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前言 1

第一章 概述 1

第二章 浸没固定 4

2.1 藻类(新鲜的淡水藻) 4

2.2 海藻类(单细胞海藻) 5

2.3 细菌 5

2.4 细菌 7

2.5 骨(脱钙的) 7

2.6 心肌 8

2.7 软骨(未经脱钙的) 9

2.8 单层培养细胞 10

2.9 染色体 11

2.10 纤毛虫 12

2.11 卵子与合子 13

2.12 胚胎 14

2.13 眼睛 15

2.14 具鞭毛的微生物 15

2.15 游离细胞 16

2.17 叶片(原位固定) 17

2.16 叶 17

2.18 肝 18

2.19 肥大细胞 19

2.20 神经 19

2.21 神经元(高锰酸钾固定) 20

2.22 神经元(戊二醛和四氧化锇) 21

2.23 花粉粒 21

2.24 花粉粒(连同花药) 22

2.26 种子 23

2.25 根 23

2.27 皮肤 24

2.28 粘液霉菌 25

2.29 精细胞 25

2.30 精子(人或动物的精液) 26

2.31 精子 27

2.32 牙齿(经脱钙的) 28

2.33 木材(包含有形成层的) 30

2.34 酵母菌 31

第三章 微管灌注固定 32

3.1 一般方法 32

3.2 中枢神经系统 33

3.3 心脏 36

3.4 肾 38

3.5 肝脏 39

3.6 肺 40

3.7 肌肉(大鼠后肢骨骼肌) 43

第四章 细胞和细胞器的分离与固定 45

4.1 刷状缘 45

4.2 高尔基体 47

4.3 分离的肝细胞 48

4.4 微体 49

4.5 微体(光滑或粗糙的) 50

4.6 线粒体(植物的) 51

4.7 细胞核 52

4.8 细胞核 53

4.9 细胞核(最幼小的) 54

4.10 原生质膜 56

4.11 核糖体(游离的) 58

第五章 包埋 59

5.1 脱水、渗透及聚合的常规方法 59

5.2.2 低粘度环氧树脂 60

5.2 包埋剂配方 60

5.2.1 Araldite 60

5.2.3 Durcupan 61

5.2.4 Epon812 62

5.2.5 GMA(Glycole Methacrylate) 62

5.2.6 Maraglas 63

(2)Epon-DER736 64

(3)DER 332-DER 732 64

(1)Epon-Araldite 64

5.2.7 混合树脂 64

(4)Epon-聚硫橡胶LP-8(Thiokol LP-8) 65

(5)异丁烯酸—苯乙烯(Methacrylate-Styrene) 65

5.2.8 Rigolac 66

5.2.9 Spurr混合液 66

5.2.10 vestopal 66

第六章 快速固定与包埋 67

6.1 动物组织 67

6.2 植物组织 68

7.2.1 戊二醛—卡巴肼混合物 69

7.2 氨基塑料 69

7.1 乙醇—Epon 69

第七章 保存脂类的特殊包埋 69

7.2.2 戊二醛—尿素 70

7.2.3 戊二醛—尿素—乙二醇甲基丙烯酸酯（GMA）共聚体 71

第八章 切片 72

8.1 超薄切片的干涉色与切片的厚度 72

8.2 切片程序 72

8.2.1 材料、工具 72

8.2.2 方法 73

8.3 切片缺陷及补救办法 74

8.4 冷冻切片 81

8.4.1 动物或病理组织(经过固定的) 81

8.4.2 动物组织(未经固定的) 81

8.4.3 植物组织(经过固定的) 82

8.4.4 植物组织(未经固定的) 83

第九章 厚切片的染色 84

9.1 用于植物组织的天青B 84

9.2 天青B—亚甲兰 84

9.3 硷性品红—亚甲兰 85

9.4 苏木精—焰红B 86

10.1 Alcian兰(爱尔新兰) 88

10.2 铋 88

第十章 染色 88

10.3 碘化铋 89

10.4 铟 89

10.5 碘 90

10.6 铁 90

10.7 镧 91

10.8.2 醋酸铅 92

10.8.3 柠檬酸铅 92

10.8.1 醋酸铅 92

10.8 铅 92

10.8.4 柠檬酸铅 93

10.8.5 柠檬酸铅 94

10.8.6 氢氧化铅 94

10.8.7 氢氧化铅 94

10.8.8 氢氧化铅 95

10.8.9 酒石酸铅 96

10.9 四氧化锇 96

10.12 钌红 97

10.11 高锰酸钾 97

10.10 磷钨酸 97

10.13 银 98

10.13.1 高碘酸—银 98

10.13.2 高碘酸—铬酸—银 99

10.14 钍 99

10.15 醋酸双氧铀 100

10.16 醋酸双氧铀 100

10.17 钒 101

11.1 病毒和噬菌体 102

第十一章 负染色 102

11.2 细菌 103

11.3 细菌片断 103

第十二章 普通细胞化学 104

12.1 酸、碱基团 104

12.2 羟基 104

12.3 核酸(一般的) 106

12.3.1 三氯化铟 106

12.3.2 钨酸钠 106

12.4 DNA 107

12.4.1 Feulgen—六亚甲四胺银法 107

12.3.3 醋酸双氧铀法 107

12.4.2 Feulgen—Schiff—乙醇铊法 108

12.5 RNA 110

12.6 蛋白质 111

12.6.1 丙烯醛 111

12.6.2 磷钨酸 112

12.6.3 含硫氢基蛋白质 113

12.6.4 碱性蛋白质 113

12.7 碳水化合物 114

12.7.1 过碘酸—六亚甲四胺银 114

12.7.2 氨基硫脲—蛋白质酸银 115

12.7.3 过碘酸—碱性铋 116

12.8 酸性粘液 117

12.8.1 甘油—氯化铁氨法 117

12.8.2 胶体铁法 117

12.8.3 胶体钍法 118

12.9 脂类 119

12.9.1 乙醇—Epon法 119

12.9.2 戊二醛—卡巴肼法 119

12.9.3 戊二醛—尿素法 120

12.9.4 戊二醛—尿素—乙二醇甲基丙烯酸酯（GMA）共聚体法 121

12.10.1 钠离子 122

12.10 无机离子 122

12.10.2 钙离子 123

12.10.3 磷酸盐离子 123

12.10.4 氯化物离子 124

12.10.5 重金属离子 124

第十三章 酶细胞化学方法 126

13.1 酶细胞化学方法 126

13.2 酸性水解酶 128

13.2.1 酸性磷酸酶 128

13.2.3 核苷酸二磷酯酶 129

13.2.2 酸性单核苷酸酶 129

13.2.4 硫酸酯酶 130

13.3 ATP水解酶 131

13.3.1 三磷酸腺苷酶 131

13.3.2 腺苷酸环化酶 132

13.4 其它磷酸酶 133

13.4.1 碱性磷酸酶 133

13.4.1.a 钙离子捕获 133

13.4.1.b 胞苷—磷酸底物法 134

13.4.1.c 枸橼酸盐螯合 135

13.4.2 葡萄糖—6—磷酸酶 136

13.4.3 硫胺素焦磷酸酶 137

13.5 脂酶 138

13.5.1 钙—胆酸钠 138

13.5.2 铅—乙酰二硫化物 139

13.6 过氧化物酶 140

13.7 过氧化氢酶 141

13.8 琥珀酸脱氢酶 142

13.9 细胞色素氧化酶 143

13.10 多酚氧化酶 143

13.11 乙醇酸盐脱氢酶 144

13.12 纤维素酶 145

13.13 DOPA—氧化酶 147

13.14 α—羟酸氧化酶 147

13.15 递氢酶 149

13.16 乳酸脱氢酶 149

13.17 氨基肽酶 150

13.18 γ—谷氨酰转肽酶 152

13.19 转氨酶 153

13.20 乌氨酸氨基甲酰转移酶 154

14.1 免疫细胞化学方法常规处理程序 156

第十四章 免疫细胞化学方法 156

14.2.1 抗体片断 158

14.2.1.a 单价Fab碎片 158

14.2 抗体的分离提纯 158

14.2.1.b F(ab＇)2碎片 159

14.2.2 特异性抗体 160

14.2.2.a 戊二醛直接交联法 160

14.3.1 胶体金 162

14.3.1.a 白磷还原 162

14.3 标记物的制备 162

14.2.2.b 蛋白A亲和层析法 162

14.3.1.b 白磷还原 163

14.3.1.c 抗坏血酸还原 163

14.3.1.d 枸檬酸三钠还原法 164

14.3.1.e 乙醇—超声波还原法 164

14.3.1.f 硼氢化钠还原 165

14.3.1.g 鞣酸—柠檬酸钠还原 165

14.3.2 铁蛋白提纯 166

14.4 抗体标记 167

14.4.1 异源免疫球蛋白吸附法 167

14.4.2 PAg法 170

14.4.3.a 间苯二甲基二异氰酸盐(XC) 171

14.4.3.b 甲苯2.4—二异氰酸盐(TC) 171

14.4.3 铁蛋白标记抗体 171

14.4.3.c 对,对＇二氟一间,间＇—二硝基二苯矾( FNPS) 172

14.4.3.d 戊二醛偶联 172

一步法 172

两步法 172

14.4.4 酶标记 174

14.4.4.a 对,对＇二氟—间,间＇—二硝基二苯矾（FNPS） 174

14.4.4.c 戊二醛两步法 175

14.4.4.b 戊二醛一步法 175

14.5 免疫细胞化学染色 176

14.5.1 胶体金标记物 176

14.5.1.a 环氧树脂超薄切片 176

14.5.1.b 低粘度树脂包埋超薄切片 177

14.5.1.c Low K4M快速包埋超薄切片 178

14.5.1.d Low K4M包埋超薄切片 179

14.5.1.e 冷冻超薄切片 180

14.5.2 铁蛋白标记抗体的免疫电镜染色 182

14.5.2.a 细胞表面或细胞外抗原 182

14.5.1.f PAg染色法 182

14.5.2.b 细胞内抗原 183

〈1〉GMA包埋 183

〈2〉BSA交联包埋 184

〈3〉冷冻超薄切片 185

14.5.2.c 亚细胞碎片 186

14.5.2.d 组织培养细胞 186

14.5.3 酶标记抗体 187

14.5.3.a 细胞表面或细胞外 187

14.5.2.e 病毒和大分子 187

14.5.3.b 组织或细胞内抗原 188

14.5.2.c 冷冻厚切片 189

14.6 对照试验 190

14.6.1 特异性抗体封闭 190

14.6.2 特异性抗原吸收 190

14.6.3 非特异性对照 190

第十五章 放射自显影 191

15.1 半薄切片 191

15.2 超薄切片 192

15.2.1 环套敷膜法 192

15.2.2 平板法(平基法) 193

15.2.3 孔膜法 194

第十六章 分子生物学电镜实验技术 195

16.1 蛋白质大分子的负染 195

16.1.1 染色剂 195

16.1.2 滴染法 196

16.1.3 混染法 196

16.2 核酸大分子铺展 196

16.2.1 双链DNA和RNA 197

16.2.3 单链RNA 198

16.2.2 含单链区的DNA分子 198

16.2.4 扩散法 200

16.2.5 无蛋白质的铺展法 200

16.3 核酸的变性与杂交 201

16.3.1 部分变性 202

16.3.2 DNA—DNA异源双链技术 203

16.3.3 RNA—DNA杂交 204

16.4 核酸与蛋白质的复合物 205

16.4.1 蛋白质与双链DNA特异序列的结合 205

16.4.2 蛋白质与单链RNA的特异序列的结合 206

16.5.2 米勒法 207

16.5.1 一步释放法 207

16.5 染色质铺展 207

16.6 原位杂交技术 209

第十七章 金属投影与复型 212

17.1 投影 212

17.1.1 一次投影 212

17.1.2 二次投影 213

17.1.3 旋转投影 214

17.1.4 铂—碳锥形投影 214

17.2.2 二级复型 215

17.2.1 一级复型 215

17.2 复型 215

17.3 冷冻断裂(蚀刻)复型 216

第十八章 扫描电镜样品制备 220

18.1 概述 220

18.2 游离细胞 222

18.3 柔软组织(动物) 223

18.4 植物生长锥 224

18.5 植物幼嫩组织(腋芽、花蕾) 224

18.6 花药(幼嫩的) 225

18.8 花粉(经自然干燥的) 226

18.7 成熟含水分低的植物组织(木材、叶片) 226

18.9 花粉(新鲜的) 227

18.10 动物胚胎或软组织(含水分高的) 227

18.11 动物单细胞(红细胞、白细胞) 228

18.12 特殊干燥方法 229

18.12.1 丙酮空气干燥 229

18.12.2 乙醚冷冻干燥 229

18.12.3 乙腈真空干燥 229

18,12.4 冷冻干燥 230

18.13 组织导电技术（TCT） 230

18.15 冷冻树脂断裂法 231

18.14 碘化钾—醋酸铅组织导电处理 231

18.16 酶蚀刻法 232

18.17 离子蚀刻 233

附录 234

附录Ⅰ 组织保存 234

附录Ⅱ 缓冲液的配制 235

附录Ⅲ 普通固定液的配制 244

附录Ⅳ 戊二醛的纯化方法 246

附录Ⅴ 硫赶醋酸的纯化方法 247

主要参考文献 248