食品中转基因成分检测指南PDF电子书下载

第一章　绪论 1

第一节 转基因食品的概况 1

一、转基因食品的定义 1

二、转基因食品的商业化现状 1

三、转基因食品的安全性 5

（一）转基因作物的环境安全性 5

（二）转基因作物的食品安全性 6

（三）转基因食品的安全性评价 7

第二节 转基因食品的种类 9

一、转基因大豆 9

二、转基因玉米 11

三、转基因棉花 18

四、转基因油菜 21

五、转基因马铃薯 26

六、转基因番茄 27

七、转基因菊苣 29

八、转基因亚麻 29

九、转基因香瓜 30

十、转基因番木瓜 30

十一、转基因水稻 30

十二、转基因南瓜 31

十三、转基因甜菜 31

十四、转基因小麦 32

十五、转基因向日葵 32

十六、转基因扁豆 33

第三节 转基因食品检测方法概述 33

一、转基因食品的蛋白检测方法 34

二、转基因食品的核酸检测方法 34

三、转基因食品的其他检测方法 35

（一）近红外光谱 35

（二）微阵列技术 35

第二章　转基因食品检测的质量控制体系 36

第一节 样本的采集与处理 36

一、抽样 36

（一）抽样的基本原则 36

（二）抽样数量 36

（三）抽样方法 38

二、制样方法 39

（一）一般规定 39

（二）样品的初步处理 39

（三）破碎、研磨和缩分 39

（四）实验室样品的制备 40

三、样品的盛装、标识和运送 40

（一）样品的盛装 40

（二）样品的标识 40

（三）样品的运送 40

四、抽样报告 41

五、存查样品 41

六、健康和安全 41

第二节 检测实验室基本硬件要求 41

一、样品粉碎区 42

二、样品称量区 42

三、试剂贮存和准备区 42

四、核酸制备区 42

五、检测体系配置区 42

六、基因扩增区 43

七、扩增产物分析区 43

八、蛋白质检验区 43

九、其他区域 43

第三节 质量控制体系 43

一、抽样和制样 43

二、DNA提取 43

三、PCR扩增 44

四、仪器校正与维护 44

五、实验环境 44

六、实验室清洁 45

第三章　转基因食品检测的样品处理技术 47

第一节 DNA的提取、纯化和定量 47

一、DNA的提取 47

（一）CTAB法 47

（二）SDS法 47

（三）改良SDS法 48

（四）酚-三氯甲烷提取法 48

二、DNA的纯化 49

（一）溶媒萃取法 49

（二）浓缩质体DNA 49

（三）胶体核酸回收法 50

三、DNA的定量 50

（一）DNA定量 50

（二）DNA纯度 51

第二节 蛋白质的提取、纯化和定量 51

一、蛋白质的提取 51

（一）SDS凝胶加样缓冲液法 51

（二）去污剂温和裂解法 52

二、蛋白质的纯化 53

三、蛋白质的定量 55

（一）紫外分光光度法 55

（二）福林-酚试剂法 56

（三）考马斯亮蓝G-250染色法 57

（四）银结合法 57

第三节 其他生化成分的提取 57

一、糖的提取 57

（一）溶剂提取法 58

（二）酸碱提取法 58

（三）生物酶提取法 59

（四）澄清剂 59

二、脂肪的提取 59

（一）索式提取法 60

（二）巴布科克法 61

（三）盖勃氏法 62

第四章　转基因食品的定性PCR检测技术 64

第一节 定性PCR检测方法概述 64

一、PCR技术的基本原理 64

（一）变性 65

（二）退火 65

（三）延伸 65

二、PCR技术的特点 66

（一）高特异性 66

（二）高敏感性 66

（三）简便快捷 66

（四）PCR反应的局限性 66

三、PCR技术的类型 67

（一）锚定PCR 67

（二）不对称PCR 67

（三）反向PCR 68

（四）多重PCR 69

（五）逆转录PCR 69

（六）巢式PCR 70

（七）原位PCR 71

（八）标记引物PCR 72

（九）热不对称交错PCR 72

（十）荧光定量PCR 74

（十一）简并引物PCR 74

（十二）加端PCR 74

（十三）免疫PCR 75

（十四）差异显示PCR 75

（十五）差别PCR 75

第二节 常规PCR检测技术 75

一、基本操作流程 75

（一）准备实验材料 76

（二）准备试剂和设备 76

（三）样品的DNA提取 77

（四）PCR反应溶液的配制 78

（五）常规PCR反应检测过程 78

（六）结果分析 78

二、操作关键问题 78

（一）DNA模板的要求 78

（二）防止污染 79

（三）引物设计 79

（四）反应条件优化 79

三、结果判读 80

四、质量控制 81

（一）样品制备 81

（二）设置对照 81

第三节 实时荧光定性PCR检测技术 81

一、基本操作流程 81

（一）准备实验材料 81

（二）准备试剂和设备 82

（三）样品的DNA提取 86

（四）PCR反应液的配制 86

（五）实时PCR反应检测过程 86

（六）数据分析 87

二、操作的关键问题 87

（一）设置对照 87

（二）优化PCR体系 87

（三）PCR操作过程 88

三、结果判读 88

（一）总体要求 88

（二）应用TaqMan探针的实时荧光PCR结果分析 88

（三）SYBR Green I染料实时荧光PCR的结果分析 90

四、质量保证 90

（一）操作环境 90

（二）样品 90

（三）对照的设置 90

（四）试剂 91

（五）仪器和设备 91

第四节 检测方法实例 92

一、普通PCR检测抗虫转基因大米Bt63成分 92

（一）材料 92

（二）操作步骤 92

（三）结果分析 93

二、巢式及半巢式PCR方法检测抗草甘膦转基因大豆油 94

（一）材料 94

（二）操作步骤 94

（三）结果分析 96

三、大米制品中转基因成分的实时荧光PCR检测 97

（一）材料 97

（二）操作步骤 98

（三）检测结果 99

四、市售饼干样品中转基因成分的实时荧光PCR检测方法 102

（一）材料 102

（二）方法 102

（三）检测结果 103

（四）结果判定 104

第五章　定量PCR检测技术 105

第一节 定量PCR检测技术概述 105

一、原理和方法 105

（一）传统定量PCR原理和方法 105

（二）实时荧光定量PCR原理与方法 107

二、实验数据处理 113

（一）定量PCR实验数据处理原理 113

（二）样品中转基因成分含量的计算方法 114

三、不确定度分析 115

（一）数学模型 115

（二）不确定度来源 115

（三）标准不确定度评定 116

（四）扩展不确定度评定 117

第二节 抗虫玉米MON810定量PCR检测实例 117

一、结构特异性基因和品系特异性基因检测方法 118

二、检测结果 120

三、检测质量控制标准 121

四、分析步骤的关键控制点及说明 121

第三节 定量PCR的优势及存在的问题分析 121

一、实时荧光定量PCR方法的优势 121

二、实时荧光定量PCR方法的应用范围 122

三、实时荧光定量PCR方法存在的问题 122

四、定量PCR误差来源及消除方法 122

第六章　蛋白质检测技术——免疫检测 126

第一节 免疫检测技术概述 126

一、蛋白质免疫检测技术原理 126

二、免疫检测技术方法 129

（一）ELISA 129

（二）LFD 130

（三）其他免疫检测技术方法 132

三、免疫检测方法的发展 133

第二节 免疫检测方法的步骤 134

一、转基因免疫检测抗体的制备 134

（一）抗原蛋白的提取和纯化 134

（二）抗体制备 135

二、转基因免疫检测ELISA方法的建立 137

（一）棉叶中Bt杀虫蛋白的提取 137

（二）间接ELISA法 137

三、转基因免疫检测LFD方法 138

（一）胶体金标记LFD试纸条的制备 138

（二）检测步骤 138

四、转基因磁珠免疫颗粒检测方法 138

（一）免疫磁珠的制备 138

（二）检测步骤 139

五、转基因组织免疫检测方法 139

第三节 免疫检测方法在转基因检测中的应用 139

第四节 转基因免疫检测方法的误差 141

一、转基因免疫检测方法的应用对象对检测结果的影响 141

二、转基因免疫检测方法的误差来源 142

三、质控方法 147

第五节 转基因免疫检测方法实例 148

一、磁免疫颗粒法定量检测转基因抗虫玉米MON810 148

（一）微球的交联 148

（二）二抗的生物素标记 149

（三）蛋白质的提取 149

（四）Luminex流式点阵仪分析 149

（五）结果 149

二、金标试纸条检测Cry1A（b）/Cry1A（c）蛋白 150

（一）样品预处理 151

（二）胶体金标记免疫试纸测试 151

（三）结果判读 151

（四）注意事项 151

三、ELISA定量检测转基因抗虫玉米MON810 151

（一）试剂的制备 151

（二）样品提取 152

（三）样品测定 152

（四）注意事项 152

第七章　其他检测转基因食品的技术 153

第一节 基因芯片 153

一、原理和方法 153

（一）芯片的制备 154

（二）芯片检测的质控措施 154

（三）结果判断方法 155

二、检测实例 155

（一）多重PCR荧光标记-寡核苷酸芯片检测转基因食品 155

（二）多重PCR-生物素标记-金银染色法-寡核苷酸芯片检测转基因 161

第二节 等温扩增技术 165

一、原理和方法 165

二、LAMP应用实例 167

第三节 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法 169

一、原理和方法 170

（一）原理 170

（二）操作方法 173

二、实例 175

第八章　转基因产品管理相关政策法规 177

第一节 中国转基因产品的标识管理 177

一、主管部门 177

二、相关法规 177

三、适用范围 177

四、转基因产品标识要求 177

第二节 欧盟转基因产品的标识管理 178

一、主管部门 178

二、相关法规 178

三、适用范围 178

四、转基因产品标识要求 178

第三节 韩国转基因产品的标识管理 179

一、主管部门 179

二、相关法规 179

三、适用范围 179

四、转基因产品标识要求 180

第四节 日本转基因产品的标识管理 181

一、主管部门 181

二、相关法规 181

三、适用范围 181

四、转基因产品标识要求 182

第五节 澳大利亚、新西兰转基因产品的标识管理 183

一、主管部门 183

二、相关法规 183

三、适用范围 183

四、转基因产品标识要求 183

第六节 加拿大转基因产品的标识管理 183

一、管理部门 183

二、相关法规 184

三、适用范围 184

四、转基因产品标识要求 184

附录　转基因检测标准 185

一、中国国家标准 185

二、中国出入境检验检疫行业标准 185

三、中国农业行业标准 185

四、中国烟草行业标准 186

五、ISO国际标准 186

参考文献 188