《现代蛋白质实验技术》PDF下载

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  • 作  者:刘国琴,吴玮,陈鹏主编
  • 出 版 社:北京:中国农业大学出版社
  • 出版年份:2011
  • ISBN:9787565504273
  • 页数:218 页
图书介绍:本书所选实验项目主要来自编写者多年的教学经验和科研积累,除传统蛋白质实验技术如DS-PAGE、免疫印迹、双向电泳、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析、酶动力学分析等外,还包括凝胶阻滞电泳、质谱技术、酵母双杂交、Pull-down、Far-western、双分子荧光互补等。

第一部分 蛋白质鉴定 1

实验一SDS-PAGE测定蛋白质分子质量 1

实验辅助说明1:SDS-样品缓冲液及蛋白质样品处理 6

实验二SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳 8

实验辅助说明2:蛋白质分子质量标准 10

实验三 利用非变性凝胶电泳分析蛋白质寡聚体 12

实验辅助说明3:电泳干胶制备 15

实验四 血清蛋白的聚丙烯酰胺凝胶双向电泳分析(非预制胶) 17

实验辅助说明4:预制胶条 21

实验五 利用凝胶阻滞实验(EMSA)分析转录因子 22

实验辅助说明5:生物素化与亲和素 26

实验六 凝胶过滤层析法鉴定蛋白质分子质量 28

实验辅助说明6:层析凝胶使用后的长期保存 32

实验七MALDI-TOF-MS质谱法鉴定蛋白质 33

实验辅助说明7:质谱分析用蛋白质样品制备注意事项 36

实验八 叶绿素蛋白复合物的提取与光谱学测定 38

实验辅助说明8:激发光谱与发射光谱 41

实验九 微丝结合蛋白的结合常数测定 43

实验十 肌动蛋白聚合动力学分析(光散射法) 47

实验十一 蛋白质浓度(或含量)的测定 50

第二部分 蛋白质表达与分离纯化 56

实验十二His-tag融合蛋白的原核表达及纯化 56

实验辅助说明9:抗原决定簇在重组蛋白中的应用 60

实验辅助说明10:Ni2+亲和填料的再生与保存 60

实验十三His-tag融合蛋白可溶性表达的快速微量检测 62

实验辅助说明11:包涵体蛋白的复性 64

实验辅助说明12:常见蛋白酶抑制剂的使用与保存 65

实验十四 绿色荧光蛋白的重组表达与纯化 68

实验辅助说明13:GFP的金属离子螯合层析纯化 75

实验十五 蛋白质重组表达的可视化定量方法 77

实验辅助说明14:菌体的不同裂解方法 79

实验十六GST融合蛋白的表达与亲和纯化 81

实验辅助说明15:用蛋白酶切除蛋白标签 85

实验十七 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达外源蛋白 87

实验辅助说明16:昆虫细胞培养 93

实验十八PEG介导拟南芥叶肉原生质体中外源蛋白的瞬时表达 95

实验辅助说明17:常用荧光蛋白分子波长特性 98

实验十九 亲和层析法分离青豌豆凝集素 99

实验辅助说明18:透析袋的处理 103

实验辅助说明19:微升量级蛋白质样品的透析 103

实验二十 蛋白质离子交换层析 105

实验辅助说明20:离子交换剂的种类与再生 108

实验二十一DNA亲和柱的制备和DNA结合蛋白的纯化 110

实验辅助说明21:蛋白质电泳胶的银染色法 115

实验二十二 利用蔗糖密度梯度超速离心分离蛋白质 117

实验辅助说明22:连续性蔗糖密度梯度制备 119

实验二十三 猪脑微管蛋白的制备 121

实验二十四 兔骨骼肌肌动蛋白的制备 125

实验二十五 蛋白质结晶——悬滴法 128

实验辅助说明23:载片的硅烷化 131

实验辅助说明24:座滴法和三明治滴法培养蛋白质晶体 131

实验二十六 蛋清溶菌酶的纯化以及结晶 133

实验辅助说明25:蛋清中主要蛋白的特性 137

第三部分 酶活性分析 138

实验二十七 果实菠萝蛋白酶的凝胶过滤纯化与活性分析 138

实验二十八 果实菠萝蛋白酶动力学常数的测定 143

实验二十九 激酶与底物的体外磷酸化测定 146

实验辅助说明26:放射性同位素在生物学研究中的应用及辐射防护 149

实验三十 用非变性凝胶电泳法鉴定具有ATP酶活性的蛋白质 151

实验三十一 转基因拟南芥GUS蛋白的定性与定量分析 154

第四部分 蛋白质免疫化学与蛋白质互作 157

实验三十二 抗血清制备 157

实验三十三 血清抗体IgG的分离纯化 164

实验辅助说明27:利用试剂盒亲和纯化抗体 169

实验三十四 利用免疫印迹法鉴定未知蛋白 171

实验辅助说明28:杂交膜的选择 176

实验辅助说明29:蛋白质电转移 177

实验辅助说明30:免疫检测中的非特异位点封闭 177

实验辅助说明31:显色后NC膜上蛋白质条带的再利用 177

实验三十五 免疫共沉淀法研究蛋白质相互作用 179

实验辅助说明32:免疫共沉淀的关键因素 182

实验三十六 蛋白质相互作用的体外验证——Pull-down和Far-western 183

实验辅助说明33:增强型化学发光(ECL) 186

实验三十七 酵母双杂交验证蛋白质相互作用 188

实验三十八 双分子荧光互补技术(BiFC)研究蛋白质体内相互作用 193

实验三十九 酶联免疫吸附法(ELISA)筛选药物 197

附录一 蛋白质分子质量标准 201

附录二 硫酸铵饱和度常用表 203

附录三 常用缓冲液的配制 205

附录四 层析填料 208

附录五 细胞破碎方法 215