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目录 1

第1章 序论 1

第2章 光镜的酶组织化学 6

2·1　酶组织化学的基本理论 6

一、一般的基本理论 6

二、酶组织化学证明法的基本理论 8

2·2　酶组织化学的基本操作酶材料（组织）的处理 21

一、固定 21

二、冰冻切片和冰冻法 22

三、冰冻干燥法 23

四、冰冻溶解法 24

五、固定-冰冻操作法 25

第3章 电镜的酶细胞化学 29

一、切片的制作 31

3·1　基本操作 31

二、固定 32

三、浸渍或反应 32

3·2　酶活性的检查 32

一、氧化还原酶 32

二、转移酶 40

三、水解酶 42

四、裂解酶（裂合酶） 51

五、异构酶 52

六、连接酶 52

第4章 氧化还原酶 57

一、四唑盐 57

二、电子传递系统和四唑 58

三、脱氢酶的标准证明法 59

四、白细胞的四唑试验（NBTTest） 60

4·1·1　琥珀酸脱氢酶 62

4·1　非依赖脱氢辅酶性脱氢酶 62

4·1·2　二氢乳清酸脱氢酶 64

4·1·3　氨基酸脱氢酶 64

4·1·4　L-古洛糖酸内酯氧化酶 65

4·1·5　胆碱脱氢酶 66

4·2　NAD依赖性脱氢酶 68

4·2·1　（乙）醇脱氢酶次级醇脱氢酶 69

4·2·2　α-磷酸甘油脱氢酶 69

4·2·3　D-木酮糖脱氢酶 69

4·2·4　山梨醇脱氢酶 69

4·2·5　尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶 70

4·2·6　乳酸脱氢酶混合薄膜培养法 71

4·2·7　β-羟基丁酸脱氢酶 73

4·2·8　苹果酸脱氢酶 73

4·2·10　3-磷酸甘油醛脱氢酶 74

4·2·9　甜菜醛脱氢酶 74

4·2·11　谷氨酸脱氢酶 75

4·2·12　二氢硫辛酸脱氢酶 75

4·2·13　前列腺素脱氢酶 76

4·3　NADP依赖性脱氢酶 79

4·3·1　异柠檬酸脱氢酶 79

4·3·2　L-己糖酸脱氢酶 80

4·3·4　戊糖磷酸途径的氧化还原酶的检测 81

4·3·3　木糖醇脱氢酶 81

4.4　与类固醇代谢有关的氧化还原酶 86

一、类固醇3β-醇脱氢酶 87

二、类固醇3β-醇脱氢酶和异构酶 87

三、电子显微镜组织化学 88

四、3α-羟类固醇脱氢酶 89

五、11α-及11β-羟基类固醇脱氢酶 89

六、17β-羟基类固醇脱氢酶 90

七、20α-羟基类固醇脱氢酶 90

九、各种羟基类固醇脱氢酶 91

八、20β-羟基类固醇脱氢酶 91

4·5　丙酮酸氧化酶 95

4·6　L-古洛糖酸内酯氧化酶 97

4·7　尿酸氧化酶 98

4·8　黄嘌呤氧化酶 99

4·9　葡萄糖氧化酶 101

4·10　单胺氧化酶 102

4·11　酪氨酸羟化酶和多巴胺β-羟化酶 107

一、酪氨酸羟化酶（TH） 107

二、多巴胺-β-羟化酶（DBH） 107

三、免疫组织细胞化学的原理 107

四、酪氨酸羟化酶及多巴胺β-羟化酶的免疫荧光法所见 108

4·12　细胞色素氧化酶 112

4·13　过氧化氢酶 118

4·14　过氧化物酶 125

4·15　氧化还原酶的电子显微镜的细胞化学 132

一、亚铁氰化铜法 132

二、四唑盐法 135

第5章 转移酶 139

5·1　氨甲酰基转移酶 139

5·1·1　鸟氨酸氨甲酰基转移酶（OCT） 140

5·1·2　天门冬氨酸氨甲酰基转移酶（ACT） 142

5·2　酰基转移酶 143

5·3　谷氨酰基转移酶 147

5·3·1　γ-谷氨酰基转肽酶 147

5·4　糖基转移酶 150

5·4·1　糖原磷酸化酶 150

5·4·2　分枝糖基转移酶（分枝酶） 156

5·4·3　UDP葡萄糖-糖原葡萄糖基转移酶（糖原合成酶） 158

5·4·4　糖原磷酸化酶及分枝糖基转移酶的电镜组织化学 161

5·5·1　天门冬氨酸氨基转移酶 168

5·5　氨基转移酶 168

5·5·2　鸟氨酸氨基转移酶 170

5·5·3　γ-氨基丁酸氨基转移酶 171

5·6　核苷酸转移酶 172

5·6·1　尿嘧啶核苷酰基转移酶 172

第6章 核酸水解酶（用薄膜底物法检出） 175

6·1　方法 175

一、明胶底物薄膜的制作法 175

二、组织的冰冻切片 176

三、组织切片与明胶底物薄膜的反应 176

四、底物薄膜和组织切片的染色 176

二、染料的选择 177

三、底物的选择 177

四、对照实验 177

一、明胶的选择 177

6·2　实验操作上的注意事项 177

五、酶活性的分布及酶活性的判断 177

6·3　实验结果 178

第7章 水解酶 180

7·1　酯酶 180

一、酯酶的定义和分类 180

二、酯酶的鉴别 182

7·1·1　非特异性酯酶 184

7·1·2　脂酶 193

7·1·3　磷脂酶 197

一、磷脂酶A〔磷脂酰（基）（水解）酶〕 198

二、磷脂酶B〔溶血卵磷脂酰（基）（水解）酶〕 199

7·1·4　乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶 204

7·2　磷酸酶 210

磷酸酶的分类 210

7·2·1　硷性磷酸酶 212

一、硷性磷酸酶的性质 212

三、硷性磷酸酶活性的组织化学检查法 213

二、硷性磷酸酶的生物学意义 213

四、硷性磷酸酶活性的组织内分布 217

7·2·2　对硝基酚磷酸酯酶 222

一、非特异性硷性磷酸酶 223

二、（特异性硷性）对硝基酚磷酸磷酸水解酶 223

三、K+依赖性对硝基酚磷酸酶 224

四、非特异性酸性磷酸酶 226

五、酸性对硝基酚磷酸酶 226

六、其他 226

7·2·3　酸性磷酸酶 228

一、溶酶体性酸性磷酸酶 228

（一）溶酶体性酸性磷酸酶的性质 228

（二）溶酶体性酸性磷酸酶的生理学意义 228

（三）溶酶体性酸性磷酸酶活性的组织化学检查法 228

二、非溶酶体性酸性磷酸酶 231

（四）酸性磷酸酶（溶酶体性）活性的定位 231

（一）酸性对硝基酚磷酸酶 232

（二）酸性磷酰胆硷磷酸酶 232

（三）把β-甘油磷酸作为底物的非溶酶体性酸性磷酸酶 232

7·2·4　5′-核苷酸酶 236

7·2·5　葡萄糖6-磷酸酶 240

7·2·6　葡萄糖1-磷酸酶 242

7·2·7　磷酸二酯酶 243

7·2·8　3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶 244

7.3　焦磷酸酶（三磷酸酶与多磷酸酶） 246

7·3·1　无机焦磷酸酶 246

7·3·2　硫胺素单磷酸酶 250

7·3·3　硫胺素焦磷酸酶 250

7·3·4　硫胺素三磷酸酶 255

7·3·5　核苷二磷酸酶 255

7·3·7　腺苷三磷酸酶 259

7·3·6　核苷三磷酸酶 259

7·3·8　多聚磷酸酶 266

7·4　磷酰胺酶 267

7·5　硫酸酯酶 267

7·6　腺苷酸环化酶和鸟苷酸环化酶 273

7·7　外糖苷酶以及其他酶 281

7·7·1　α-葡糖苷酶 281

7·7·2　β-葡糖苷酶 282

7·7·3　β-半乳糖苷酶 283

7·7·4　β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 283

7·7·5　β-葡糖苷酸酶 284

7·7·6　α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡糖淀粉酶 285

7·8　肽酶 287

蛋白酶，蛋白水解酶 287

7·8·1　氨基肽酶 288

7·8·4　类胰蛋白酶（胰蛋白酶样酶） 295

7·8·2　氨基酰β-萘酰胺裂解酶 295

7·8·3　脂萘酰胺水解酶（酰基转移酶Ⅰ、Ⅱ） 295

7·9　谷氨酰胺酶 297

7·10　尿素酶 299

第8章 裂合酶类 300

8·1　醛缩酶 300

8·2　苹果酸合成酶 302

8·3　柠檬酸合成酶 303

8·4　碳酸酐酶 303

第9章 异构酶 309

9·1　尿嘧啶核苷二磷酸葡萄糖醛酸表异构酶 309

9·2　羟脯氨酸-2-表异构酶 310

9·3　尿嘧啶核苷二磷酸半乳糖-4-表异构酶 310

9·4　磷酸葡萄糖异构酶 310

二、底物薄膜法原理 311

一、酶消化法的原理 311

第10章 酶消化法 311

10·1　一般事项 311

三、关于以酶消化为原理的方法的探讨 312

10·2　检测方法 313

一、有关糖类的检测法 313

二、有关脂质的检测法 315

三、有关蛋白质的检测法 317

四、有关蛋白酶的底物薄膜法 318

五、有关淀粉酶的底物薄膜法 320

六、有关透明质酸酶的底物薄膜法 320

一、放射自显影术的原理 323

二、用于放射自显影的放射物质和β粒子的性质 323

三、放射自显影术的照相作用机制和分辨力 323

11·2　放射自显影术的理论 323

11·1　放射自显影术的创立及其发展 323

第11章 放射自显影术 323

11·3　放射自显影的技术 324

一、光学显微镜放射自显影的技术（浸渍法） 324

二、电子显微镜放射自显影的技术（玻璃切片法） 324

11·4　放射自显影术的应用 325

一、放射自显影术在两方面的应用 325

二、放射自显影术在其它方面的应用 326

11·5　放射自显影术的优缺点 328

一、所谓四维的医学·生物学 328

二、放射自显影术的前景 328

第12章 酶的免疫组织化学 331

12·1　荧光抗体法 331

一、用荧光抗体法证明酶定位的基本问题 331

二、荧光染色操作技术 333

三、用荧光染色法确定酶的定位 337

12·2　酶抗体法 343

一、用于标记的酶 344

二、用酶标记抗体的方法 345

三、标记抗体的精制法 353

四、关于酶抗体法中使用的抗体 359

五、组织标本的处理 365

12·3　铁蛋白标记法 377

一、铁蛋白标记法的建立与由来 377

二、铁蛋白研究的现状 377

三、铁蛋白结合物的制备 378

四、阳离子化的铁蛋白（cationizedferritin,CF） 382

五、铁蛋白结合物的应用 382

六、阳离子化铁蛋白的应用 389

12·4　金属标记抗体法 393

一、使用金属标记法的理由 393

二、金属标记法中的注意事项 393

四、使用的标记物 394

三、标记金属所必需具备的条件 394

五、标记用的金属或其化合物的种类 395

六、标记的方法 395

七、氯汞二茂络铁（CMF）标记法 396

八、羧醛二茂络铁（FCA）标记法 398

九、铋标记法 399

十、金标记抗体法 400

十一、组织的处理 402

第13章 同工酶 405

一、发现的经过及定义 405

二、同工酶的生理学意义 407

三、同工酶的研究对于生物学各领域的贡献 408

四、同工酶的组织化学检查 410

五、同工酶的分离法 410

六、同工酶研究二例 414

附录　主要的缓冲溶液表 420