切片材料的染色方法 电镜技术PDF电子书下载

第一章 引言 1

1.1 切片染色的目的 2

1.2 组织固定 8

1.2.1 作初固定剂用的醛类 9

1.2.2 几个化学问题 10

1.2.3 固定程序 14

1.3 组织制备 14

1.3.1 获得薄组织片的简单方法 15

1.3.2 组织切片机 17

1.3.3 组织切片的定向 18

1.3.4 特殊处理技术 19

1.4 实验室的安全 20

第二章 电镜技术中的细胞学染色方法 27

2.1 光镜观察用的厚树脂切片 28

2.1.1 厚切片的处理 28

2.1.2 光镜用树脂切片的染色 29

2.2 处理超薄切片的程序 32

2.2.1 载网上切片的染色 33

2.2.2 未载网超薄切片的染色 38

2.2.3 除去超薄切片上的锇 39

2.2.4 染色程序的选择 39

2.3 铅染色剂 43

2.3.1 铅染的一般程序 43

2.3.1a 氢氧化铅水溶液染色程序 44

2.3.2 碱性铅盐溶液染色 45

2.3.2a 铅染法A(Karnovsky 1961) 45

2.3.2b 铅染法B(Karnovsky 1961) 46

2.3.2c 铅染法C--酒石酸铅染色法(Milloing 1961) 46

2.3.2d 铅染法D--枸橼酸铅染色法(Reynolds 1963) 46

2.3.2e 铅染法E--枸橼酸铅染色法(Venable和Coggeshall 1965) 47

2.3.2f 铅染法F--枸橼酸铅染色法(Fahmy 1967) 47

2.3.3 铅染液的用途 48

2.4 醋酸双氧铀 48

2.4.1 醋酸双氧铀酒精溶液 49

2.4.2 铀盐水溶液 49

2.4.3 醋酸双氧铀块染程序 50

2.5 双染法 52

2.6 其它细胞学染色剂 56

2.6.1 四氧化锇 57

2.6.1a 锇-硫卡巴肼-锇法 59

2.6.2 磷钨酸 60

2.6.3 高锰酸钾 62

2.6.4 证实生物胺的方法 64

2.6.5 其它非特异染色法 67

2.7 电镜技术中的示踪剂 67

2.7.1 真溶液中的小分子 68

2.7.1a 硝酸镧和钌红 69

2.7.1b 葡糖酸亚铁在体内的应用 70

2.7.2a 胶体金的制备方法 72

2.7.2 胶体粒子 72

2.7.3 酶和金属蛋白质 74

第三章 普通细胞化学方法 92

3.1 现有技术的局限性 92

3.2 广谱特异性细胞化学方法 94

3.2.1 证实酸性或硷性基团的程序 94

3.2.2 某些羟基的染色剂--乙醇铊 95

3.3 核酸染色法 97

3.3.1 核酸的一般染色法 97

3.3.1a 核酸的三氯化铟染色法 97

3.3.1b 核酸的钨酸钠染色法 99

3.3.1c 核酸的醋酸双氧铀染色法 99

3.3.2 DNA的特异染色法 100

3.3.2a DNA的富尔根-六亚甲四胺银染色法 101

3.3.2b DNA的富尔根-席夫-乙醇铊染色法 101

3.3.3 RNA的选择性染色 105

3.4 蛋白质的一般染色法 107

3.4.1 丙烯醛在蛋白质染色中的应用 107

3.4.2 蛋白质的磷钨酸染色法 108

3.4.3 硫氢基的特异染色法 109

3.4.3a 高硫蛋白质的染色法 111

3.5 碳水化合物的特异染色法 114

3.5.1 过碘酸氧化法的特异性 115

3.5.1a 醛基阻断法 117

3.5.2 碳水化合物的过碘酸-六亚甲四胺银染色法 117

3.5.3 碳水化合物的氨基硫脲-蛋白质酸银染色法 119

3.5.4 碳水化合物的过碘酸-碱性铋染色法 122

3.6 酸性粘液物质的染色法 123

3.6.1 含铁溶液的应用 124

3.6.2 用铁溶液块染酸性粘液物质的方法 125

3.6.3 用铁染超薄切片酸性粘液物质的方法 126

3.6.4 用胶体钍染酸性粘液物质的方法 126

3.6.5 酸性粘液物质的其它染色法 128

3.7 脂类染色法 130

3.7.1 保存脂类用的特殊脱水和包埋方法 131

3.7.2 保持脂类的氨基塑料包埋剂 131

3.7.2a 戊二醛-卡巴肼混合物(GACH)包埋 133

3.7.2b 戊二醛-尿素混合物(GUR)包埋 134

3.7.2c 戊二醛-尿素乙二醇甲基丙烯酸酯共聚体(GUGM)包埋 135

3.7.3 用毛地黄皂甙保存胆固醇 136

3.7.4 磷脂的保存 138

3.8 无机离子沉淀法 139

3.8.1 用焦锑酸盐沉淀钠 139

3.8.2 钙离子的显示法 140

3.8.3 磷酸盐离子的沉淀 141

3.8.4 氯化物离子的沉淀 142

3.8.5 显示重金属的方法 142

3.9 提取方法 144

3.9.1 某些固有的困难 145

3.9.2 核酸的提取 147

3.9.3 蛋白水解酶的应用 148

3.9.4 多糖的提取 150

第四章 水解酶的金属沉淀法 167

4.1 酶细胞化学原理 167

4.1.1 一些理论上的考虑 169

4.1.2 理论上的一些推论 173

4.1.3 孵育阶段的细则 174

4.2 酶细胞化学的一些实际问题 178

4.2.1 孵育用组织样品的制备 179

4.2.2 孵育时可能产生的问题 182

4.2.3 孵育后遇到的问题 184

4.2.4 一个典型的孵育程序 187

4.3 酸性水解酶的染色方法 189

4.3.1 酸性磷酸酶的显示法 190

4.3.2 酸性磷酸酶的常规染色法 191

4.3.3 酸性单核苷酸酶的显示法 194

4.3.4 核苷酸二磷酸脂酶，特别是硫胺焦磷酸酶的显示法 195

4.3.5 硫酸酯酶技术 197

4.4 水解ATP的酶类 199

4.4.1 命名问题 200

4.4.2 某些组织化学的复杂问题 201

4.4.3 一种用铅离子显示ATP酶的可能方法 204

4.4.4 用锶离子显示运载ATP酶 211

4.4.5 腺苷酸环化酶的显示法 213

4.5 其它磷酸酶 215

4.5.1 碱性磷酸酶技术 215

4.5.1b 胸苷一磷酸作底物的用法 219

4.5.1a 钙作捕捉离子的用法 219

4.5.1c 枸橼酸盐作螯合剂的用法 220

4.5.2 葡萄糖-6-磷酸酶技术 221

4.5.2a 推荐一个证实葡萄糖-6-磷酶酶的方法 223

4.6 一般性酯酶技术 224

4.6.1 现用技术的总特异性 224

4.6.2 用于酯酶的硫赶醋酸原法 228

4.6.2a 一个简单的硫赶醋酸方法 228

4.6.3 两个改进的酯酶方法 229

4.6.3a 纯硫赶醋酸的制备 230

4.6.3b 铅-乙酰二硫化物法 230

4.6.3c 金-硫赶醋酸盐法 232

4.6.4 酶抑制物的重要性 233

4.6.5 用于酯酶的金-苯硫酚盐法 234

4.6.5a 对硝基苯硫赶醋酸盐(PNPTA)的合成 235

4.6.5b 推荐的PNPTA孵育程序 235

4.6.6 8-羟基喹啉在证实酯酶上的可能用法 236

4.7 胆碱酯酶的特异方法 237

4.7.1 现用实验方法概况 237

4.7.2 铜-硫代胆碱法在组织化学上的某些局限性 238

4.7.3 各种铜-硫代胆碱法的比较 240

4.7.4 用于胆碱酯酶的铜--甘氨酸常规方法 243

4.7.4a Tennyson-Brzin法 243

4.7.4b Kasa-Csillik法 244

4.7.5c Lewis-Shute法 245

4.7.5d 一种可变通的简单孵育程序 247

4.7.4e 抑制剂和替换底物的用法 249

4.7.5 胆碱酯酶的铜-铁氰化物染色法 251

4.7.5a 标准的铜-铁氰化物染色法 253

4.7.5b 硒代胆碱酯的用法 254

4.7.6 胆碱酯酶的金-硫代胆碱法 255

第五章 其它酶细胞化学方法 273

5.1 氧化酶的组织化学 274

5.1.1 DAB在氧化酶组织化学中的应用 276

5.1.1a 过氧化物酶活性的显示 279

5.1.1b 细胞色素氧化酶和线粒体染色 281

5.1.1c 过氧化氢酶和微体的染色 283

5.1.1d 内源非酶促染色 285

5.1.1e 细胞色素C的检出 285

5.1.1f 相关化合物的应用 286

5.1.2 DOPA-氧化酶法 287

5.1.3 其它氧化酶法 290

5.2 脱氢酶组织化学的生化基础 291

5.2.1 呼吸链概述 291

5.2.2 氧化磷酸化作用和组织化学抑制剂 293

5.2.3 组织化学的应用 296

5.3 铁氰化物的用法 297

5.3.1 线粒体对铁氰化物的还原作用 298

5.3.2 琥珀酸脱氢酶的显示 300

5.3.3 其它脱氢酶的显示 303

5.3.4 a-羟酸氧化酶的检出技术 305

5.3.5 增强初发亚铁氰化物沉淀反差的方法 306

5.4 四唑盐的用法 307

5.4.1 琥珀酸脱氢酶的染色程序 311

5.4.2 递氢酶活性的染色程序 312

5.4.3 乳酸脱氢酶的染色程序 313

5.4.4 其它脱氢酶的染色 314

5.5 偶氮染料的偶联技术 314

5.5.1 偶氮染料技术的缺点 316

5.5.2 有关六偶氮副蔷薇苯胺的方法 317

5.5.2a 六偶氮副蔷薇苯胺的制备 318

5.5.2b 萘酚酯作底物的用法 319

5.5.2c 吲？酚酯作底物的用法 320

5.5.3 芳基硫酯作底物的用法 322

5.5.3a 酯酶的染色法 323

5.5.3b 用于其它酶的可能性 324

5.5.4 氨基肽酶的显示 325

5.5.5 含重金属重氮盐的用法 328

5.6 某些转移酶的可能染色法 329

5.6.1 转氨酶的铅-草醋酸盐染色法 329

5.6.2 乌氨酸氨基甲酰转移酶的建议方法 331

5.6.3 酰基转移酶的染色方法 333

5.7 酶细胞化学的展望 335

附录Ⅰ 贮备液 355

附录Ⅱ 常用试剂与器材的供应厂商目录 362