免疫组织化学实验新技术及应用PDF电子书下载

第一节 抗原的提取及纯化 1

一、抗原 1

二、抗原的制备及纯化 1

第一章 抗体的制备 1

三、抗原纯度的鉴定方法 3

第二节 特异性抗血清的制备 8

一、生产抗血清的免疫程序 8

二、IgG单价免疫血清制备方法 9

三、抗血清效价及纯度鉴定 10

第三节 免疫球蛋白的制备 14

一、免疫球蛋白的概念 14

二、免疫球蛋白的制备 15

一、凝胶过滤法 17

第四节 蛋白质的纯化技术 17

二、离子层析法 20

三、免疫吸附剂 25

第二章 单克隆抗体的制备技术及应用 29

第一节 单克隆抗体制备技术 29

一、免疫动物 29

二、骨髓瘤细胞的培养 31

三、饲养细胞 32

四、细胞融合 32

五、杂交瘤细胞的选择性培养 33

六、杂交瘤细胞培养液中特异性抗体的检测 34

七、杂交瘤细胞的克隆化 35

八、单克隆抗体的制备 36

十、培养液和有关溶液的配制 37

九、杂交瘤的冷冻保存及复苏 37

第二节 单克隆抗体的纯化及鉴定 38

一、单克隆抗体的纯化 38

二、单克隆抗体的鉴定 39

第三节 单克隆抗体的应用 39

一、特异性抗原的发现及提纯 39

二、临床生化诊断中的应用 40

三、病理组织定位诊断中的应用 40

四、体内肿瘤的定位 40

五、用单克隆抗体治疗肿瘤 41

六、单克隆抗体在肿瘤研究中存在的问题 41

一、组织标本的取材及保存 44

第三章 免疫组织化学的基本技术 44

第一节 细胞组织材料的准备 44

二、细胞标本的取材及保存 46

第二节 组织细胞材料的固定 47

一、固定液 48

二、固定方法的选择及注意事项 51

第三节 组织脱水、浸蜡及包埋 53

一、石蜡包埋法 53

二、碳蜡包埋法 53

三、冷冻干燥包埋法 54

四、塑料包埋法 54

第四节 组织切片 55

一、切片前的准备工作 55

二、石蜡切片 56

三、冰冻切片 57

四、碳蜡切片 58

五、细胞涂片及印片 58

第五节 免疫组化染色过程中的一些基本技术 58

一、实验设计 58

二、酶消化 59

三、抗体的稀释度 60

四、抗体稀释度的测定方法 61

五、抗体的配制 63

第四章 免疫荧光组织化学技术 65

第一节 荧光抗体的制备 65

一、荧光和荧光素 65

二、异硫氰酸荧光素标记方法 67

三、荧光抗体的鉴定 70

四、四乙基罗达明B200标记方法 70

五、四甲基异硫氰酸罗达明(TRITC)标记方法 72

第二节 荧光抗体染色方法 72

一、直接法 72

二、间接法 73

三、补体法 74

四、膜免疫荧光染色方法 75

五、荧光抗原法 75

六、半抗原夹心法 75

七、双重免疫荧光染色方法 75

第三节 荧光显微镜 76

一、荧光显微镜的原理 76

八、染色标本的保存及封片介质的制备 76

二、荧光显微镜的应用 77

三、荧光显微镜的结构和部件 77

四、透射荧光显微镜 78

五、反射荧光显微镜 79

六、激励方法 80

七、反射荧光与透射荧光的优缺点 80

八、透射荧光显微镜和反射荧光显微镜的比较 81

九、使用荧光显微镜时应注意的事项 82

第四节 荧光显微镜摄影方法 82

一、摄影步骤 82

二、常见问题及解决方法 83

一、藻红蛋白的特征 85

第五节 一种新型的免疫荧光标记物—藻红蛋白 85

二、藻红蛋白的末源 86

三、藻红蛋白与抗体免疫球蛋白结合物的制备 86

四、藻红蛋白抗体结合物的应用 88

第五章 免疫酶组织化学技术 92

第一节 酶标记抗体的原理和制备方法 92

一、原理 92

二、标记酶的要求 92

三、常用于标记的酶 93

四、酶标记抗体的具体方法 93

五、酶标记抗体的鉴定 97

第二节 酶标记抗体染色方法 98

一、基本原理 98

二、染色步骤 98

一、抗酶抗体法或称非标记抗体法 100

第三节 非标记免疫酶组织化学技术 100

二、PAP法 102

三、放大抗体法 104

四、半抗原结合抗体免疫酶染色方法 104

第四节 可溶性PAP复合物的制备 105

一、兔抗HRP血清的制备 105

二、PAP复合物制备 105

三、PAP复合物的贮存 107

四、McAB PAP复合物制备 107

第六章 免疫碱性磷酸酶技术 108

第一节 碱性磷酸酶的性质 108

第二节 碱性磷酸酶标记方法 109

三、APAAP复合物的制备 110

一、戊二醛一步法 110

二、偶氮桥法 110

第三节 碱性磷酸酶的免疫组化染色方法 111

一、直接法 112

二、间接法 112

三、APAAP法 113

四、生物素—亲和素-AKP系统 113

五、有关试剂的配制 114

第四节 免疫碱性磷酸酶方法和其他免疫组化方法的比较 115

第五节 免疫碱性磷酸酶技术方法的选择及注意的问题 116

第六节 免疫碱性磷酸酶技术的应用 118

一、组织切片的免疫染色 118

三、用于免疫印迹的显色反应 119

四、酶联免疫吸附试验中的应用 119

二、用于细胞膜表面抗原的免疫酶标检测 119

五、用于免疫组化的双重或多重标记 120

第七章 亲合免疫细胞组织化学技术 122

第一节 概述 122

第二节 卵白素—生物素系统 123

一、生物素、亲和素的特性及作用原理 123

二、生物素—卵白素系统用于免疫细胞化学标记技术的基本方法 124

三、生物素—卵白素系统的优点 125

第三节 有关试剂的制备 126

一、亲和素的提取及纯化 126

二、活化生物素的制备 126

四、Avidin-HRP复合物的制备 127

五、活化生物素HRP复合物的制备 127

三、活化生物素偶联抗体方法 127

第四节 卵白素—生物素系统的免疫组化染色 128

一、ABC法 128

二、快速ABC法 129

三、二步ABC法 129

四、PAP法和ABC法连续应用 130

五、LAB法 131

六、BRAB法 132

第五节 应用 133

一、树脂包埋切片的ABC染色 133

二、涂片、离心细胞和细胞学标本ABC法染色 133

三、ABC法在Lectin上的应用 133

四、ABS试剂在ELISA中的应用 134

五、生物素在核酸探针中的应用 135

一、SPA的理化和免疫学性质 136

第六节 葡萄球菌A蛋白 136

二、SPA各种试剂的制备 137

三、SPA的应用 140

第八章 免疫胶体金技术 144

第一节 胶体的基本概念 144

第二节 胶体金的制备 145

一、制备前的准备 145

二、试剂及器材 146

三、胶体金分散颗粒的制备 146

第三节 胶体金探针制备 149

一、待标记蛋白质和金溶胶的制备 149

二、确定胶体金与待标记蛋白质用量比例 150

三、胶体金与蛋白质的结合 150

四、胶体金标记蛋白质的纯化 152

五、胶体金标记蛋白质的质量鉴定 153

第四节 免疫金染色法 154

一、原理 154

二、间接法染色步骤 155

三、免疫金搭桥法染色步骤 155

第五节 免疫金银法 156

一、基本原理 156

二、IGSS步骤 156

三、双PAG法 157

四、IGSS法的评价及其注意事项 158

五、非特异背景及其清除方法 160

六、银显影液的配制 160

第六节 彩色免疫金银法 161

第一节 概况 163

第九章 免疫电镜技术 163

一、标本处理 164

第二节 免疫电镜技术的前处理和基本形式 164

二、基本形式 166

第三节 铁蛋白标记免疫电镜技术 169

一、铁蛋白标记的原理和方法 169

二、铁蛋白标记物的分辨率 170

第四节 酶标记免疫电镜技术 171

一、免疫电镜技术中酶标记方法的选择 171

二、包埋前免疫过氧化物酶染色 171

三、包埋后免疫过氧化物酶染色 173

一、包埋前染色 174

二、包埋后染色 174

第五节 胶体金标记免疫电镜技术 174

三、免疫胶体金扫描电镜技术 177

四、免疫胶体金负染法 177

五、复型免疫细胞化学技术 177

六、冷冻蚀刻免疫电镜技术 178

七、胶体金标记电镜水平的定量免疫细胞化学技术 179

第六节 超微结构双重及多重免疫组化标记技术 180

一、单面阻断法 181

二、双面双重标记方法 182

三、应用不同种动物产生的特异性抗体及相应的标记二抗的间接法 182

四、标记抗原法 183

五、电镜下多重免疫标记的试剂要求 183

第一节 双重或多重免疫染色的基本方法 185

一、基本形式 185

第十章 免疫组织化学的双重和多重染色技术 185

二、标记物及底物 188

第二节 双重免疫荧光组化染色技术 190

一、阻断法 191

二、直接法 192

三、间接法—异种动物抗体法 192

四、间接法—同种动物抗体法 192

五、藻红朊抗体结合物与其他荧光素标记抗体的双重或三重染色 193

第三节 双重免疫酶组化染色方法 194

一、阻断法 195

二、非阻断法的单酶或双酶双重免疫染色 197

三、其他形式组合的双重免疫染色方法 198

一、单酶双重或多重标记染色 200

第四节 双重或多重免疫组化标记的应用 200

二、双酶双重免疫染色 201

三、标记抗原双重免疫染色 203

四、免疫金银法与免疫酶法的双重免疫染色 203

五、三重免疫酶染色 204

六、双重免疫酶与双重免疫荧光染色的比较 205

七、双重原位分子杂交技术 205

第十一章 免疫细胞组织化学方法学进展的评估及结果的判断 209

第一节 免疫细胞组织化学方法进展及评估 209

一、酶标记抗体法 209

二、非标记抗体酶法 209

三、生物素—抗生物素蛋白系统 211

四、双PAP法及ABPAP法 212

五、胶体金属—抗体复合物 213

第二节 免疫组织化学染色结果的判断 215

一、对照结果的正确判断 215

二、怎样判断特异性染色结果 217

第十二章 免疫组化染色对照的设计、非特异性染色及消除方法 220

第一节 正确设计免疫组织化学染色对照的方法 220

一、空白对照 220

二、替代对照 221

三、抑制对照 221

四、吸收试验对照 221

五、阳性对照 222

六、自身对照 222

一、免疫荧光组化染色中常见的非特异性荧光 223

第二节 非特异性染色及消除方法 223

二、消除免疫荧光染色中的非特异性染色方法 225

三、内源性酶及消除方法 226

四、IGSS中的非特异染色 227

五、抗体引起的非特异性染色 227

六、DAB氧化物 229

第三节 显示系统及衬染剂的选择 229

一、显示系统 229

二、显示系统的增强方法 231

三、衬染剂的选择 233

第十三章 微波免疫组化染色技术及在病理中的应用 235

第一节 微波技术的概况 235

第二节 微波固定、脱水、透明及常规染色 236

一、组织固定 236

二、组织脱水 239

三、微波染色方法 240

第三节 微波电镜标本固定及染色 241

第四节 微波免疫组化染色 242

一、微波辐射的免疫荧光染色 243

二、微波辐射的免疫酶标记染色 244

三、作者实验室所用微波炉及染色流程 248

四、应用微波免疫组化染色的注意事项 249

第十四章 原位分子杂交技术 252

第一节 核酸分子杂交技术概况 252

第二节 核酸探针标记 253

一、探针序列的选择 253

二、探针类型 254

三、探针标记原理和方法 256

四、核酶探针标记物的选择 264

第三节 组织切片上原位分子杂交 265

一、杂交前的准备 265

二、杂交 268

三、检测 270

四、杂交对照的设计 272

五、举例 273

第四节 电镜下原位分子杂交 276

一、概况 276

二、技术方法 277

三、注意要点 279

第五节 病理学中的应用 279

一、病毒性疾病研究中的应用 279

三、细胞生物合成及遗传疾病研究中的应用 280

二、肿瘤研究中的应用 280

第一节 概述 284

一、PCR原理 284

二、特点 284

第十五章 聚合酶链式反应 284

第二节 基本方法 286

一、标准反应体系 286

二、样品制备 286

三、引物的选择和纯化 287

四、缓冲液组成 287

五、调温程序 288

六、Taq DNA聚合酶用量 288

七、影响特异性和敏感性的因素 288

九、操作实例 289

八、假阳性和假阴性 289

十、遇到的问题及解决的办法 290

第三节 应用 291

一、遗传性疾病的产前诊断 291

二、传染性疾病的诊断 291

三、胎儿性别的鉴定 292

四、司法鉴定 292

五、DNA克隆和序列分析 292

六、PCR在肿瘤研究中的应用 293

第十六章 癌基因及蛋白产物在肿瘤中的表达及意义 298

第一节 癌基因的概述 298

一、什么是癌基因 298

二、癌基因的命名 298

三、抗癌基因 300

第二节 癌基因的分类及生物学特征 301

一、src癌基因族 302

二、ras癌基因族 303

三、myc及其他核内癌基因 303

第三节 癌基因的激活及致癌机制 308

一、癌基因的激活方式 308

二、癌基因致癌机制 309

第四节 癌基因的功能 310

一、癌基因与细胞生长调节 310

二、原癌基因与细胞分化调节 312

第五节 癌基因蛋白产物在肿瘤中的表达及意义 蔹 313

一、ras癌基因 313

二、c-erbB—2癌基因 314

三、P53抗癌基因 315

四、c-myc癌基因表达蛋白产物 320

五、检测癌基因及其产物的实用价值 321

第十七章 肿瘤标记物 325

第一节 上皮性肿瘤标记物 326

一、角蛋白 326

二、上皮膜抗原 327

三、桥粒蛋白 327

四、癌胚抗原 327

五、组织多肽抗原 328

六、前列腺特异性抗原 329

七、甲胎蛋白 329

九、血型物质 330

八、甲状腺球蛋白 330

第二节 间叶组织肿瘤标记物 331

一、波纹蛋白 331

二、结蛋白 332

三、纤维连接蛋白 332

四、第Ⅷ因子相关抗原 333

五、溶菌酶 334

六、α1—抗胰蛋白酶 334

七、肌红蛋白 334

八、肌动蛋白 335

九、肌球蛋白 336

十、细胞外基质蛋白 337

一、胶质纤维酸性蛋白 339

第三节 神经源性肿瘤标记物 339

二、S-100蛋白 340

三、神经丝蛋白 340

四、神经元特异性烯醇化酶 341

五、髓磷酯碱性蛋白 342

六、突触囊泡蛋白和嗜铬颗粒蛋白 342

七、碳酸酐酶C 343

八、神经系统肿瘤的鉴别诊断 343

第四节 内分泌肿瘤标记物 344

一、脑垂体肿瘤标记物 344

二、胰岛细胞肿瘤标记物 344

三、甲状腺和甲状旁腺肿瘤标记物 344

二、全白血细胞抗体 345

三、全B细胞单抗 345

一、免疫球蛋白 345

第五节 淋巴瘤免疫组化标记物 345

四、全T细胞单抗 346

五、T细胞亚群单抗 347

六、髓细胞/单核细胞标记物 347

七、急性淋巴细胞性白血病共同抗原 348

八、CD15 348

九、CD30 348

十、溶菌酶 349

十一、末端脱氧核苷酸转移酶 349

十二、组织相溶性复合物抗原 349

一、人乳头瘤病毒 354

第六节 病毒性肿瘤标记物 354

二、单纯疱疹病毒 355

三、乙型肝炎病毒 355

四、EB病毒 356

五、巨细胞病毒 356

六、丙型肝炎病毒 356

七、丁型肝炎病毒 357

八、戊型肝炎病毒 358

第七节 增殖细胞核抗原 358

一、增殖细胞核抗原/周期素 358

二、DNA多聚酶 359

三、Ki-67单克隆抗体 360

第八节 凝集素 360

二、凝集素受体的标记方法 361

三、凝集素在肿瘤研究、诊断中的应用 361

一、简介 361

第九节 雌、孕激素的检测及意义 363

一、概况 363

二、检测方法 363

三、检测意义 365

第十节 其他肿瘤标记物 365

一、癌相关糖链抗原 365

二、铁蛋白 366

三、白蛋白 366

四、酸性磷酸酶 366

五、胎盘蛋白 367

六、碱性磷酸酶 367

七、组织胺酶 367

八、醛缩酶 367

十、α-干扰素 368

九、抗肿瘤相关抗原TAG-72 368

十一、白细胞介素Ⅱ受体 369

附录 373

一、缓冲液 373

二、免疫动物及纯化蛋白质常用试剂 378

三、玻璃及塑料器皿的硅烷化 380

四、蛋白质含量的测定 381

五、原位分子杂交常用试剂 382

六、其他 383

附表1 各种酸碱的强度 385

附表2 白细胞相关抗原的分类 386

附表3 常用特异性抗体的种类及用途阅览表 391

附表4 常用试剂盒阅览表 406

附表5 十二种生物素标记的凝集素 407