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第一章 微生物学检查的基本技术 1

实验一 细菌的形态检查 1

一、显微镜油镜的使用及保护 1

二、细菌不染色标本检查法 3

三、细菌的染色法 4

四、细菌的基本形态和特殊构造的观察 7

实验二 细菌的人工培养法 8

一、培养基的制备程序 8

二、细菌的分离接种技术 10

三、细菌的培养方法 13

四、细菌的倾注培养和活菌计数 15

五、细菌培养物性状的观察 16

六、细菌的生化反应 17

七、数字编码鉴定技术 20

实验三 环境、体表细菌的检查和消毒灭菌试验 22

一、空气中细菌的检测（沉降法） 22

二、正常人体皮肤及随身物品细菌的检查 23

三、鼻咽喉及口腔中细菌的检查 24

四、热力杀菌试验 24

五、紫外线杀菌试验 27

六、滤器除菌试验 28

七、常用化学消毒剂的杀菌试验 30

八、噬菌体裂菌试验 31

实验四 细菌遗传变异的相关试验 32

一、细菌光滑型菌落与粗糙型菌落变异的证实 32

二、细菌耐药性变异的证实 33

三、抗生素及中草药敏感性试验 34

四、自发突变选择学说的证实 37

五、转座子诱变技术 39

实验五 动物实验 42

一、实验动物的选择与管理 42

二、动物接种与采血技术 43

三、肺炎链球菌小白鼠感染实验及感染细菌的检查 45

四、透明质酸酶扩散实验 47

五、内毒素的致热作用及内毒素检测 48

六、破伤风外毒素的致病作用及抗毒素的保护作用 49

第二章 常见细菌的培养鉴定 51

实验六 病原性球菌 51

一、病原性球菌的形态、染色性及培养特性 51

二、葡萄球菌血浆凝固酶实验 52

三、抗链球菌溶血素O测定 53

四、肺炎链球菌胆汁溶解实验 54

五、病原性球菌脓汁标本的检验 55

实验七 肠道杆菌 56

一、大肠埃希菌的分离与鉴定 56

二、沙门菌属和志贺菌属的分离与鉴定 58

三、肥达反应 61

实验八 霍乱弧菌、空肠弯曲菌和幽门螺杆菌 63

一、霍乱弧菌的培养与鉴定 63

二、副溶血弧菌的培养与鉴定 64

三、空肠弯曲菌的形态、染色性与培养特性 65

四、幽门螺杆菌的形态、染色性与培养特性 66

实验九 厌氧性细菌 67

一、厌氧芽胞梭菌的形态、染色性及培养特性 67

二、无芽胞厌氧菌的形态、染色性及培养特性 68

三、破伤风外毒素与抗毒素中和试验 69

四、产气荚膜梭菌动物试验 69

五、临床标本厌氧菌的分离培养与鉴定 69

实验十 分枝杆菌属 70

一、结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌的形态、染色性及培养特性 71

二、结核分枝杆菌的抗酸染色法 71

三、结核分枝杆菌的荧光素染色法 72

实验十一 棒状杆菌属 74

一、白喉棒状杆菌的形态及染色特性 75

二、白喉棒状杆菌的培养特性 76

三、白喉棒状杆菌的毒力试验 76

实验十二 动物源性细菌 78

一、炭疽芽胞杆菌的形态染色 78

二、炭疽芽胞杆菌的分离培养 79

三、炭疽芽胞杆菌的串珠试验 80

四、布鲁菌属的形态染色 81

五、布鲁菌玻片凝集试验 82

六、鼠疫耶尔森菌的形态染色 83

实验十三 螺旋体 83

一、病原性螺旋体的形态染色 84

二、问号状钩端螺旋体的培养技术 85

三、问号状钩端螺旋体的暗视野检查 85

四、问号状钩端螺旋体显微镜凝集试验 87

五、苍白密螺旋体苍白亚种（梅毒螺旋体）血清学试验 88

实验十四 支原体 92

一、肺炎支原体形态及菌落观察 92

二、肺炎支原体冷凝集试验 93

三、溶脲脲原体脲酶试验 93

实验十五 衣原体 94

一、沙眼衣原体包涵体的形态观察 94

二、免疫荧光法检测沙眼衣原体 95

三、ELISA法检测肺炎衣原体 96

实验十六 立克次体 96

一、立克次体的形态与染色 97

二、外斐反应（Weil-Felix Reaction） 97

实验十七 放线菌 98

一、放线菌的“硫磺颗粒”检查 98

二、放线菌的分离培养与生化鉴定 99

第三章 真菌学实验 102

实验十八 真菌的基本性状鉴定 102

一、真菌形态结构的观察 102

二、真菌小培养 104

三、真菌的生化试验 104

四、真菌的药敏试验 105

实验十九 常见浅部真菌的鉴定 106

一、真菌性皮屑镜检 106

二、毛发穿孔试验 107

实验二十 常见深部真菌的鉴定 108

一、新生隐球菌墨汁负染色法 108

二、白假丝酵母的鉴定试验 108

第四章 病毒学实验 111

实验二十一 病毒的分离培养 111

一、病毒的动物接种法 111

二、病毒的鸡胚接种法 112

三、病毒的组织细胞培养法 114

实验二十二 流行性感冒病毒的分离与鉴定 116

一、流感病毒分离鉴定的程序与原则 116

二、标本的收集处理和鸡胚接种 117

三、尿液的收获 118

四、血球凝集试验 118

五、血球凝集抑制试验 119

实验二十三 肠道病毒 121

一、肠道病毒的分离鉴定 121

二、轮状病毒的检测 123

实验二十四 肝炎病毒 126

一、ELISA法检测甲型肝炎病毒IgM抗体 126

二、ELISA法检测乙型肝炎病毒表面抗原 127

三、ELISA法检测乙型肝炎病毒核心抗体IgM 128

四、PCR法检测HBV 130

五、斑点杂交法检测HBV-DNA 131

六、ELISA法检测丙型肝炎病毒IgM 133

实验二十五 登革病毒 134

一、斑计数法（plaque assay）测定登革病毒滴度 134

二、登革病毒中和试验 136

实验二十六 人类免疫缺陷病毒 139

一、ELISA法检测HIV抗体筛选试验 140

二、Western blot法检测HIV抗体确认试验 142

第五章 微生物诊断新技术 143

实验二十七 生物发光技术在微生物检测中的应用 143

实验二十八 细菌核酸检测技术 144

一、细菌基因组DNA的制备 144

二、细菌DNA中（G+C）mol％的测定 146

三、固相膜分子杂交 147

四、菌落原位杂交 149

五、DNA芯片技术 150

六、多聚酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR） 151

实验二十九 16s rRNA基因PCR扩增序列分析与指纹图谱分析 153

一、16s rRNA基因PCR扩增序列分析 153

二、限制性片段长度多态性分析 156

三、随机扩增DNA多态性分析 157

四、单链构象多态性分析 157

实验三十 细菌基因敲除技术 159

一、鼠伤寒沙门菌lpp1和lpp2基因敲除载体的构建 160

二、鼠伤寒沙门菌感受态细胞的制备及电穿孔转化 162

三、基因敲除细菌的筛选和鉴定 163

四、基因敲除鼠伤寒沙门菌和野生菌对T84肠上皮细胞侵袭能力的比较 164

实验三十一 RNA干扰技术 165

一、siRNA的设计和制备 165

二、应用siRNA抑制流行性感冒病毒在宿主细胞内的复制 167

附录 169

附录一 实验室常用器材的处理与消毒灭菌 169

附录二 常用染色液的配制方法 170

附录三 细菌的染色法 171

附录四 常用消毒液和清洁液的配制法 175

附录五 常用试剂和溶液的配制法 177

附录六 常用细菌培养基的制备法 180

附录七 培养基pH的测定 187

附录八 抗菌免疫血清的制备法 188

附录九 常用细胞培养用液和培养基的配制 190

附录十 微生物毒种的保存法 193