实用生物化学与分子生物学实验技术PDF电子书下载

目 录 1

第一章分光光度技术 1

第一节基本原理 1

一、光的基本知识 1

二、朗伯—比尔定律 2

三、吸光系数 3

第二节分光光度计的基本类型和组件 3

一、分光光度计的基本类型 3

二、分光光度计的基本组件 5

第三节分光光度技术的应用 6

一、定量分析 6

二、定性分析 7

第四节测试条件的选择 8

一、测试波长的选择 8

二、测量狭缝的选择 8

一、物理性原因产生的误差 9

第五节分光光度法的误差 9

四、参比溶液的选择 9

三、吸光度测量范围的控制 9

二、化学性原因引起的误差 10

第六节常见国产分光光度计的使用 10

一、721型分光光度计 10

二、722S型分光光度计 11

三、日本岛津1240紫外／可见分光光度计（带Sipper 160型自动流动池） 11

四、使用分光光度计的注意事项 12

第二章色谱技术 13

第一节色谱技术的概念和特点 13

一、色谱技术的概念 13

二、色谱技术的特点和优点 13

三、色谱技术的不足 14

第二节色谱法的分类 14

一、按两相所处的状态分类 14

二、按色谱的分离机制分类 14

三、按操作形式不同分类 15

一、色谱法中常用的术语 16

第三节色谱的基本理论 16

二、塔板理论 18

三、速率理论 19

四、分离度（resolution）——色谱分离效能的总指标 22

第四节常用的色谱方法 22

一、吸附色谱 22

二、分配色谱 24

三、凝胶色谱 25

四、离子交换色谱 30

五、亲和色谱 33

六、高效液相色谱 34

七、毛细管电泳 37

第三章电泳技术 42

第一节基本原理 42

一、蛋白质电荷的来源 42

二、电泳的基本原理 43

三、影响电泳的因素 43

第三节琼脂糖凝胶电泳 45

第二节醋酸纤维薄膜电泳 45

一、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系 46

二、核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系 47

三、琼脂糖凝胶电泳基本方法简介 47

第四节常规聚丙烯酰胺凝胶电泳 48

一、聚丙烯酰胺凝胶聚合原理及相关特性 48

二、聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 50

三、操作方法 52

四、聚丙烯酰胺凝胶电泳中常见的问题及解决方法 54

分子量的原理 55

第五节SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 55

一、SDS-PAGE测定蛋白质 55

二、分子量的测定和计算 56

三、操作方法 56

第六节聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳 57

第七节聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳 58

一、等电聚焦的原理 58

二、pH梯度的形成 59

三、操作方法 60

四、IEFPAGE中常见的问题及解决方法 62

第八节双向电泳 64

一、样品制备 65

二、第一向等电聚焦 65

五、蛋白质的检测及图谱数字化分析 66

第九节染色方法 66

一、蛋白质染色 66

四、第二向SDS-PAGE 66

三、平衡及二向间的转移 66

二、脂蛋白染色 68

三、核酸的染色 69

第四章 离心技术 70

第一节离心理论 70

一、离心分离的原理 70

二、沉降系数 72

三、相对离心力和离心时间 72

四、离心机的分类 73

一、差速离心法 74

第二节离心分离的种类 74

二、密度梯度离心法 75

第三节离心操作注意事项 77

第五章 荧光分光分析技术 78

一、荧光的产生 78

二、荧光检测的类型 78

三、荧光分析的基本参数 80

四、环境因素对荧光分析的影响 82

六、荧光分析仪器的基本结构 83

五、荧光定量测定的方法 83

七、几种不同类型的荧光分析测定装置 84

第六章蛋白质组技术 87

一、蛋白质组学 87

二、蛋白质组分离技术 87

三、蛋白质组分析技术 89

四、蛋白质组数据库的建立 90

五、蛋白质组研究的前景 91

二、培养细胞的生长特点 92

一、体外培养细胞的分型 92

第七章细胞培养技术 92

第一节细胞培养基本知识 92

三、培养细胞的生长过程 93

四、培养细胞生长的条件 95

五、培养用液 96

六、培养基 96

第二节细胞培养的基本技术 97

一、培养细胞的取材 97

二、组织材料的分离 98

三、原代培养 98

四、传代培养和细胞系的维持 98

五、细胞的冻存与复苏 99

六、培养细胞的污染及检测 99

第八章生物大分子制备技术 100

第一节预处理和细胞的分离 100

一、选择材料及预处理 100

一、细胞的破碎 101

第二节细胞的破碎及细胞器的分离 101

二、细胞的分离 101

二、细胞器的分离 104

第三节生物大分子的提取、分离纯化和定量 104

一、蛋白质（包括酶）的提取 104

二、蛋白质的分离纯化 105

三、核酸的分离纯化 107

四、蛋白质的定量 108

五、DNA、RNA的定量 110

第四节浓缩、干燥及保存 111

一、蛋白质的浓缩 111

二、核酸的浓缩 113

三、干燥 115

四、保存 115

第九章 重组DNA技术 117

第一节 目的基因的获取 117

四、构建基因组文库及cDNA文库 118

三、用逆转录酶录制cDNA 118

一、直接从染色体中分离 118

二、化学合成法 118

五、聚合酶链反应 119

第二节分子克隆载体与宿主的选择 119

一、质粒载体 120

二、噬菌体 121

三、噬菌粒 122

四、粘粒 122

五、DNA病毒载体SV40 122

六、反转录病毒载体 123

七、宿主细胞 123

第三节分子克隆常用的工具酶 124

一、限制性核酸内切酶 124

二、DNA聚合酶 127

一、限制性内切酶运用的设计 128

第四节DNA限制性内切酶酶切及片断回收 128

七、碱性磷酸酶 128

六、脱氧核糖核酸酶 128

五、核酸酶 128

四、末端脱氧核苷酰转移酶 128

三、DNA连接酶 128

二、限制性内切酶的酶切 129

三、琼脂糖凝胶电泳分离和DNA片断的回收 130

四、琼脂糖凝胶中回收DNA片段的纯化 133

第五节外源基因与载体的连接 134

二、平末端的连接 135

一、粘性末端连接 135

三、DNA的胶内连接 136

第六节重组DNA导入宿主细胞 136

一、大肠杆菌的转化 137

二、电脉冲穿孔法转化大肠杆菌 138

第七节含重组质粒的宿主菌落的筛选与鉴定 138

一、利用宿主细胞遗传表型的改变进行筛选 139

二、分析重组子分子结构特性进行鉴定 140

一、大肠杆菌表达载体的表达元件 141

第一节大肠杆菌表达系统 141

第十章外源基因表达技术 141

二、大肠杆菌的表达载体 142

三、外源基因在大肠杆菌中表达 144

四、提高外源基因表达水平的措施 145

第二节哺乳动物细胞表达系统 146

一、真核表达载体 147

二、目的基因 148

三、外源基因导入哺乳动物细胞的方法 148

四、哺乳动物基因转移的筛选标记 149

五、外源基因在哺乳细胞的表达和基因表达产物的检测 150

第十一章分子杂交技术 151

第一节核酸杂交的基本理论——DNA变性与复性 151

一、DNA变性 151

二、DNA复性 151

三、核酸分子杂交 152

第二节核酸探针及其标记 152

一、核酸探针 152

二、探针标记物 153

三、标记方法 154

第三节核酸分子杂交 155

一、影响杂交的因素 156

二、固相杂交法 157

三、液相杂交法 160

第十二章聚合酶链反应（PCR）技术 163

第一节PCR基本原理和影响因素 163

一、基本原理 163

三、影响因素 164

二、PCR反应步骤简介 164

四、PCR条件优化 167

五、注意事项 168

第二节逆转录PCR技术 169

一、原理 169

二、RNA的提取 169

三、逆转录PCR反应 170

一、原理 171

第三节PCR——SSCP银染技术 171

二、实验方法 172

第四节PCR技术扩展 174

一、反向PCR 174

二、不对称PCR 174

三、差异PCR 174

四、复合PCR 174

八、定量PCR 175

七、竞争性PCR 175

六、锚定PCR 175

五、着色互补PCR 175

九、原位PCR 176

十、重组PCR 176

十一、RNA扩增与一步法扩增（RT-PCR） 177

第五节PCR技术应用 177

一、DNA克隆 177

二、重组PCR 177

四、用于基因定量 178

三、DNA序列的测定 178

第十三章DNA序列测定 179

第一节序列测定的技术和策略 179

第二节Sanger双脱氧末端终止法测序 179

第三节全自动激光荧光DNA测序 182

第十四章生物芯片技术 183

第一节生物芯片的概念和特点 183

第二节生物芯片的分类 183

第三节生物芯片的制备和检测 184

一、芯片载体的表面修饰 184

二、芯片阵列制作方式 185

三、杂交探针的种类与制备 186

四、样品制备和标记 189

五、分子杂交和杂交微环境 189

六、杂交信号采集和处理 190

七、生物信息的分析和提取 190

二、基因突变分析 193

一、微缩实验室芯片 193

第四节生物芯片在医学中的应用 193

三、克隆选择及文库筛选 194

四、测序芯片 194

五、基因多态性分析 195

六、基因表达谱分析 195

七、微生物菌种鉴定、致病机理及抗药性分析 195

八、药物筛选芯片 196

第十五章生物化学与分子生物学实验实验一蛋白质的变性、凝固及沉淀反应 197

实验二蛋白质的定量测定 199

实验三血清白蛋白、γ－球蛋白的分离纯化及鉴定 208

实验四双向电泳 212

实验五碱性磷酸酶的分离纯化 215

实验六鸡卵类粘蛋白的制备 219

实验七质粒DNA的制备与纯化 223

实验八DNA纯度、浓度与分子量的测定 226

实验九DNA的限制性内切酶消化 229

实验十从琼脂糖凝胶中分离回收DNA片段 231

实验十一DNA片段的连接反应 234

实验十二重组质粒DNA转化大肠杆菌 236

实验十三含重组质粒的细菌菌落的鉴定 238

实验十四哺乳类高分子量DNA的提取 241

实验十五哺乳类细胞总RNA的提取 244

实验十六DNA探针的标记 246

实验十七Southern印迹法 249

实验十八Northern印迹法 253

实验十九斑点杂交和狭线杂交 256

实验二十原位杂交 258

实验二十一聚合酶链式反应（PCR） 262

实验二十二DNA序列分析 267

实验二十三免疫印迹法——WesternBlot 271

实验二十四SSCP技术检测基因突变 275

附 录 278

附录一实验须知 278

附录二常用试剂的配制 285