第1篇 基础知识 2
第1章 分子生物学实验室的基本要求 2
1.1 实验室规则 2
1.2 实验室安全防护 2
1.3 放射性同位素防护 4
1.4 危险化学试剂防护 4
1.5 生物安全防护 6
1.6 实验室物品与仪器的管理 8
第2章 实验记录与实验报告 9
2.1 实验记录 9
2.2 实验报告 10
第3章 仪器使用与溶液配制 11
3.1 常用仪器设备 11
3.2 溶液配制 16
第4章 常用实验用品的处理 17
4.1 清洗 17
4.2 消毒灭菌 18
4.3 液氮的安全使用 19
第5章 分子生物学实验技术原理 22
5.1 细胞培养技术 22
5.2 大肠杆菌的培养与保存 25
第2篇 核酸技术 30
第6章 核酸电泳 30
6.1 琼脂糖凝胶电泳分离DNA 31
6.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离DNA 36
第7章 核酸的分离纯化和鉴定 40
7.1 质粒DNA的提取与纯化 40
7.2 蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA 44
7.3 其他DNA提取方案 49
7.4 RNA的提取 49
第8章 聚合酶链反应（PCR） 61
8.1 普通PCR 61
8.2 RT-PCR 65
8.3 荧光定量PCR 69
第9章 核酸分子杂交 76
9.1 斑点杂交 76
9.2 原位杂交 80
9.3 Southern印迹杂交 85
9.4 Northern印迹杂交 90
第3篇 分子克隆 96
第10章 DNA的酶切 96
10.1 实验目的 96
10.2 实验原理 96
10.3 仪器、材料与试剂 97
10.4 实验流程 97
10.5 实验步骤 97
10.6 结果分析 98
10.7 注意事项 99
10.8 应用 99
第11章 DNA的连接 101
11.1 实验目的 101
11.2 实验原理 101
11.3 仪器、材料与试剂 102
11.4 实验流程 102
11.5 实验步骤 102
11.6 结果分析 102
11.7 注意事项 102
11.8 应用 103
第12章 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 104
12.1 实验目的 104
12.2 实验原理 104
12.3 仪器、材料与试剂 104
12.4 实验流程 105
12.5 实验步骤 105
12.6 结果分析 106
12.7 注意事项 106
12.8 应用 107
第13章 重组子的鉴定 110
13.1 实验目的 110
13.2 实验原理 110
13.3 仪器、材料与试剂 110
13.4 实验流程 110
13.5 实验步骤 110
13.6 结果分析 111
13.7 注意事项 111
13.8 应用 112
第4篇 蛋白技术 118
第14章 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 118
14.1 实验目的 118
14.2 实验原理 118
14.3 仪器、材料与试剂 119
14.4 实验流程 120
14.5 实验步骤 120
14.6 结果分析 121
14.7 注意事项 121
14.8 应用 121
14.9 真核细胞表达外源基因操作步骤 122
第15章 蛋白质的提取与纯化 123
15.1 实验目的 123
15.2 实验原理 123
15.3 仪器与试剂 124
15.4 实验流程 125
15.5 实验步骤 125
15.6 结果分析 126
15.7 注意事项 126
15.8 应用 127
第16章 蛋白质的定量检测 130
16.1 Lowry法测定蛋白质含量 130
16.2 BCA法测定蛋白质含量 132
16.3 Bradford法测定蛋白质含量 134
第17章 目标蛋白质的测定 137
17.1 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 137
17.2 蛋白质的免疫印迹技术（Western-Blot） 141
17.3 免疫共沉淀 146
17.4 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 150
第18章 基因工程菌的大规模培养及高密度发酵技术 154
18.1 实验目的 154
18.2 实验原理 154
18.3 仪器与试剂 155
18.4 实验流程 156
18.5 实验步骤 156
18.6 结果分析 158
18.7 注意事项 158
18.8 应用 158
第5篇 生物信息学在分子生物学实验中的应用 162
第19章 核酸和蛋白质序列的查询和分析 162
19.1 核酸与蛋白质序列的数据库查询 162
19.2 核酸与蛋白质序列的相似性分析 169
第20章 常用的分子生物学分析软件 175
20.1 多序列比对软件 175
20.2 构建系统发育树软件 181
20.3 引物设计软件 188
第6篇 综合性实验 194
第21章 综合性实验概述 194
21.1 实验要求 194
21.2 综合实验报告 194
21.3 实验目的 195
21.4 实验安排 195
21.5 实验材料 195
21.6 实验流程 195
21.7 实验步骤 195
第22章 综合性实验案例 196
22.1 阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD） 196
22.2 katG基因全部缺失和点突变等引起结核菌产生对异烟肼（INH）的耐药研究 198
22.3 亨廷顿舞蹈病（Huntington disease，HD） 201
22.4 H7N9禽流感病 203
22.5 神经营养因子（neurotrophic factors， NTFs） 204
附录 207
附录A 分子生物学实验中的常用数据及换算关系 207
附录B 分子生物学实验中的常用试剂 208
附录C 常用细菌培养基和抗生素溶液 213
附录D 与分子生物学实验相关的实验资料 214
参考文献 216