第一部分 蛋白质鉴定 1
实验一SDS-PAGE测定蛋白质分子质量 1
实验辅助说明1:SDS-样品缓冲液及蛋白质样品处理 6
实验二SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳 8
实验辅助说明2:蛋白质分子质量标准 10
实验三 利用非变性凝胶电泳分析蛋白质寡聚体 12
实验辅助说明3:电泳干胶制备 15
实验四 血清蛋白的聚丙烯酰胺凝胶双向电泳分析(非预制胶) 17
实验辅助说明4:预制胶条 21
实验五 利用凝胶阻滞实验(EMSA)分析转录因子 22
实验辅助说明5:生物素化与亲和素 26
实验六 凝胶过滤层析法鉴定蛋白质分子质量 28
实验辅助说明6:层析凝胶使用后的长期保存 32
实验七MALDI-TOF-MS质谱法鉴定蛋白质 33
实验辅助说明7:质谱分析用蛋白质样品制备注意事项 36
实验八 叶绿素蛋白复合物的提取与光谱学测定 38
实验辅助说明8:激发光谱与发射光谱 41
实验九 微丝结合蛋白的结合常数测定 43
实验十 肌动蛋白聚合动力学分析(光散射法) 47
实验十一 蛋白质浓度(或含量)的测定 50
第二部分 蛋白质表达与分离纯化 56
实验十二His-tag融合蛋白的原核表达及纯化 56
实验辅助说明9:抗原决定簇在重组蛋白中的应用 60
实验辅助说明10:Ni2+亲和填料的再生与保存 60
实验十三His-tag融合蛋白可溶性表达的快速微量检测 62
实验辅助说明11:包涵体蛋白的复性 64
实验辅助说明12:常见蛋白酶抑制剂的使用与保存 65
实验十四 绿色荧光蛋白的重组表达与纯化 68
实验辅助说明13:GFP的金属离子螯合层析纯化 75
实验十五 蛋白质重组表达的可视化定量方法 77
实验辅助说明14:菌体的不同裂解方法 79
实验十六GST融合蛋白的表达与亲和纯化 81
实验辅助说明15:用蛋白酶切除蛋白标签 85
实验十七 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达外源蛋白 87
实验辅助说明16:昆虫细胞培养 93
实验十八PEG介导拟南芥叶肉原生质体中外源蛋白的瞬时表达 95
实验辅助说明17:常用荧光蛋白分子波长特性 98
实验十九 亲和层析法分离青豌豆凝集素 99
实验辅助说明18:透析袋的处理 103
实验辅助说明19:微升量级蛋白质样品的透析 103
实验二十 蛋白质离子交换层析 105
实验辅助说明20:离子交换剂的种类与再生 108
实验二十一DNA亲和柱的制备和DNA结合蛋白的纯化 110
实验辅助说明21:蛋白质电泳胶的银染色法 115
实验二十二 利用蔗糖密度梯度超速离心分离蛋白质 117
实验辅助说明22:连续性蔗糖密度梯度制备 119
实验二十三 猪脑微管蛋白的制备 121
实验二十四 兔骨骼肌肌动蛋白的制备 125
实验二十五 蛋白质结晶——悬滴法 128
实验辅助说明23:载片的硅烷化 131
实验辅助说明24:座滴法和三明治滴法培养蛋白质晶体 131
实验二十六 蛋清溶菌酶的纯化以及结晶 133
实验辅助说明25:蛋清中主要蛋白的特性 137
第三部分 酶活性分析 138
实验二十七 果实菠萝蛋白酶的凝胶过滤纯化与活性分析 138
实验二十八 果实菠萝蛋白酶动力学常数的测定 143
实验二十九 激酶与底物的体外磷酸化测定 146
实验辅助说明26:放射性同位素在生物学研究中的应用及辐射防护 149
实验三十 用非变性凝胶电泳法鉴定具有ATP酶活性的蛋白质 151
实验三十一 转基因拟南芥GUS蛋白的定性与定量分析 154
第四部分 蛋白质免疫化学与蛋白质互作 157
实验三十二 抗血清制备 157
实验三十三 血清抗体IgG的分离纯化 164
实验辅助说明27:利用试剂盒亲和纯化抗体 169
实验三十四 利用免疫印迹法鉴定未知蛋白 171
实验辅助说明28:杂交膜的选择 176
实验辅助说明29:蛋白质电转移 177
实验辅助说明30:免疫检测中的非特异位点封闭 177
实验辅助说明31:显色后NC膜上蛋白质条带的再利用 177
实验三十五 免疫共沉淀法研究蛋白质相互作用 179
实验辅助说明32:免疫共沉淀的关键因素 182
实验三十六 蛋白质相互作用的体外验证——Pull-down和Far-western 183
实验辅助说明33:增强型化学发光(ECL) 186
实验三十七 酵母双杂交验证蛋白质相互作用 188
实验三十八 双分子荧光互补技术(BiFC)研究蛋白质体内相互作用 193
实验三十九 酶联免疫吸附法(ELISA)筛选药物 197
附录一 蛋白质分子质量标准 201
附录二 硫酸铵饱和度常用表 203
附录三 常用缓冲液的配制 205
附录四 层析填料 208
附录五 细胞破碎方法 215