动物细胞与转基因动物制药PDF电子书下载

上篇 动物细胞制药 贾茜 魏敬双 王辉 郑虹 1

第1章 动物细胞制药历史沿革 1

参考文献 5

第2章 动物细胞制药的基本原理 6

2.1 细胞培养的生物学 6

2.1.1 起源和特性 6

2.1.2 分化 7

2.2 材料的选择 7

2.2.1 细胞类型 7

2.2.2 组织来源 8

2.2.3 传代培养 8

2.2.4 培养基 9

2.2.6 培养系统 10

2.2.5 气相 10

2.3 培养过程 11

2.3.1 基质 11

2.3.2 培养基 12

2.3.3 细胞培养 13

参考文献 15

第3章 用于制药的动物细胞 17

3.1 用于蛋白药物生产的细胞系 17

3.2 细胞的衰老和凋亡 19

3.2.1 细胞凋亡的引发途径 19

3.2.2 细胞凋亡的诱因 20

3.2.3 细胞凋亡的预防 21

3.2.4 培养物中衰老、凋亡和坏死细胞的检测 22

3.3.2 血清和其他成分不确定的组织提取物在细胞培养系统中的作用 24

3.3.1 概述 24

3.2.5 细胞培养物中凋亡组分的测定 24

3.3 无血清培养基 24

3.3.3 反应曲线 25

3.3.4 抗菌素、酚红、Hepes和光的作用 27

3.3.5 组发纯度 28

3.3.6 脂肪酸 28

参考文献 29

第4章 大规模培养——动物细胞生物反应器技术 30

4.1 导论 30

4.1.1 悬浮培养 30

4.1.2 贴壁培养 31

4.1.3 贴壁和悬浮细胞培养的普遍问题 31

4.2.1 细胞数的测定 32

4.2 常规方法与培养参数 32

4.1.4 工业化细胞培养的发展趋势 32

4.2.2 设备与试剂 33

4.2.3 实际工作中应考虑的因素 34

4.2.4 培养基与营养成分 34

4.2.5 pH 35

4.2.6 氧气 36

4.2.7 培养类型 38

4.2.8 限制放大的因素 39

4.3 单层培养 39

4.3.1 概述 39

4.3.2 细胞贴壁 40

4.3.3 放大 41

4.4 悬浮培养 47

4.4.2 静态悬浮培养 48

4.4.1 悬浮培养的驯化 48

4.4.3 小规模悬浮培养 49

4.4.4 放大因素 49

4.4.5 搅拌反应器 51

4.4.6 连续流培养 51

4.4.7 气升式反应器 52

4.5 固定化培养 53

4.5.1 禁锢培养方法 53

4.5.2 截留培养 54

4.5.3 多孔载体 55

参考文献 56

5.1.1 厂址选择 58

5.1.2 对厂房的要求 58

5.1 对厂房的要求 58

第5章 动物细胞制药工艺 58

5.1.3 空气洁净技术 60

5.2 种子细胞的保存、复苏和鉴定 61

5.2.1 细胞的冻存 61

5.2.2 细胞系的鉴定 64

5.3 产物的分离纯化 69

5.3.1 蛋白纯化的放大 69

5.3.2 细胞及细胞碎片的去除 70

5.3.3 核酸的去除 73

5.3.4 浓缩和初步纯化 73

5.3.5 柱层析 76

5.3.6 蛋白质纯化系统的放大 83

5.3.7 蛋白质的稳定性 84

5.4 制剂分装 87

5.4.1 终产物的稳定性 87

5.4.2 冻干 88

5.4.3 贴标签和终产品的包装 89

5.5 保存和运输 89

参考文献 90

第6章 动物细胞制药质量控制 91

6.1 蛋白质的定性检测 91

6.1.1 免疫印迹实验 91

6.1.2 分子质量的测定 92

6.1.3 蛋白质结构测定 93

6.2 蛋白质的定量检测 95

6.2.2 生物学活性测定(功能分析) 96

6.2.1 免疫学测定 96

6.2.3 蛋白的浓度测定 97

6.3 蛋白质纯度分析 98

6.3.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳 98

6.3.2 高压液相分析 100

6.3.3 蛋白质中糖含量的分析 100

6.3.4 残余宿主细胞蛋白及DNA含量分析 101

6.3.5 牛血清蛋白残留量检测 101

6.3.6 亲和层析脱落配基的检测 101

6.4 对蛋白质药物制剂的质量控制 102

参考文献 103

第7章 动物细胞制药未来发展 104

7.1 对宿主细胞的改造 104

7.4 化学限定培养基的开发 105

7.3 对发酵过程的控制 105

7.2 动物细胞大规模培养方式的选择 105

7.5 产品的质量和安全性 106

7.5.1 对原材料的控制 106

7.5.2 外源因子的清除 106

7.5.3 规章、准则和药品生产质量管理规范 107

7.6 展望 107

参考文献 107

下篇 转基因动物制药 刘思国 劳为德 109

第8章 概论 109

8.1 生物制药公司面临的生产问题 109

8.1.1 生物医药开发的增长 109

8.1.2 企业供应的制约因素 109

8.2 转基因动物在生物工程制药中的地位 110

8.3 转基因的最新成果 111

8.4 当前的技术挑战 111

8.4.1 启动区 112

8.4.2 提高转基因的表达 112

8.4.3 位置无关性 112

8.4.4 新的长构件载体 113

8.4.5 胚胎干细胞 113

8.4.6 生产效率的优化 113

8.4.7 细胞核移植 114

8.5 结语 115

第9章 产生重组蛋白质的不同动物系统 116

9.1 从超级小鼠向转基因大家畜的延伸——动物生产性状的改良 116

9.2.1 血液 117

9.2 产生重组蛋白质的不同动物系统 117

9.2.2 尿液 118

9.2.3 精液 118

9.2.4 蛋清 118

9.2.5 蚕茧 118

9.2.6 乳汁 118

9.3 在转基因家畜的血液中表达重组蛋白 119

9.4 在转基因家畜乳腺中生产人体蛋白质 120

第10章 哺乳动物胚胎中遗传信息的导入 125

10.1 生产用动物的选择 125

10.2 转基因的方法 126

10.3 当前应用的技术——直接向哺乳动物胚胎细胞核内微注射DNA 127

10.3.1 供体动物的超排 128

10.3.3 DNA的微注射 129

10.3.2 卵的收集 129

10.3.4 存活胚胎的转移 130

10.3.5 转基因的整合 130

10.3.6 转基因的表达 132

第11章 乳蛋白基因的表达调控 133

11.1 酪蛋白基因的表达调控 133

11.1.1 核因子 134

11.1.2 测定β-酪蛋白基因mRNA 3′-UTR序列结合蛋白 137

11.1.3 3′-UTR涉及了β-酪蛋白基因的组织特异性表达的决定 137

11.2 乳清蛋白——β-乳球蛋白和乳清酸蛋白基因的调控 138

11.2.1 β-乳球蛋白的基因表达调控 139

11.2.2 乳清酸蛋白基因的调控 140

第12章 乳腺特异的转基因表达 145

12.1 酪蛋白基础上的转基因乳腺特异表达 145

12.1.1 牛的完整酪蛋白基因在转基因小鼠中的表达 146

12.1.2 牛的asl和k酪蛋白基因在转基因小鼠中的表达分析 147

12.1.3 酪蛋白基因簇的结构 148

12.1.4 在转基因小鼠中重建牛的asl-/β-酪蛋白区域 149

12.1.5 小结 150

12.2 BLG基础上的转基因表达 150

12.3 基于WAP的转基因乳腺表达 152

12.4 总结 154

第13章 乳腺生物反应器中基因的选择 155

14.1.1 用于微注射的DNA溶液的准备 159

14.1.2 YAC DNA微注射 159

14.1.3 供体兔的准备和胚胎的收集 159

14.1 转基因兔的产生 159

第14章 几种动物的转基因制作过程 159

14.1.4 兔卵的微注射 160

14.1.5 注射后兔胚胎的移植及后代的产生 160

14.1.6 产生转基因兔的效率 161

14.1.7 转基因品系的建立及标记转基因的应用 162

14.2 猪的转基因 163

14.2.1 转基因猪作为个体制药系统的可行性 163

14.2.2 转基因猪的生产 164

14.3 转基因奶牛 165

14.3.1 牛受精卵的来源 165

14.3.2 原核注射 165

14.3.3 胚胎的培养 165

14.3.4 胚胎的性别鉴定和转基因检测 165

14.3.5 胚胎移植和羊水分析 166

15.1 通过核移植产生胚胎 168

第15章 体细胞克隆方法生产转基因动物 168

15.2 遗传物质导入(胚胎重建) 169

15.2.1 重构胚胎的激活 169

15.2.2 重构胚胎的培养 169

15.2.3 重构胚的细胞周期同步 170

15.2.4 供体细胞 170

15.2.5 通过培养细胞生产转基因绵羊的过程 170

15.3 影响细胞核移植效率的因子 172

15.4 体细胞中的基因打靶 172

15.5 畜类细胞的基因打靶 173

15.6 基因打靶在大动物上的可能应用 173

16.1 增多分子来源 175

16.1.1 基因组序列 175

第16章 转基因乳腺生物反应器的未来 175

16.1.2 基因表达的控制 176

16.2 体细胞修饰 177

16.3 提高转基因效率 178

16.3.1 获得适用的胚胎 178

16.3.2 胚胎中导入外源DNA构件 179

16.3.3 构件在基因组中的稳定整合 180

16.3.4 处理后胚胎的转移和移植 180

16.3.5 外源基因在转基因动物中的正确表达 181

16.4 总结 181

参考文献 181

附录一 动物细胞制药常用设备及耗材供应商名录 188

附录二 转基因技术大事记 201

中文索引 203

英文索引 207