引言 1
第一章 Dct突变对黑素小体蛋白表达及其相关生物学功能的影响 3
1.1实验材料 3
1.1.1细胞来源 3
1.1.2主要仪器设备 4
1.1.3主要试剂及其配制 5
1.2实验方法 17
1.2.1细胞培养 17
1.2.2胞内ROS水平测定 17
1.2.3过氧化氢酶酶活力测定 18
1.2.4不连续蔗糖梯度离心[23] 19
1.2.5蔗糖梯度离心片段酪氨酸酶活性测定 20
1.2.6蔗糖梯度离心片段Det活性测定[25-26] 21
1.2.7蔗糖梯度离心片段电镜检查[18] 22
1.2.8 Western蛋白印迹检测蔗糖梯度离心片段Tyr、Tyrp1、Dct蛋白表达[27] 22
1.3统计学处理与结果 24
1.3.1 slaty与melan-a黑素细胞Tyr、Dct和过氧化氢酶活力比较 24
1.3.2 slaty MC与melan-a MC过氧化氢处理前后胞内ROS水平比较 26
1.3.3 slaty MC与melan-a MC蔗糖梯度离心片段超微结构观察 26
1.3.4 slaty MC与melan-a MC早期和晚期黑素生成蛋白表达水平及酶活性比较 28
1.4讨论 30
第二章 Dct调控的氧化应激改变对黑素小体蛋白免疫原性的影响 33
2.1实验材料 33
2.1.1 CB6F1小鼠来源 33
2.1.2主要仪器设备 33
2.1.3主要试剂及其配制 34
2.2实验方法 38
2.2.1 CB6F1（H2d×2b）小鼠免疫 38
2.2.2 CB6F1（H2d×2b）小鼠T淋巴细胞分离及培养 39
2.2.3 CB6F1（H2d×2b）小鼠眼眶静脉丛血样采集 40
2.2.4黑素小体蛋白诱导的体液免疫反应测定 40
2.2.5黑素小体蛋白诱导的细胞免疫反应测定 41
2.3统计学处理与结果 42
2.3.1黑素小体蛋白免疫CB6F1小鼠后解剖学观察 42
2.3.2黑素小体蛋白免疫CB6F1小鼠后T淋巴细胞形态学观察 43
2.3.3 slaty MC和melan-a MC早期与晚期黑素小体蛋白免疫原性的比较 45
2.3.4氧化应激对黑素小体蛋白免疫原性的影响 47
2.4讨论 50
第三章 合成的DHI/DHICA（1：1）-优黑素在维持黑素小体蛋白低免疫原性中的作用 53
3.1实验材料 53
3.1.1 CB6F1小鼠来源 53
3.1.2主要仪器设备 53
3.1.3主要试剂及其配制 54
3.2实验方法 58
3.2.1 CB6F1（H2d×2b）小鼠免疫 58
3.2.2 CB6F1（H2d×2b）小鼠T淋巴细胞分离及培养 59
3.2.3 CB6F1（H2d×2b）小鼠眼眶静脉丛血样采集 60
3.2.4黑素小体蛋白诱导的体液免疫反应测定 60
3.2.5黑素小体蛋白诱导的细胞免疫反应测定 61
3.3统计学处理与结果 61
3.3.1合成的DHI与DHI/DHICA（1：1）-优黑素对小鼠免疫反应的初步观察 62
3.3.2合成的DHI/DHICA（1：1）-优黑素对维持黑素小体蛋白低免疫原性影响 63
3.4讨论 67
第四章 结论 70
参考文献 71
致谢 79