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第一章 概论 陈啸梅、周文郁 1

一、组织化学方法的种类 1

二、组织化学技术的基本要求 2

三、组织化学的进展 2

主要参考文献 3

第二章 组织化学技术 陈啸梅、王乃英 5

第一节 固定 5

一、固定的目的 5

二、固定的方法和固定液的选择 5

(二) 脂类 6

(一) 多糖 6

(三) 核蛋白及核酸 7

(四) 酶 7

第二节 切片的制备 10

一、冰冻切片 10

(一) 冰冻切片机切片 10

(二) 半导体致冷切片 11

(三) 恒冷箱切片 11

二、冰冻干燥 14

三、冰冻替代法 16

(二) Baker氏甲醛钙液 17

(一) 磷酸缓冲中性甲醛(10%) 17

附：固定液及制片方法 17

一、固定液 17

(三) Gendre氏液 18

(四) Carnoy氏液 18

(五) Lillie氏A.A.F.液 18

(六) 粘多糖和粘液物质固定液 18

(九) 酸性缓冲丙酮 19

(十) 蒸气固定 19

(十一) 4%甲醛液 19

(八) 甲醛-蔗糖-氨水液(示胆碱酯酶 ChE) 19

(七) 显示SH基固定液 19

(十二) 4%多聚甲醛/0.1M磷酸缓冲液 20

(十三) 4%多聚甲醛/0.1M二甲胂酸缓冲液 20

(十四) 2.5%戊二醛/0.1M磷酸缓冲液或0.1M二甲胂酸缓冲液 20

(十五) 4%多聚甲醛+2.5%戊二醛/0.2M二甲胂酸缓冲液 20

(十六) 四氧化锇的配制方法 20

二、制片方法 23

(一) 冰冻替代技术 23

(二) 切片替代技术(Patten及Nown,1958;Chang及Hori,1961) 24

主要参考文献 26

(三)切片替代技术(Chang及Yokayama,1970) 26

第一节 蛋白质的分类 28

一、简单蛋白质 28

二、结合蛋白质 28

第二节 个别氨基酸的鉴别 28

第三章 蛋白质 陈啸梅 28

一、二硝其氟苯法 30

二、米伦氏反应 30

三、硫氢基与二硫键的显示 30

四、精氨酸 32

一、碱性固绿法 33

第三节 组蛋白 33

二、铵银法 34

三、肝素-爱尔蓝(HAB)法 34

附：蛋白质的显示方法 34

一、 二硝基氟苯(DNFB)法 34

二、米伦反应示酪氨酸 36

三、铁氰化铁法示SH基 37

四、碱性四唑盐示SH基及S-S键 38

五、汞橙(RSR)法示SH基 38

七、坂口反应示精氨酸 40

六、组化坂口反应示精氨酸 40

八、碱性固绿法 42

九、肝素-爱尔蓝(HAB)染色法 43

主要参考文献 45

第四章 核酸 陈啸梅、朱蓬第 47

第一节 Schiff试剂 47

第二节 Feulgen反应示DNA 48

第三节 核酸与碱性染料 50

一、甲基绿-焦宁法 50

二、甲苯胺蓝-钼酸盐法 51

一、Feulgen反应 52

附：核酸的显示方法 52

二、三氯醋酸-Feulgen-固绿 54

三、甲基绿-焦宁及RNase法示RNA 55

四、甲基绿-焦宁技术 57

五、甲苯胺蓝法示核糖蛋白 58

六、提取方法 59

(一) 提取DNA 59

(二) 提取RNA 60

主要参考文献 61

二、粘液物质 64

一、多糖 64

第一节 分类 64

第五章 糖类 陈啸梅 64

三、糖蛋白 65

四、粘液脂类 65

第二节 保存方法 66

第三节 糖原 66

一、过碘酸-Schiff(PAS)反应原理 67

二、酶消化法 69

第四节 酸性粘液物质及异色性染色 69

(一) 阳离子染料 70

一、阳离子基团 70

(二) 金属阳离子 71

二、荧光抗体法 71

三、同位素标记 71

附：糖类的显示方法 72

一、PAS反应 72

二、三茂铁甲基羧基酰肼显示糖原 74

三、爱尔蓝示酸性粘液物质(CEC法) 76

四、爱尔蓝示中性及酸性粘液物质 77

五、渗析铁法示酸性粘液物质 78

六、甲苯胺蓝法 79

七、甲酸-结晶紫法示类淀粉 80

主要参考文献 81

第六章 脂类 陈啸梅 83

第一节 固定 83

第二节 脂类的显示方法 84

一、物理方法显示脂类 85

二、化学方法显示脂类 86

三、选择性提取 89

四、脂类电镜组化 89

五、组织中的脂色素 90

附：脂类的显示方法 91

一、溴-苏丹黑法示脂类 92

二、油红O示中性脂肪 93

三、酸性氧化苏木精示磷脂 94

四、氢氧化钠-酸性氧化苏木精法示神经磷脂 96

五、硫酸尼罗蓝示酸性及中性脂类 96

六、丙酮-硫酸尼罗蓝法示磷脂 97

七、铜-红氨酸法示游离脂肪酸 98

八、Schultz反应示胆固醇 99

九、过氯酸-萘醌(PAN)法示胆固醇 100

十、酶的方法示胆固醇及胆固醇酯 100

十二、尼罗蓝示黑色素及脂褐素 102

十一、胞浆反应示缩醛磷脂 102

主要参考文献 103

第七章 酶 陈啸梅 105

第一节 酶的保存及影响酶活性的因素 105

第二节 酶的组化方法 107

一、沉淀反应 107

(一) 金属阳离子沉淀反应 107

(二) 偶联偶氮沉淀反应 108

二、电子传递的方法 110

三、漂浮保温法 111

四、环、框技术 111

一、盖片染色缸法 111

二、滴加作用液法 111

第三节 组化示酶的保温技术 111

五、半透膜技术 112

第四节 酶的超微细胞化学 112

第五节 同功酶 115

主要参考文献 115

第八章 水解酶 陈啸梅 117

第一节 磷酸酶类 117

一、碱性磷酸酶 117

二、酸性磷酸酶 121

三、5＇-核苷酸酶 123

四、葡萄糖-6-磷酸酶 124

五、腺苷三磷酸酶 125

六、腺苷酸环化酶 127

七、核苷二磷酸酶 128

八、硫胺素焦磷酸酶 128

第二节 羧酯水解酶 129

一、非特异性酯酶 130

二、胆碱酯酶 131

(一) 乙酰胆碱酯酶 131

(二) 胆碱酯酶 132

第三节 亮氨酸氨基肽酶 133

第四节 β-葡糖苷酸酶 134

一、铁羟基喹啉法 135

二、偶联偶氮法 135

附：水解酶的显示方法 136

一、钙-钴法示碱性磷酸酶 136

二、偶联偶氮(同时偶联)法示碱性磷酸酶 137

三、柠檬酸铅法示碱性磷酸酶(EM) 139

四、硫化铅法示酸性磷酸酶(Gomori,1950) 141

五、硫化铅法示酸性磷酸酶(Chang,1980) 143

六、偶联偶氮法示酸性磷酸酶 145

七、锇桥连技术示酸性磷酸酶(EM) 147

八、铅法示5＇-核苷酸酶 149

九、硫化铅法示葡萄糖-6-磷酸酶 151

十、硫化铅法示葡萄糖-6-磷酸酶 153

十一、钙激活的腺苷三磷酸酶 154

十二、镁激活的腺苷三磷酸酶 155

十三、钠、钾激活的腺苷三磷酸酶 157

十四、钠-钾腺苷三磷酸酶(EM) 158

十五、线粒体腺苷三磷酸酶(EM) 161

十六、铅法示腺苷酸环化酶 162

十七、铅法示核苷二磷酸酶 164

十八、铅法示硫胺素焦磷酸酶 165

十九、膜技术示总非特异性酯酶 167

二十、同时偶联法示非特异性酯酶 168

二十一、酸性酯酶显示法 170

二十二、亚铁氰化铜法示乙酰胆碱酯酶 172

二十三、铜-铅-硫胆碱技术示乙酰胆碱酯酶及胆碱酯酶(EM) 175

二十四、氨基肽酶 176

二十五、同时偶联法示β-葡糖苷酸酶 177

主要参考文献 179

第一节 细胞色素氧化酶 183

第九章 氧化酶与过氧化物酶 陈啸梅 183

第二节 DOPA氧化酶 184

第三节 DOPA胺-β-羟化酶(DBH) 185

第四节 单胺氧化酶(MAO) 185

第五节 过氧化物酶 187

附：氧化酶与过氧化物酶的显示方法 188

一、细胞色素氧化酶 188

二、二氨基联苯胺法示细胞色素氧化酶(Seligman等，1968) 189

三、二氨基联苯胺法示细胞色素氧化酶(Novikoff及Goldfischer,1969) 191

四、DOPA氧化酶 192

五、四唑盐法示单胺氧化酶 193

六、亚铁氰化铜法示单胺氧化酶 194

七、嗜锇四唑盐法示单胺氧化酶(EM) 195

八、二氨基联苯胺法示过氧化物酶 197

九、二氨基联苯胺法示过氧化物小体 198

十、髓性过氧化物酶的显示 199

十一、辣根过氧化物酶示踪法 200

主要参考文献 202

第十章 脱氢酶及四唑还原酶 陈啸梅 204

第一节 四唑盐 204

第二节 脱氢酶的一般组化 207

一、琥珀酸脱氢酶 209

第三节 不需辅酶的脱氢酶 209

二、甘油-3-磷酸脱氢酶 210

第四节 四唑还原酶 211

第五节 需辅酶的脱氢酶 212

一、尿核苷二磷酸葡糖脱氢酶 212

二、羟基甾体脱氢酶 212

三、甘油-3-磷酸脱氢酶 214

四、谷氨酸脱氢酶 215

五、异柠檬酸脱氢酶 216

六、乳酸脱氢酶 216

七、葡糖-6-磷酸脱氢酶和6-磷酸葡糖酸脱氢酶 218

八、苹果酸脱氢酶 219

九、苹果酸脱氢酶 220

附：脱氢酶及四唑还原酶的显示方法 220

一、结合酶的标准方法 220

二、可溶性酶的标准方法 223

三、琥珀酸脱氢酶 224

四、亚铁氰化铜法示琥珀酸脱氢酶(EM) 226

五、BSPT示琥珀酸脱氢酶(EM) 227

六、尿核苷二磷酸葡糖脱氢酶 229

七、3β-羟基甾体脱氢酶 230

八、谷氨酸脱氢酶 231

九、乳酸脱氢酶显示法 233

十、明胶凝胶作用液示乳酸脱氢酶 235

十一、锇桥连技术示乳酸脱氢酶(EM) 236

十二、嗜锇四唑盐示乳酸脱氢酶(EM) 240

十三、PVA法示乳酸脱氢酶同功酶 242

十四、葡糖-6-磷酸脱氢酶 244

十五、苹果酸脱氢酶 245

主要参考文献 247

第一节 胆碱乙酰化酶 250

第十一章 转移酶 陈啸梅 250

第二节 肉毒碱乙酰化酶 251

第三节 γ-谷氨酰转肽酶 252

第四节 磷酸化酶 253

附：转移酶的显示方法 254

一、胆碱乙酰化酶 254

二、亚铁氰化铀法示肉毒碱乙酰化酶 255

三、镉法示肉毒碱乙酰化酶 258

四、γ-谷氨酰转肽酶 259

五、γ-谷氨酰转肽酶(EM) 260

六、磷酸化酶 262

第十二章 生物胺荧光组织化学技术 彭俊云 266

一、甲醛诱发生物单胺荧光化学反应 267

第一节 甲醛、乙醛酸诱发生物单胺荧光化学反应原理 267

二、乙醛酸诱发生物单胺荧光化学反应 269

第二节 生物单胺递质荧光的鉴别 271

二、醛类诱发生物单胺递质荧光团的荧光与组织内自发荧光的区别 272

(一) 氢硼化物反应区别法 272

(二) 紫外光照射区别法 272

(二) 荧光显微分光光度计区别法 272

(一) 滤光片区别法 272

一、生物单胺递质荧光团之间的区别 272

(三) 水淬灭荧光区别法 273

(四) 空白对照区别法 273

第三节 邻苯二醛显示组织胺荧光法 273

第四节 荧光显微镜观察和照相 274

一、荧光显微镜观察 274

二、照相 276

附：生物胺荧光显示法 277

一、甲醛诱发生物单胺递质荧光法 277

(一) 冰冻干燥、甲醛蒸气诱发荧光石蜡切片法显示生物单胺递质 277

(二) 薄膜组织铺片甲醛诱发荧光法显示生物单胺递质 280

(一) 恒冷箱切机切片乙醛酸诱发荧光法显示生物单胺递质 281

二、乙醛酸诱发生物单胺递质荧光法 281

(二) 薄膜组织铺片乙醛酸诱发荧光法显示生物单胺递质 282

三、铝-甲醛显示生物单胺递质荧光组织化学技术 284

(一) 铝-甲醛冰冻干燥石蜡切片法显示生物单胺递质 284

(二) 铝-甲醛恒冷箱切片机切片法显示生物单胺递质 288

四、氢硼化钠特殊试验 289

五、邻苯二醛显示组织胺荧光法 290

六、恒冷箱切片机切片的CA与多巴胺β-羟化酶的连续显示法 292

七、去甲肾上腺素和乙酰胆碱酯酶的同时显示法 294

八、乙醛酸诱发儿茶酚胺荧光和乙酰胆碱酯酶连续显示法 295

主要参考文献 297

第十三章 免疫组织化学方法 周文郁 299

第一节 荧光抗体法 299

一、荧光抗体法的原理 300

二、荧光染色液的制备 302

(一) 免疫球蛋白(IgG)的调制 302

(二) 荧光素及其标记原理 304

(三) 标记荧光素的具体步骤(以FITC为例) 306

(四) 非特异染色的去除 307

(五) 荧光抗体液的检定 309

三、染色标本的准备 310

(一) 荧光染色的注意事项 312

四、染色 312

(二) 染色方法与步骤 313

(三) 对照染色 315

五、荧光显微镜观察及其在组化定位中的应用 316

第二节 酶标抗体法 316

一、酶标抗体液的制备 317

(一) 免疫球蛋白(IgC)的调制 317

(二) 标记用的酶及其纯化方法 318

(三) 标记与精制的方法 320

(四) 酶标抗体液的检定 322

(一) 固定 323

二、组织材料的处理 323

(二) 切片 325

三、染色 325

(一) 光学显微镜标本的染色 325

(二) 电镜标本的染色 328

(三) 对照染色法 329

四、镜检时注意事项 329

主要参考文献 330

第十四章 定量组织化学技术--显微分光光度测量法 周文郁 331

一、原理 331

二、显微分光光度测量法的特殊性 333

三、几种常用的显微分光光度测量法简介 334

(一) 固定光束测定法 334

(二) 单光束扫描测定法 340

四、标本的处理 344

(一) 组织或细胞的处理 344

(二) 载玻片、盖玻片及封固剂 345

主要参考文献 346

附录 陈啸梅、周文郁、彭俊云、朱蓬弟、王乃英 347

一、国际原子量表(1961) 347

二、克分子(M)和当量(N)溶液 350

三、缓冲液 355

四、包埋、切片方法 366

五、本书所用非组化方法的染液配制 369

六、封固剂 372

七、酶的组化方法一览表 373

八、四唑盐缩写、化学名、俗名及分子量 376

九、本书所用试剂的分子量、厂牌及规格 378

十、公制度量衡单位表 388

十一、求物质相对含量(M＇)的电子计算机计算程序(BASIC语言) 388

十二、英汉名词对照 389