上篇 生物技术原理 3
第一章 基因工程技术 3
第一节 克隆载体 3
第二节 重组DNA技术 15
第三节 基因文库的构建 28
第四节 PCR技术 40
第五节 核酸分子杂交技术 52
第六节 DNA测序技术 59
第七节 转基因技术 66
第一节 蛋白质的提取与粗分级 77
第二章 蛋白质及酶工程技术 77
第二节 蛋白质的细分级 94
第三节 蛋白质的鉴定 124
第四节 蛋白质结构测定 129
第五节 定点突变技术 139
第六节 蛋白质的原核和真核表达技术 142
第七节 酶工程（酶蛋白工程）概述 144
第三章 细胞工程技术 166
第一节 植物细胞工程技术 166
第二节 动物细胞工程技术 200
第一节 微生物发酵方式 219
第四章 发酵工程技术 219
第二节 发酵过程 226
第五章 其他常用技术 234
第一节 功能基因的克隆技术 234
第二节 基因表达分析技术 239
第三节 RNA干扰（RNAi）技术 242
第四节 双向电泳技术 245
第五节 毛细管电泳技术 249
第六节 酵母双杂交技术 251
实验一 碱裂解法提取质粒DNA 261
第六章 基因工程实验 261
下篇 基本实验 261
实验二 DNA酶切及琼脂糖凝胶电泳 265
实验三 大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒DNA的转化 273
实验四 PCR扩增DNA特异性片段 277
实验五 真核生物基因组DNA的提取 280
实验六 植物组织总RNA的提取及变性电泳 284
实验七 Northern杂交 290
实验八 基因组文库的构建 295
实验九 cDNA文库的构建 298
实验十 动物转基因技术——动物细胞的磷酸钙沉淀转化法 304
实验十一 植物转基因技术——农杆菌介导的花芽浸泡法转化拟南芥植株 308
实验十二 植物转基因技术——农杆菌介导的双子叶植物叶盘转化法 312
第七章 蛋白质及酶工程实验 316
实验一 生物组织总蛋白质的提取 316
实验二 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 319
实验三 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定蛋白质亚基分子量 322
实验四 大肠杆菌中重组蛋白质的诱导表达与亲和层析纯化 328
实验五 蛋白质的免疫印迹分析 335
实验六 Edman降解法测定小肽的氨基酸序列 339
实验七 蛋白质结晶 343
实验八 酶的基本特性 345
实验九 绿色荧光蛋白（GFP）定点突变 350
第八章 细胞工程实验 356
实验一 MS培养基母液的配制 356
实验二 培养基的配制与灭菌 359
实验三 植物培养材料的灭菌与接种 361
实验四 种胚的离体培养 363
实验五 愈伤组织的诱导 365
实验六 悬浮细胞系的建立 366
实验七 植物原生质体的游离和融合 368
实验八 草莓遗传转化实验（农杆菌介导法） 371
实验九 水稻悬浮细胞的遗传转化实验（基因枪法） 373
实验十 动物组织的消化培养及单细胞的获得 375
第九章 发酵工程实验 377
实验一 凝固型酸奶的制作 377
实验二 纤维素酶生产（一）——固体发酵法生产纤维素酶 380
实验三 纤维素酶生产（二）——分级盐析法纯化纤维素酶 383
实验四 纤维素酶生产（三）——凝胶过滤层析法纯化纤维素酶 386
实验五 四环素发酵代谢曲线的绘制 389
第十章 综合设计实验 402
实验一 溶菌酶的纯化、结晶与酶活测定 402
实验二 种子蛋白质含量及组成分析 402
实验三 植物蛋白酶的分离纯化与鉴定 403
实验四 绿色荧光蛋白的原核表达、纯化及鉴定 404
实验五 转绿色荧光蛋白基因烟草的获得及鉴定 404
实验六 大肠杆菌碱性磷酸酶定点诱变与酶活分析 405
附录 407
附录一 实验室规则 407
附录二 实验室安全及防护 409
附录三 常用仪器的使用 414
附录四 常用因特网网址 434
附录五 常用缓冲溶液及试剂的配制 436
附录六 常用实验数据 445