前言 1
第一章 概述 1
第二章 浸没固定 4
2.1 藻类(新鲜的淡水藻) 4
2.2 海藻类(单细胞海藻) 5
2.3 细菌 5
2.4 细菌 7
2.5 骨(脱钙的) 7
2.6 心肌 8
2.7 软骨(未经脱钙的) 9
2.8 单层培养细胞 10
2.9 染色体 11
2.10 纤毛虫 12
2.11 卵子与合子 13
2.12 胚胎 14
2.13 眼睛 15
2.14 具鞭毛的微生物 15
2.15 游离细胞 16
2.17 叶片(原位固定) 17
2.16 叶 17
2.18 肝 18
2.19 肥大细胞 19
2.20 神经 19
2.21 神经元(高锰酸钾固定) 20
2.22 神经元(戊二醛和四氧化锇) 21
2.23 花粉粒 21
2.24 花粉粒(连同花药) 22
2.26 种子 23
2.25 根 23
2.27 皮肤 24
2.28 粘液霉菌 25
2.29 精细胞 25
2.30 精子(人或动物的精液) 26
2.31 精子 27
2.32 牙齿(经脱钙的) 28
2.33 木材(包含有形成层的) 30
2.34 酵母菌 31
第三章 微管灌注固定 32
3.1 一般方法 32
3.2 中枢神经系统 33
3.3 心脏 36
3.4 肾 38
3.5 肝脏 39
3.6 肺 40
3.7 肌肉(大鼠后肢骨骼肌) 43
第四章 细胞和细胞器的分离与固定 45
4.1 刷状缘 45
4.2 高尔基体 47
4.3 分离的肝细胞 48
4.4 微体 49
4.5 微体(光滑或粗糙的) 50
4.6 线粒体(植物的) 51
4.7 细胞核 52
4.8 细胞核 53
4.9 细胞核(最幼小的) 54
4.10 原生质膜 56
4.11 核糖体(游离的) 58
第五章 包埋 59
5.1 脱水、渗透及聚合的常规方法 59
5.2.2 低粘度环氧树脂 60
5.2 包埋剂配方 60
5.2.1 Araldite 60
5.2.3 Durcupan 61
5.2.4 Epon812 62
5.2.5 GMA(Glycole Methacrylate) 62
5.2.6 Maraglas 63
(2)Epon-DER736 64
(3)DER 332-DER 732 64
(1)Epon-Araldite 64
5.2.7 混合树脂 64
(4)Epon-聚硫橡胶LP-8(Thiokol LP-8) 65
(5)异丁烯酸—苯乙烯(Methacrylate-Styrene) 65
5.2.8 Rigolac 66
5.2.9 Spurr混合液 66
5.2.10 vestopal 66
第六章 快速固定与包埋 67
6.1 动物组织 67
6.2 植物组织 68
7.2.1 戊二醛—卡巴肼混合物 69
7.2 氨基塑料 69
7.1 乙醇—Epon 69
第七章 保存脂类的特殊包埋 69
7.2.2 戊二醛—尿素 70
7.2.3 戊二醛—尿素—乙二醇甲基丙烯酸酯（GMA）共聚体 71
第八章 切片 72
8.1 超薄切片的干涉色与切片的厚度 72
8.2 切片程序 72
8.2.1 材料、工具 72
8.2.2 方法 73
8.3 切片缺陷及补救办法 74
8.4 冷冻切片 81
8.4.1 动物或病理组织(经过固定的) 81
8.4.2 动物组织(未经固定的) 81
8.4.3 植物组织(经过固定的) 82
8.4.4 植物组织(未经固定的) 83
第九章 厚切片的染色 84
9.1 用于植物组织的天青B 84
9.2 天青B—亚甲兰 84
9.3 硷性品红—亚甲兰 85
9.4 苏木精—焰红B 86
10.1 Alcian兰(爱尔新兰) 88
10.2 铋 88
第十章 染色 88
10.3 碘化铋 89
10.4 铟 89
10.5 碘 90
10.6 铁 90
10.7 镧 91
10.8.2 醋酸铅 92
10.8.3 柠檬酸铅 92
10.8.1 醋酸铅 92
10.8 铅 92
10.8.4 柠檬酸铅 93
10.8.5 柠檬酸铅 94
10.8.6 氢氧化铅 94
10.8.7 氢氧化铅 94
10.8.8 氢氧化铅 95
10.8.9 酒石酸铅 96
10.9 四氧化锇 96
10.12 钌红 97
10.11 高锰酸钾 97
10.10 磷钨酸 97
10.13 银 98
10.13.1 高碘酸—银 98
10.13.2 高碘酸—铬酸—银 99
10.14 钍 99
10.15 醋酸双氧铀 100
10.16 醋酸双氧铀 100
10.17 钒 101
11.1 病毒和噬菌体 102
第十一章 负染色 102
11.2 细菌 103
11.3 细菌片断 103
第十二章 普通细胞化学 104
12.1 酸、碱基团 104
12.2 羟基 104
12.3 核酸(一般的) 106
12.3.1 三氯化铟 106
12.3.2 钨酸钠 106
12.4 DNA 107
12.4.1 Feulgen—六亚甲四胺银法 107
12.3.3 醋酸双氧铀法 107
12.4.2 Feulgen—Schiff—乙醇铊法 108
12.5 RNA 110
12.6 蛋白质 111
12.6.1 丙烯醛 111
12.6.2 磷钨酸 112
12.6.3 含硫氢基蛋白质 113
12.6.4 碱性蛋白质 113
12.7 碳水化合物 114
12.7.1 过碘酸—六亚甲四胺银 114
12.7.2 氨基硫脲—蛋白质酸银 115
12.7.3 过碘酸—碱性铋 116
12.8 酸性粘液 117
12.8.1 甘油—氯化铁氨法 117
12.8.2 胶体铁法 117
12.8.3 胶体钍法 118
12.9 脂类 119
12.9.1 乙醇—Epon法 119
12.9.2 戊二醛—卡巴肼法 119
12.9.3 戊二醛—尿素法 120
12.9.4 戊二醛—尿素—乙二醇甲基丙烯酸酯（GMA）共聚体法 121
12.10.1 钠离子 122
12.10 无机离子 122
12.10.2 钙离子 123
12.10.3 磷酸盐离子 123
12.10.4 氯化物离子 124
12.10.5 重金属离子 124
第十三章 酶细胞化学方法 126
13.1 酶细胞化学方法 126
13.2 酸性水解酶 128
13.2.1 酸性磷酸酶 128
13.2.3 核苷酸二磷酯酶 129
13.2.2 酸性单核苷酸酶 129
13.2.4 硫酸酯酶 130
13.3 ATP水解酶 131
13.3.1 三磷酸腺苷酶 131
13.3.2 腺苷酸环化酶 132
13.4 其它磷酸酶 133
13.4.1 碱性磷酸酶 133
13.4.1.a 钙离子捕获 133
13.4.1.b 胞苷—磷酸底物法 134
13.4.1.c 枸橼酸盐螯合 135
13.4.2 葡萄糖—6—磷酸酶 136
13.4.3 硫胺素焦磷酸酶 137
13.5 脂酶 138
13.5.1 钙—胆酸钠 138
13.5.2 铅—乙酰二硫化物 139
13.6 过氧化物酶 140
13.7 过氧化氢酶 141
13.8 琥珀酸脱氢酶 142
13.9 细胞色素氧化酶 143
13.10 多酚氧化酶 143
13.11 乙醇酸盐脱氢酶 144
13.12 纤维素酶 145
13.13 DOPA—氧化酶 147
13.14 α—羟酸氧化酶 147
13.15 递氢酶 149
13.16 乳酸脱氢酶 149
13.17 氨基肽酶 150
13.18 γ—谷氨酰转肽酶 152
13.19 转氨酶 153
13.20 乌氨酸氨基甲酰转移酶 154
14.1 免疫细胞化学方法常规处理程序 156
第十四章 免疫细胞化学方法 156
14.2.1 抗体片断 158
14.2.1.a 单价Fab碎片 158
14.2 抗体的分离提纯 158
14.2.1.b F(ab＇)2碎片 159
14.2.2 特异性抗体 160
14.2.2.a 戊二醛直接交联法 160
14.3.1 胶体金 162
14.3.1.a 白磷还原 162
14.3 标记物的制备 162
14.2.2.b 蛋白A亲和层析法 162
14.3.1.b 白磷还原 163
14.3.1.c 抗坏血酸还原 163
14.3.1.d 枸檬酸三钠还原法 164
14.3.1.e 乙醇—超声波还原法 164
14.3.1.f 硼氢化钠还原 165
14.3.1.g 鞣酸—柠檬酸钠还原 165
14.3.2 铁蛋白提纯 166
14.4 抗体标记 167
14.4.1 异源免疫球蛋白吸附法 167
14.4.2 PAg法 170
14.4.3.a 间苯二甲基二异氰酸盐(XC) 171
14.4.3.b 甲苯2.4—二异氰酸盐(TC) 171
14.4.3 铁蛋白标记抗体 171
14.4.3.c 对,对＇二氟一间,间＇—二硝基二苯矾( FNPS) 172
14.4.3.d 戊二醛偶联 172
一步法 172
两步法 172
14.4.4 酶标记 174
14.4.4.a 对,对＇二氟—间,间＇—二硝基二苯矾（FNPS） 174
14.4.4.c 戊二醛两步法 175
14.4.4.b 戊二醛一步法 175
14.5 免疫细胞化学染色 176
14.5.1 胶体金标记物 176
14.5.1.a 环氧树脂超薄切片 176
14.5.1.b 低粘度树脂包埋超薄切片 177
14.5.1.c Low K4M快速包埋超薄切片 178
14.5.1.d Low K4M包埋超薄切片 179
14.5.1.e 冷冻超薄切片 180
14.5.2 铁蛋白标记抗体的免疫电镜染色 182
14.5.2.a 细胞表面或细胞外抗原 182
14.5.1.f PAg染色法 182
14.5.2.b 细胞内抗原 183
〈1〉GMA包埋 183
〈2〉BSA交联包埋 184
〈3〉冷冻超薄切片 185
14.5.2.c 亚细胞碎片 186
14.5.2.d 组织培养细胞 186
14.5.3 酶标记抗体 187
14.5.3.a 细胞表面或细胞外 187
14.5.2.e 病毒和大分子 187
14.5.3.b 组织或细胞内抗原 188
14.5.2.c 冷冻厚切片 189
14.6 对照试验 190
14.6.1 特异性抗体封闭 190
14.6.2 特异性抗原吸收 190
14.6.3 非特异性对照 190
第十五章 放射自显影 191
15.1 半薄切片 191
15.2 超薄切片 192
15.2.1 环套敷膜法 192
15.2.2 平板法(平基法) 193
15.2.3 孔膜法 194
第十六章 分子生物学电镜实验技术 195
16.1 蛋白质大分子的负染 195
16.1.1 染色剂 195
16.1.2 滴染法 196
16.1.3 混染法 196
16.2 核酸大分子铺展 196
16.2.1 双链DNA和RNA 197
16.2.3 单链RNA 198
16.2.2 含单链区的DNA分子 198
16.2.4 扩散法 200
16.2.5 无蛋白质的铺展法 200
16.3 核酸的变性与杂交 201
16.3.1 部分变性 202
16.3.2 DNA—DNA异源双链技术 203
16.3.3 RNA—DNA杂交 204
16.4 核酸与蛋白质的复合物 205
16.4.1 蛋白质与双链DNA特异序列的结合 205
16.4.2 蛋白质与单链RNA的特异序列的结合 206
16.5.2 米勒法 207
16.5.1 一步释放法 207
16.5 染色质铺展 207
16.6 原位杂交技术 209
第十七章 金属投影与复型 212
17.1 投影 212
17.1.1 一次投影 212
17.1.2 二次投影 213
17.1.3 旋转投影 214
17.1.4 铂—碳锥形投影 214
17.2.2 二级复型 215
17.2.1 一级复型 215
17.2 复型 215
17.3 冷冻断裂(蚀刻)复型 216
第十八章 扫描电镜样品制备 220
18.1 概述 220
18.2 游离细胞 222
18.3 柔软组织(动物) 223
18.4 植物生长锥 224
18.5 植物幼嫩组织(腋芽、花蕾) 224
18.6 花药(幼嫩的) 225
18.8 花粉(经自然干燥的) 226
18.7 成熟含水分低的植物组织(木材、叶片) 226
18.9 花粉(新鲜的) 227
18.10 动物胚胎或软组织(含水分高的) 227
18.11 动物单细胞(红细胞、白细胞) 228
18.12 特殊干燥方法 229
18.12.1 丙酮空气干燥 229
18.12.2 乙醚冷冻干燥 229
18.12.3 乙腈真空干燥 229
18,12.4 冷冻干燥 230
18.13 组织导电技术（TCT） 230
18.15 冷冻树脂断裂法 231
18.14 碘化钾—醋酸铅组织导电处理 231
18.16 酶蚀刻法 232
18.17 离子蚀刻 233
附录 234
附录Ⅰ 组织保存 234
附录Ⅱ 缓冲液的配制 235
附录Ⅲ 普通固定液的配制 244
附录Ⅳ 戊二醛的纯化方法 246
附录Ⅴ 硫赶醋酸的纯化方法 247
主要参考文献 248