微生物生物技术 细菌系统实验指南PDF电子书下载

第1章 细菌分子微生物学基础 1

实验1.1 基因组DNA的分离 1

导言 1

原理 1

所需试剂及其作用 2

操作步骤 3

观察 4

结果表格 4

疑难问题和解决方案 4

注意事项 5

操作流程 5

实验1.2 细菌裂解物的制备 6

导言 6

原理 7

操作步骤 8

观察 9

结果表格 10

疑难问题和解决方案 10

注意事项 10

操作流程 11

实验1.3 质粒的分离 13

导言 13

原理 14

所需试剂及其作用 15

操作步骤 16

观察 17

结果表格 17

疑难问题和解决方案 17

注意事项 17

操作流程 18

实验1.4 细菌总RNA的分离 19

导言 19

原理 19

所需试剂及其作用 20

操作步骤 21

观察 22

结果表格 22

疑难问题和解决方案 23

注意事项 23

操作流程 23

实验1.5 16S rRNA基因的扩增 24

导言 24

原理 26

所需试剂及其作用 27

操作步骤 28

观察 30

疑难问题和解决方案 30

注意事项 30

操作流程 31

实验1.6 琼脂糖凝胶电泳 31

导言 31

原理 32

所需试剂及其作用 33

操作步骤 35

观察 36

疑难问题和解决方案 37

注意事项 37

操作流程 37

第2章 克隆与转化 39

实验2.1 感受态细胞制备和热激转化 39

导言 39

原理 40

所需试剂及其作用 41

操作步骤 41

观察 43

疑难问题和解决方案 43

注意事项 43

操作流程 44

实验2.2 电穿孔 45

导言 45

原理 46

所需试剂及其作用 47

操作步骤 48

观察 49

结果表格 49

疑难问题和解决方案 49

注意事项 50

操作流程 50

实验2.3 限制性内切核酸酶消化和连接 51

导言 51

原理 51

所需试剂及其作用 55

操作步骤 56

观察 57

疑难问题和解决方案 58

注意事项 58

操作流程 58

实验2.4 克隆所需合适载体系统的选择 59

导言 59

克隆载体的不同类型 62

选择合适克隆载体的标准 66

结论 68

实验2.5 蓝-白斑筛选验证转化 69

导言 69

原理 69

所需试剂及其作用 70

操作步骤 71

观察 72

疑难问题和解决方案 72

注意事项 73

操作流程 73

实验2.6 PCR验证克隆 74

导言 74

原理 74

所需试剂及其作用 76

操作步骤 77

观察 78

疑难问题和解决方案 78

注意事项 78

操作流程 79

第3章 分子微生物学先进技术 80

实验3.1 cDNA的合成 80

导言 80

原理 80

所需试剂及其作用 82

操作步骤 83

观察 85

疑难问题和解决方案 85

注意事项 85

操作流程 86

实验3.2 qRT-PCR分析基因表达 86

导言 86

原理 87

所需试剂及其作用 89

操作步骤 90

疑难问题和解决方案 92

注意事项 93

操作流程 93

实验3.3 用报道基因方法进行基因表达分析 93

导言 94

原理 94

所需试剂及其作用 95

操作步骤 96

观察 97

疑难问题和解决方案 97

注意事项 97

操作流程 97

实验3.4 基因表达半定量分析 98

导言 98

原理 99

所需试剂及其作用 100

操作步骤 101

观察 103

观察表格 103

疑难问题和解决方案 104

注意事项 104

操作流程 105

实验3.5 Northern印迹 105

导言 105

原理 106

所需试剂及其作用 108

操作步骤 109

观察 111

疑难问题和解决方案 111

注意事项 111

操作流程 111

实验3.6 宏基因组DNA的分离 113

导言 113

原理 113

所需试剂及其作用 115

操作步骤 116

观察 116

结果表格 117

疑难问题和解决方案 117

注意事项 117

操作流程 117

实验3.7 细菌细胞质粒消除 118

导言 118

原理 119

所需试剂及其作用 120

操作步骤 121

观察 121

结果表格 121

疑难问题和解决方案 121

注意事项 121

操作流程 122

实验3.8 细菌接合 122

导言 122

原理 123

所需试剂及其作用 124

操作步骤 125

观察 125

结果表格 126

疑难问题和解决方案 126

注意事项 126

操作流程 126

实验3.9 细菌转导 127

导言 127

原理 128

所需试剂及其作用 129

操作步骤 130

观察 131

结果表格 131

疑难问题和解决方案 131

注意事项 131

操作流程 131

第4章 分子微生物多样性 133

实验4.1 质粒图谱分析 133

导言 133

原理 133

所需试剂及其作用 134

操作步骤 136

观察 139

结果表格 139

疑难问题和解决方案 140

注意事项 140

操作流程 140

实验4.2 扩增核糖体DNA限制性分析研究细菌相关性 142

导言 142

原理 142

所需试剂及其作用 143

操作步骤 145

观察 149

结果表格 149

疑难问题和解决方案 150

注意事项 150

操作流程 150

实验4.3 变性梯度凝胶电泳（DGGE）分析对宏基因组细菌多态性研究 152

导言 152

原理 152

所需试剂及其作用 153

操作步骤 154

观察 158

结果表格 158

疑难问题和解决方案 158

操作流程 159

实验4.4 脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析 159

导言 160

原理 161

所需试剂及其作用 162

操作步骤 163

观察 165

结果表格 165

疑难问题和解决方案 165

注意事项 166

操作流程 166

实验4.5 细菌多重PCR快速检测 168

导言 168

原理 169

所需试剂及其作用 169

操作步骤 171

观察 171

结果表格 171

疑难问题和解决方案 172

注意事项 172

操作流程 172

实验4.6 肠杆菌基因间重复共有序列和细菌基因外重复回文序列PCR技术 173

导言 173

原理 174

所需试剂及其作用 175

操作步骤 177

观察 179

结果表格 179

疑难问题和解决方案 179

注意事项 180

操作流程 180

第5章 分子微生物学计算机辅助研究 181

实验5.1 基因序列分析 181

导言 181

样品序列分析工具 181

原理 181

操作步骤 182

操作流程 187

实验5.2 基因库序列的递交 188

导言 188

原理 188

操作步骤 189

操作流程 194

实验5.3 系统发育树 194

导言 194

解读树 195

系统发育树软件 195

原理 195

操作步骤 197

操作流程 201

实验5.4 引物设计 201

导言 201

用软件设计引物 202

引物设计指南 203

使用NetPrimer软件设计引物程序 203

操作流程 206

第6章 分子微生物学的应用 207

实验6.1 细菌生物膜在玻璃管中的形成 207

导言 207

原理 208

所需试剂及其作用 209

操作步骤 209

观察 209

结果表格 210

疑难问题和解决方案 210

注意事项 211

操作流程 211

实验6.2 微孔板中细菌生物膜形成的筛选 212

导言 212

原理 213

所需试剂及其作用 213

操作步骤 214

观察 214

结果表格 214

疑难问题和解决方法 215

注意事项 215

操作流程 216

实验6.3 生物膜共聚焦激光扫描显微镜分析 217

导言 217

原理 218

所需试剂及其作用 219

操作步骤 220

观察 221

结果表格 221

注意事项 222

疑难问题和解决方案 222

操作流程 222

实验6.4 细菌生物膜荧光显微镜和图像分析 223

导言 223

原理 223

所需试剂及其作用 224

操作步骤 225

结果表格 228

注意事项 228

操作流程 228

实验6.5 生物表面活性剂的筛选 229

导言 229

原理 230

所需试剂及其作用 231

操作步骤 231

观察 232

结果表格 232

操作流程 232

实验6.6 多环芳烃细菌生物治理的光谱光度分析 233

导言 233

原理 233

所需试剂及其作用 234

操作步骤 235

观察 235

结果表格 236

注意事项 236

操作流程 236

实验6.7 筛选金属富集细菌的硫化氢实验 237

导言 237

原理 237

所需试剂及其作用 238

操作步骤 239

观察 239

结果表格 240

疑难问题和解决方案 240

注意事项 240

操作流程 240

参考文献 243

进一步读物 244