《典型微囊藻毒素微生物降解技术及原理》PDF下载

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  • 作  者:王俊峰,闫海著
  • 出 版 社:北京:冶金工业出版社
  • 出版年份:2017
  • ISBN:9787502476847
  • 页数:119 页
图书介绍:面对由天然淡水水体富营养化所引发的蓝藻水华污染日益加剧的局势,如何控制蓝藻的过量繁殖生长和有效去除水体中的MCs,已成为我国乃至世界环境科学研究领域的一个难题。本书全面介绍了微生物在高效降解典型藻毒素方面的基础理论及其应用技术。全书共9章,系统地介绍了典型藻毒素物化特性、来源分类、去除技术和生物降解等内容,其中重点介绍了典型藻毒素MC-RR高效降解微生物的筛选、培养、菌属鉴定、动力学及影响因素,高效降解典型藻毒素MC-RR降解基因工程菌的构建技术、PCR技术、生物酶制剂技术和质谱分析技术等方面内容。

1绪论 1

1.1 MCs的物化特性及其毒性 2

1.1.1 MCs的物化特性 2

1.1.2 MCs的毒性 4

1.2 MCs的提取提纯及分析测定 5

1.2.1 MCs的提取提纯研究进展 5

1.2.2 MCs的分析测定研究进展 6

1.3 MCs污染的控制 7

1.3.1 物理法 8

1.3.2 氧化降解法 9

1.3.3 生物降解法 12

2研究内容及技术路线 18

2.1 研究目标 18

2.2 研究内容 18

2.2.1 菌种筛选及其生理生化特征研究 18

2.2.2 菌株的分子生物学鉴定 18

2.2.3 菌株降解MC-RR特性 18

2.2.4 基因USTB-05-A的克隆 19

2.2.5 基因USTB-05-A的表达 19

2.2.6 菌株降解MC-RR的第一步分子途径及机理 19

2.3 技术路线 20

3降解MC-RR菌株的筛选与生理生化特征 21

3.1 实验材料与仪器设备 21

3.1.1 蓝藻藻样 21

3.1.2 菌种来源 21

3.1.3 微生物培养基及培养条件 21

3.1.4 药品与试剂 21

3.1.5 主要仪器 22

3.2 实验方法 22

3.2.1 MC-RR的分析测定 22

3.2.2 MC-RR提取提纯 23

3.2.3 菌种筛选 23

3.2.4 菌株细胞形态观察 24

3.2.5 菌株生长曲线的绘制 25

3.2.6 菌株耐盐性研究 25

3.2.7 菌株耐酸碱性研究 25

3.2.8 菌株抗生素抗性研究 25

3.3 MC-RR的提取提纯结果 25

3.4 菌种筛选结果 26

3.4.1 混合菌种筛选 26

3.4.2 纯菌种筛选 27

3.5 菌落形态观察及革兰氏染色 28

3.6 USTB-05的生长曲线 28

3.7 菌株USTB-05的耐盐性 29

3.8 菌株USTB-05的耐酸碱性 29

3.9 USTB-05对抗生素的抗性 29

3.10 本章小结 29

4菌株USTB-05的分子生物学鉴定 31

4.1 实验材料 31

4.1.1 菌株和质粒 31

4.1.2 培养基 31

4.1.3 PCR引物 32

4.1.4 药品与试剂 32

4.1.5 常用的生物信息分析的相关软件及网站 32

4.1.6 主要仪器 32

4.2 实验方法 33

4.2.1 USTB-05基因组DNA的提取 33

4.2.2 PCR反应体系及步骤 34

4.2.3 琼脂糖凝胶电泳 35

4.2.4 目的基因的回收 35

4.2.5 目的基因与pGEM-T Easy载体连接 36

4.2.6 连接产物转化DH5α感受态细胞 36

4.2.7 质粒的提取 36

4.2.8 阳性克隆鉴定与测序 37

4.2.9 16S rDNA序列分析与菌属鉴定 38

4.3 USTB-05基因组DNA的提取结果 38

4.4 16S rDNA的PCR扩增结果 39

4.5 16S rDNA片段序列分析结果 39

4.5.1 去载体 39

4.5.2 BLAST搜索 40

4.6 系统发育树的绘制 42

4.7 本章小结 43

5 USTB-05对MC-RR的降解特性研究 44

5.1 实验材料 44

5.1.1 菌种与试剂 44

5.1.2 主要仪器 44

5.2 实验方法 45

5.2.1 溶解氧对USTB-05降解MC-RR的效应 45

5.2.2 温度对USTB-05降解MC-RR的影响 45

5.2.3 pH值对USTB-05降解MC-RR的影响 45

5.2.4 USTB-05菌株对MC-RR的降解 46

5.2.5 USTB-05菌株无细胞提取液(CE)制备 46

5.2.6 CE对MC-RR的降解 46

5.3 溶解氧的效应 47

5.4 温度的影响结果 47

5.5 初始pH值的影响结果 48

5.6 不同培养条件下USTB-05的生长情况 49

5.7 USTB-05菌株对MC-RR的降解 49

5.8 无细胞提取液对MC-RR的降解 50

5.9 本章小结 54

6基因USTB-05-A的克隆 55

6.1 实验材料 55

6.1.1 菌种 55

6.1.2 药品及试剂 55

6.1.3 主要溶液 56

6.1.4 主要仪器 56

6.2 实验方法 56

6.2.1 PCR获取USTB-05降解基因簇片段 56

6.2.2 DNA凝胶电泳 57

6.2.3 目的片段回收 57

6.2.4 目的片段与T载体连接 58

6.2.5 连接产物转化DH5α感受态细胞 58

6.2.6 质粒提取 58

6.2.7 阳性克隆鉴定及测序 58

6.2.8 反向PCR获取USTB-05未知序列 58

6.2.9 高保真PCR获取USTB-05菌完整降解基因 60

6.2.10 设计基因USTB-05-A克隆引物 62

6.2.11 PCR扩增、连接T载体、转化及鉴定 63

6.2.12 pGEX-4T-1载体获得 64

6.2.13 目的基因与pGEX-4T-1载体制备 64

6.2.14 重组质粒pGEX-USTB-05-A/BL21 (DE3)构建 65

6.2.15 阳性克隆鉴定及测序 65

6.3 降解MC-RR基因初步探索 65

6.4 反向PCR扩增未知序列 67

6.4.1 反向PCR扩增结果 67

6.4.2 序列分析拼接 67

6.5 高保真PCR获取USTB-05菌降解MC-RR完整基因 69

6.5.1 高保真PCR 69

6.5.2 序列拼接 69

6.5.3 获取开放阅读框(ORF) 69

6.6 PCR扩增USTB-05-A基因 70

6.7 克隆重组质粒转化大肠杆菌的阳性鉴定 70

6.8 T Easy/ USTB-05-A测序结果 71

6.9 USTB-05-A基因与pGEX-4T-1载体双酶切 73

6.10 表达重组质粒转化大肠杆菌的阳性鉴定 74

6.11 本章小结 74

7基因USTB-05-A的表达 76

7.1 实验材料 76

7.1.1 菌种及主要药剂 76

7.1.2 主要溶液 76

7.1.3 主要仪器 76

7.2 实验方法 78

7.2.1 SDS-PAGE检测蛋白质表达 78

7.2.2 USTB-05-A基因工程菌总蛋白提取及浓度测定 79

7.2.3 影响诱导表达单因素条件试验 79

7.2.4 最佳条件下的重组蛋白诱导表达 80

7.2.5 重组蛋白酶包涵体鉴定 81

7.2.6 重组蛋白酶的分离纯化 81

7.2.7 表达蛋白酶的活性验证 82

7.2.8 基因工程菌与USTB-05菌体降解MC-RR活性对比 82

7.3 影响表达量的单因素影响结果 83

7.4 最佳条件下重组蛋白酶诱导表达 84

7.5 包涵体验证结果 85

7.6 表达蛋白降解MC-RR活性验证 85

7.7 重组蛋白酶初步分离 89

7.8 USTB-05菌体与基因工程菌降解MC-RR活性对比 89

7.9 本章小结 95

8 USTB-05催化降解MC-RR第一步机理 96

8.1 实验材料 96

8.1.1 主要溶液 96

8.1.2 主要仪器 96

8.2 实验方法 98

8.2.1 重组蛋白酶对MC-RR的降解 98

8.2.2 MC-RR第一个降解产物质谱分析 98

8.3 重组蛋白酶对MC-RR的降解结果 99

8.4 MC-RR第一个降解产物质谱分析 102

8.5 USTB-05降解MC-RR第一步途径推测 103

8.6 本章小结 105

9结论与展望 106

9.1 主要结论 106

9.2 主要创新点 107

9.3 展望 107

参考文献 108

附录 USTB-05-A基因与mlrA基因序列 118