《分子病理生物学实验技术指南》PDF下载

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  • 作  者:朴英实,林贞花主编;尚永军,延光海等副主编
  • 出 版 社:北京:人民军医出版社
  • 出版年份:2015
  • ISBN:9787509183458
  • 页数:282 页
图书介绍:本书共4章,内容涵盖了常用病理染色、常用细胞实验、分子生物学实验及动物实验在内的基本生物医药科研所需的常用实验手段,以辅助研究生及本科生开展科研工作为目的,侧重各个技能的实用性,对各个实验技术的基本原理也均做了有必要的介绍。本书的主要特点是每个实验都融人了编者在实践中的自身体会和经验,部分章节标注的实验注意点具有重要的指导价值,这些都是实验者最想了解但是一些书籍又很少涉及的问题。本书编者均为工作在科研第一线的、具有多年相关研究经验的病理生物学工作者,在实验方法写作时从研究实际出发,提出研究中常见的问题和研究手段,尽可能使初学者减少实验选择失误及操作失误的几率。本书集实验教学的实用性和科学研究的前瞻性于一体,既适合研究生、本科生教学,开展科研工作,也可作为参考书籍供从事分子生物学研究的相关人员使用。

第1章 组织病理染色 1

第一节 苏木素-伊红染色 1

一、制作切片 2

二、HE染色 5

第二节 特殊染色 6

一、特殊染色的意义 7

二、常见的几种特殊染色 7

第三节 免疫组织化学染色 16

一、防脱片的制作 16

二、免疫组织化学染色 16

第2章 细胞实验 21

第一节 细胞培养基础 21

一、操作前准备 22

二、细胞复苏 22

三、细胞消化 23

四、细胞传代、接种 24

五、细胞冻存 24

六、细胞计数 25

七、原代细胞培养 27

八、常用细胞培养基及其配制方法 31

九、细胞污染及解救方法 34

第二节 细胞功能实验 36

一、肿瘤细胞生物学特性 36

二、体外培养细胞生物学检测方法 38

三、细胞增殖检测-MTT实验 40

四、细胞转染 42

五、划痕实验 47

六、集落(克隆)形成实验 48

七、迁移实验和侵袭实验 53

八、细胞内抗氧化活性测定 55

九、细胞凋亡和自噬检测 59

第三节 三维细胞培养 84

一、三维成球培养 85

二、三维胶原支架材料细胞培养 89

第3章 分子生物学实验 99

第一节 质粒制备、提取 99

一、操作前准备 99

二、菌落制备主要环节 100

三、质粒提取 101

四、培养基配方 103

第二节 分子提取方法 104

一、总RNA提取 105

二、DNA提取 111

三、蛋白提取 115

第三节 聚合酶链式反应 122

一、操作前准备 123

二、PCR仪反应参数的设定 123

三、反应体系的准备 124

四、PCR操作 126

五、PCR产物的分析方法 127

六、PCR产物电泳结果图异常及可能的原因 129

七、反转录PCR 130

八、实时荧光定量PCR 134

九、DNA的PCR扩增 139

第四节 DNA检测 140

一、DNA测序 140

二、单核苷酸多态性检测 147

三、甲基化特异性聚合酶链反应 149

第五节 蛋白质检测 152

一、酶联免疫吸附试验 152

二、蛋白印迹法 156

三、凝胶迁移或电泳迁移率实验 170

四、体外SUMO修饰实验 174

五、免疫共沉淀 178

六、免疫荧光染色及共聚焦显微镜观察 182

七、双荧光素酶报告基因检测 187

第六节 染色质免疫共沉淀 191

一、实验原理 191

二、实验注意点 192

三、基本流程 192

四、实验操作 193

第七节 流式细胞仪检测 195

一、流式细胞仪应用简介 196

二、细胞凋亡检测 197

三、细胞周期检测 199

四、DNA倍体检测 202

五、表面抗原检测 213

六、细胞因子检测 216

七、细胞分选 221

第八节 基因芯片扫描检测 225

一、实验前准备 226

二、总RNA提取、纯化及检测 226

三、反转录合成单链cDNA 227

四、Second strand cDAN合成 228

五、体外转录合成cRNA 229

六、aRNA纯化 230

七、aRNA质量检测 232

八、反转录 233

九、cDNA纯化 234

十、荧光标记 236

十一、芯片的挑选及预处理 237

十二、芯片杂交 238

十三、芯片清洗、扫描 240

第九节 微卫星不稳定性检测 242

一、试剂 243

二、DNA提取 244

三、DNA质检及保存 244

四、聚合酶链式反应(PCR) 244

五、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 244

六、银染 244

七、阳性判定标准 244

第4章 动物体内实验 249

第一节 实验动物的捉拿及处死方法 249

一、捉拿法 249

二、给药方法 250

三、处死方法 253

第二节 动物模型制备 254

一、实验动物的选择原则 254

二、常用实验动物的特点 254

三、小鼠炎症性肠病模型制备 254

四、过敏反应小鼠模型制备 257

五、小鼠体内荷瘤模型制备 259

附录A 英汉名词对照 264

彩图 275