目录 1
第一章 细胞培养技术 1
第一节 细胞培养的基本原理与技术 1
第二节 细胞培养的方法 6
第三节 体外培养细胞的观察 9
第四节 培养细胞增殖动力学 14
第五节 细胞的冻存、复苏与运输 17
第二章 DNA分析技术 19
第一节 真核细胞基因组DNA的提取 19
第二节 DNA的限制性内切酶消化 22
第三节 DNA的凝胶电泳 30
第四节 DNA的Southern印迹杂交分析 43
第三章 RNA分析技术 49
第一节 从组织或培养的细胞中分离RNA 49
第二节 从新鲜和冰冻血液中提取RNA 53
第三节 逆转录PCR技术 54
第四节 Northern印迹杂交技术 56
第五节 RNA狭缝印迹分析 60
第六节 RNase保护测定法 61
第七节 mRNA的引物延伸分析 64
第八节 RNAi技术路线选择及应用 68
第四章 核酸探针的制备与标记 73
第一节 基本概念 73
第二节 探针的核素标记 79
第三节 非放射性探针标记 84
第四节 探针的纯化和测定 87
第五章 聚合酶链反应 91
第一节 基本PCR技术 91
第二节 PCR反应条件的优化 93
第三节 RT-PCR反应 96
第四节 应用T-载体克隆PCR产物 99
第五节 差异显示PCR 100
第六节 免疫PCR 105
第七节 PCR-ELISA 108
第六章 基因克隆技术 110
第一节 基因克隆技术基本概念 110
第二节 体外连接方法 117
第三节 重组DNA转化宿主细胞 120
第四节 重组子的筛选和鉴定 123
第一节 外源基因导入哺乳动物细胞中的技术方法 129
第七章 外源基因在哺乳动物细胞中的表达 129
第二节 病毒载体介导的基因转移 134
第三节 报告基因的表达及检测 142
第八章 DNA与蛋白质的相互关系 148
第一节 细胞核蛋白的提取 148
第二节 凝胶滞后实验 149
第三节 干扰试验 153
第四节 染色质免疫沉淀实验 156
第一节 蛋白质的提取及浓度测定 159
第九章 蛋白质分析技术 159
第二节 蛋白质检测及鉴定技术 163
第三节 蛋白质的Western印迹分析 166
第四节 新的蛋白质检测技术 171
第十章 网络资源在分子生物学中的应用 178
第一节 生物信息学的概念 178
第二节 生物信息数据库及查询 178
第三节 基因电子克隆的基本思路 186
第四节 核酸与蛋白质序列分析 187
第五节 基因表达谱分析 191
第六节 实验室常用生物学软件 193
第十一章 动物模型 201
第一节 实验动物概述 201
第二节 常用大、小鼠品系介绍 203
第三节 动物模型 204
第四节 实验动物的给药途径、方法和给药量计算方法 207
第五节 实验动物全身麻醉的常用方法及剂量 213
第六节 实验动物体液采集与脏器活检 214
第七节 实验动物的脏器活检 218
一、实验常用器材处理 223
附录 223
二、Tris饱和酚的配制 224
三、常用的缓冲液和试剂 224
四、常用酶的配制 230
五、细菌培养基和抗生素 231
六、核素资料 233
七、核酸及蛋白质数据 234
八、常用分子量标准参照物 236
九、分子生物学常用英语词汇 238
参考文献 269