶醛的分离 58
（五）生物碱的分离 58
（六）单核苷酸的分离 59
第六章 离子交换层析法 60
一 基本原理 60
二离子交换剂的种类、结构及性质 61
（一）无机离子交换剂 62
（二）有机物离子交换剂 62
（三）电子交换树脂（氧化还原交换树脂） 66
（四）选择性离子交换树脂 67
（五）吸附树脂 68
三 离子交换树脂的特性 68
（一）交联度 68
（二）交换容量及测定方法 68
四 离子交换理论 70
（一）选择性 70
（二）分配系数 72
五 离子交换树脂的选择 72
（一）阳离子交换树脂 72
（二）阴离子交换树脂 72
六 离子交换树脂的处理与再生 72
（一）强酸性阳离子交换树脂的预处理 73
（二）强碱性阴离子交换树脂的预处理 73
（三）弱酸性阳离子交换树脂的预处理 73
（四）弱碱性阴离子交换树脂的预处理 73
（五）再生 74
七 操作方法 74
（一）装层析柱 74
（二）样品量与树脂量的比例 74
（三）洗脱 74
八应用实例 74
（一）氨基酸的分离 74
（二）核苷酸的分离 75
（三）人血清胰蛋白酶抑制剂的分离纯化 76
（四）蛋白质的分离 76
第七章 凝胶层析法 77
一 基本原理 77
（一）分子筛作用 77
（二）凝胶层析内水和外水体积的计算 78
（三）分配系数（KD）的测定 79
（四）Rf值的测定和意义 80
（五）分离体积 80
（六）上样体积的预测 80
二 凝胶的种类 81
（一）天然高聚物 81
（二）人工合成的高聚物 81
三 葡聚糖凝胶的化学结构与性质 81
四 凝胶层析中的其他作用 83
（一）离子交换作用 83
（二）结构效应 85
五 操作方法 85
（一）凝胶层析柱的制备 85
（二）加样 89
（三）洗脱 90
（四）凝胶的再生 91
六应用实例 91
（一）免疫球蛋白的轻链和重链的分离 91
（二）兔网组织细胞可溶性RNA的分离 92
（三）环状核苷酸的分离 92
（四）猪四肢骨中抗炎蛋白肽的分离 93
（五）葡萄糖中淀粉的分离 93
第八章 气相层析法 94
第一节 概述 94
一 气相层析法的分类 94
二气相层析法的特点 94
三气相层析仪的一般流程 95
四气相层析法的一般分离原理 95
第二节 层析理论 96
一 基本概念 96
（一）色谱峰 96
（二）基线 96
（三）保留值 96
（四）色谱峰区域宽度 98
二 塔板理论 98
（一）分配平衡 99
（二）塔板理论 100
三 速率理论一范氏方程（Van Deemtor） 104
（一）涡流扩散项 104
（二）分子扩散项 105
（三）传质阻力项 106
第三节 气相层析仪 107
一 层析柱 107
（一）层析柱的分类 107
（二）固定液 107
（三）载体（担体） 110
（四）填充柱的制备 113
二 检测器 113
（一）检测器的分类 113
（二）检测器的性能指标 114
（三）热导池检测器（TC D） 116
（四）氢焰离子化检测器（FID） 118
第四节 气相层析分离条件的选择 120
一气相层析分离条件选择的指标 120
（一）柱效能 120
（二）选择性 121
（三）分离度 121
（四）分离度与柱效能、选择性及容量因子间的关系 122
二 气相层析分离条件的选择 123
（一）固定相的选择 123
（二）柱长的选择 123
（三）柱温的选择 123
（四）载气及线速的选择 124
（五）气化室温度及检测室温度的选择 124
（六）进样量的选择 125
第五节 样品的预处理 125
一 分解法 125
二 衍生物制备法 125
（一）酸类 125
（二）氨基酸 126
（三）羟基衍生物 126
（四）胺类 127
（五）醛酮类 127
（六）酯类 127
第六节 定性、定量分析 128
一 定性分析 128
（一）利用保留值定性 128
（二）利用化学反应定性 128
二 定量分析 130
（一）峰面积的测量方法 130
（二）定量校正因子 135
（三）定量方法 136
第七节 误差和数据处理 139
一 准确度与精密度 140
二 误差与偏差 140
（一）误差 140
（二）偏差 140
（三）可信度 143
三 试验数据的取舍 144
四 定量分析误差的来源 144
（一）系统误差 144
（二）非系统误差 145
（三）过失误差 145
五 提高分析结果准确度的方法 145
（一）增加平行测定次数，减小非系统误差 145
（二）检查并消除测定过程中的系统误差 145
六 定量分析允许偏差范围 146
第八节 气相层析仪故障的产生及排除方法 147
第九节 应用实例 154
一 冰醋酸的含水量测定 154
二 强力素霉含量测定 155
三 药品中糖精的分离与测定 155
四 七种常见巴比妥和导眠能的分析 156
五 中草药有效成分一砂仁挥发油的分析 157
六17α一乙炔雌三醇3一环戊醚的测定 157
七 尿中17—酮类固醇的测定 158
八 血小板中甘碳五烯酸（20： 5， W3）与花生四烯酸（20： 4，W6）比值的分析 159
九 血液中甲硫醇（M T）、乙硫醇（ET）和甲硫醚（DMS）的分离 160
十 孕妇羊水中软脂酸的测定 160
十一 对疾病的快速诊断 161
第九章 高效液相层析法 161
第一节 概述 161
一 高效液相层析法的分类 161
二 高效液相层析法的特点 162
三 高效液相层析仪的一般流程 162
第二节 基本原理 163
一 四种类型液相层析的保留值 163
（一）保留时间 163
（二）保留体积 164
（三）比移值（Rr） 164
二 四种类型液相层析的分配系数（K） 164
（一）分配层析 164
（二）吸附层析 164
（三）离子交换层析 165
（四）凝胶层析 165
三 分离度 166
（一）分离度与α值的关系 167
（二）分离度与k的关系 167
（三）分离度与n的关系 169
四速率理论方程简介 169
第三节 高效液相层析仪 170
一 高压输液泵 170
（一）对高压输液泵的技术要求 170
（二）高压输液泵的种类 171
（三）各种高压输液泵的伏缺点比较 174
二 层析柱及其填装 174
（一）层析柱 174
（二）进样器 175
（三）柱出口接头 175
（四）柱子与检测器的连接管 175
（五）层析柱的填装 175
（六）柱效检查 179
三 检测器 179
（一）紫外吸收检测器（UV） 179
（二）示差折光检测器（RI） 181
（三）移动式氢火焰离子化检测器 183
（四）荧光检测器 185
（五）介电常数检测器 186
（六）微吸附热检测器 187
（七）电导检测器 188
四 国外生产高效液相层析仪的厂家、型号及性能 191
第四节 固定相与流动相 197
一 固定相 197
（一）液一固吸附层析所用的固定相 197
（二）液一液分配层析所用的固定相 197
（三）离子交换层析所用的固定相一离子交换树脂 199
（四）凝胶层析所用的固定相 199
二 流动相 205
（一）对流动相的一般要求 205
（二）流动相的分类 205
（三）溶剂的极性 206
（四）混合溶剂 207
（五）程序洗提 207
（六）流动相的除气方法 208
第五节 高效液相层析条件的选择 208
一 液相层析分离类型的选择 208
（一）按分子量大小范围来选择层析类型 209
（二）按样品溶解度来选择层析类型 209
（三）按样品分子结构来选择层析类型 209
二 流动相的选择 210
（一）流动相与层析柱的稳定性 210
（二）流动相对固定相不能有不可逆的作用 210
（三）流动相要适用于所选择的检测器 210
（四）流动相对所分析的样品要有一定的溶解能力 210
三 固定相的选择 211
（一）固定相的形状 212
（二）填充剂的颗粒直径和表面积 212
四 操作条件的选择 212
（一）层析柱长度的选择 212
（二）层析柱内径的选择 213
（三）柱压力的选择 213
（四）进样量（进样体积）的选择 213
（五）流动相流量的测定与最佳线速 214
（六）多组分复杂的化合物的分离技术 215
第六节 定性、定量分析 216
一 定性分析 216
（一）利用保留值（V R或tR）定性 216
（二）同系列化合物的保留值对数对取代基碳原子数作图定性 216
（三）利用其他分析仪器结合定性 216
（四）利用官能团化学反应定性 217
（五）利用已知物内标法定性 217
二 定量分析 217
（一）定量操作注意事项 217
（二）定量分析方法 218
第七节 应用实例 220
一 维生素类药物的分离 220
二 激素类药物的分离 220
三 制剂中的肾上腺素类和抗组织胺类药物的测定 221
四 多烯抗真菌素的分离 222
五 三尖杉酯碱类的分离与测定 222
六 胆盐的分离和定量 223
七 青蒿素及其衍生物的含量测定 224
八 血清皮质醇和11一脱氧皮质醇的测定 225
九 血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白中胆固醇的快速测定 225
第十章 液滴逆流层析 226
一 液滴逆流层析的原理 226
二 液滴逆流层析的装置 228
三 液滴逆流层析的应用 229
第十一章 电泳法 232
第一节 基本原理 232
一 电泳法的产生及发展 232
二 电泳分类 233
三 电泳的原理 233
四 影响电泳的因素 234
（一）电场强度 235
（二）质点颗粒 235
（三）缓冲溶液的离子强度 236
（四）缓冲容量和PH值 236
（五）电渗 237
第二节 几种常见的电泳 238
一 纸上电泳 238
（一）原理 238
（二）操作方法 239
（三）应用实例 241
二 醋酸纤维素薄膜电泳 243
（一）原理 243
（二）操作方法 243
（三）应用实例 244
三 聚丙烯酰胺凝胶电泳 245
（一）聚丙烯酰胺凝胶的聚合、结构及其性质 245
（二）聚丙烯酰胺凝胶的分子筛作用 248
（三）连续缓冲体系和不连续缓冲体系 248
（四）操作方法 250
四 对流免疫电泳 253
（一）原理 253
（二）操作方法 253
五 等电点聚焦电泳 255
（一）原理 255
（二）操作方法 257