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第1章 肝炎的实验诊断概述 1

一、概述 1

（一）病毒性肝炎 1

（二）自身免疫性肝病 1

（三）酒精性肝炎和非酒精性脂肪肝 3

（四）药物性肝炎 6

（五）细菌感染引起的肝病 6

（六）其他病毒引起的肝炎 7

（七）寄生虫感染引起的肝脏病变 7

（八）遗传代谢性肝病 8

二、病毒性肝炎新病原体的探索 8

（一）GB病毒感染 8

（二）TTV感染 9

（三）SEN病毒感染 10

三、病毒性肝炎实验诊断存在的问题和展望 10

（一）存在的问题 10

（二）展望 12

第2章 肝炎病毒及其标志物检验的诊断用品和质量控制 15

一、概述 15

二、甲型肝炎病毒及其标志物检验的诊断用品和质量控制 16

（一）甲型肝炎病毒RNA检测 16

（二）甲型肝炎病毒抗原检测 16

（三）抗-HAVIgM检测 16

（四）抗-HAV总抗体测定 17

（五）国家对甲型肝炎病毒诊断试剂的管理及参考品 17

（一）乙型肝炎诊断试剂简介 18

（二）各种乙型肝炎诊断试剂及其方法 18

三、乙型肝炎病毒及其标志物检验的诊断用品和质量控制 18

（三）国家质控参考品和标准 19

（四）乙型肝炎诊断试剂质量检定情况 20

四、丙型肝炎病毒及其标志物检验的诊断用品和质量控制 21

（一）简介 21

（二）HCV抗体的检测 21

（三）HCV基因及抗原的检测 22

（四）国内丙型肝炎诊断试剂的现状及质量控制 22

五、丁型肝炎病毒及其标志物检验的诊断用品 25

（一）丁型肝炎病毒及其标志物检验 25

（二）HDAg的检测 25

六、戊型及庚型肝炎病毒标志物检验的诊断用品 26

（一）戊型肝炎病毒标志物的诊断用品 26

（四）HDVRNA的检测 26

（三）抗-HD的检测 26

（二）庚型肝炎病毒标志物诊断用品的初步研究 27

七、肝炎实验诊断生物芯片产品和质量控制要点 27

（一）制造的基本要求 28

（二）专用原材料 28

（三）专用仪器 28

（四）制备程序 29

（五）半成品检定 29

（六）成品检定 29

第3章 肝炎病毒检测实验室的质量管理 30

一、适用范围 30

二、依据和目的 30

三、定义 30

四、建立质量管理体系 31

（一）标本的来源 37

一、概述 37

第4章 病毒性肝炎检验标本的收集、运送和保存以及标本检测中的注意事项 37

（二）常见标本的收集、运送和保存 38

二、病毒性肝炎标本收集、运送和保存的一般原则 40

（一）HAV标本的收集、运送和保存 40

（二）HBV和HDV标本的加工及其职业安全准则 41

（三）HCV标本的收集 41

（四）HEV标本的收集和运送 42

（五）标本检测中的注意事项 42

第5章 肝炎病毒免疫学的检测方法 44

一、概述 44

（一）肝炎病毒及其免疫学的检测项目 44

（二）肝炎病毒免疫学检测的基本原理 45

二、甲型肝炎病毒抗体的检测 46

（一）抗-HAVIgM检测 46

（二）抗-HAV总抗体测定 47

三、乙型肝炎病毒抗原和抗体的检测 48

（一）HBsAg检测 48

（二）抗-HBs检测 55

（三）HBeAg检测 58

（四）抗-HBe检测 61

（五）抗-HBc检测 63

（六）pre-s1抗原检测 67

（七）pre-s2抗原检测 69

（八）抗-pre-s2检测 70

四、丙型肝炎病毒抗体的检测 71

（一）丙型肝炎病毒抗体酶联免疫法 72

（二）丙型肝炎病毒抗体免疫印迹法 76

（三）丙型肝炎病毒抗体蛋白芯片检测试剂 78

（一）丁型肝炎病毒抗原（HDVAg）的检测 80

五、丁型肝炎病毒抗原和抗体的检测 80

（二）抗-HDVIgM的检测 81

（三）丁型肝炎抗体抗-HDV的检测 83

六、戊型肝炎病毒抗体的检测 84

（一）酶联免疫法检测抗-HEVIgG抗体 84

（二）EIA检测血清中抗-HEVIgM抗体 87

七、肝炎病毒免疫复合物的检测 88

（一）HBVCIC的检测 89

（二）单特异性CIC的检测 92

（三）双特异性CIC的检测 93

（四）丙型肝炎循环免疫复合物的检测 96

第6章 肝炎病毒的基因诊断技术 100

一、概述 100

（一）基因诊断的方法 100

（二）PCR的抗污染问题 102

二、抗原捕捉聚合酶链反应检测甲型肝炎病毒RNA 103

三、乙型肝炎病毒的基因诊断技术 106

（一）荧光定量PCR检测HBVDNA 106

（二）定量酶联杂交PCR检测HBVDNA 110

（三）使用PCR和微流芯片技术定量HBVDNA及HBV变异株（1896C及YMDD） 113

（四）免疫杂交梳PCR检测HBVDNA 117

（五）UniArray技术检测HBV拉米夫定耐药突变 120

（六）PCR双探针杂交用于HBVDNA定量及基因分型检测 123

四、丙型肝炎病毒的基因诊断技术 127

（一）免疫杂交PCR检测HCVRNA 127

（二）实时荧光PCR定量检测HCVRNA 130

（三）通用信号模板扩增核酸技术检测HCVRNA 133

（四）NASBA用于HCVRNA的定量检测 136

（五）基因芯片法联合检测HBVDNA-HCVRNA 139

五、丁型肝炎病毒的基因诊断技术 142

（一）逆转录-聚合酶链反应测定HDVRNA 142

（二）原位杂交检测肝组织中的HDVRNA 144

六、戊型肝炎病毒的基因诊断技术 146

第7章 各型病毒性肝炎的血清学反应图解及其标志物的临床意义 150

一、概述 150

二、甲型肝炎的血清学反应图解及其标志物的临床意义 151

三、乙型肝炎血清学反应图解及其标志物的临床意义 152

四、丙型肝炎血清学反应图解及其标志物的临床意义 159

五、丁型肝炎血清学反应图解及其标志物的临床意义 161

六、戊型肝炎血清学反应图解及其标志物的临床意义 163

七、肝炎病毒血清学标志物 164

（一）乙型肝炎病毒变异的临床意义 166

一、肝炎病毒变异的临床意义 166

第8章 肝炎病毒的变异性及其检测方法 166

（二）丙型肝炎病毒变异的临床意义 173

二、肝炎病毒变异的检测方法 175

（一）核酸序列分析 175

（二）限制性片段长度多态性 176

（三）聚合酶链反应　单链构象多态性分析 178

（四）异源双链电泳 178

（五）5端酶解法 179

第9章 病毒性肝炎病理学检查 180

一、一般病理学检查 180

（一）病毒性肝炎的病理变化 180

（二）肝脏组织取材与保存 181

（三）肝脏组织的固定 181

（五）肝脏组织病理切片及染色技术 184

（四）肝脏组织的速冻保存 184

二、免疫病理学检查 189

（一）免疫荧光组织化学方法 189

（二）免疫酶组织化学方法 190

（三）免疫金-银染色法 193

（四）亲和免疫组织化学方法 194

（五）抗原抗体效价的测定 195

（六）对照设置 196

（七）微波在免疫组织化学中的应用 196

三、分子病理学检查 197

（一）Southernblot 197

（二）免疫转印技术 201

（三）原位杂交 207

（四）PCR和原位PCR 209

（五）细胞凋亡研究技术 213

第10章 酒精性肝病和非酒精性脂肪肝的实验诊断 219

一、概述 219

二、天门冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶测定 220

（一）天门冬氨酸转氨酶测定——连续监测法 220

（二）丙氨酸转氨酶测定——连续监测法 221

三、谷氨酸脱氢酶测定 222

四、胆红素的测定、红细胞平均容量 224

（一）胆红素的测定 224

（二）红细胞平均容量 226

五、尿酸的测定——过氧化物酶偶联法 226

六、血脂测定 228

（一）胆固醇氧化物酶测定法 228

（二）甘油三酯磷酸甘油氧化酶测定法 228

（三）高密度脂蛋白胆固醇测定——抗体阻碍法 229

（四）低密度脂蛋白胆固醇测定 230

（六）载脂蛋白测定 231

（五）脂蛋白（α）测定——免疫比浊法 231

（七）载脂蛋白AI测定 232

七、血浆总蛋白及白蛋白测定 233

（一）血浆总蛋白测定（双缩脲法） 233

（二）血浆白蛋白测定（溴钾酚绿法） 233

八、血清相关酶测定 233

（一）γ-谷氨酰转移酶测定——连续监测法 233

（二）谷胱甘肽转移酶测定——连续监测法 234

（三）胆碱酯酶测定——连续监测法 235

（四）天门冬氨酸氨基转移酶同工酶 235

（五）碱性磷酸酶测定——连续监测法 236

（六）鸟氨酸氨基甲酰转移酶 237

九、血清转铁蛋白测定——免疫散射比浊法 238

（二）非酒精性脂肪肝 239

十、组织病理学变化 239

（一）酒精性肝病 239

第11章 肝纤维化的实验诊断 241

一、肝脏细胞的分离培养 241

二、其他肝脏细胞的分离方法 243

三、肝组织羟脯氨酸测定 243

四、肝脏细胞外基质成分的检验 244

（一）Ⅲ型前胶原氨基端肽 244

（二）层连蛋白 246

（三）Ⅳ型胶原 248

（四）金属蛋白酶组织抑制因子 250

（五）透明质酸 252

（六）脯氨酸羟化酶 254

（一）抗核抗体的新概念 257

第12章 肝内胆汁淤积性疾病和自身免疫性肝炎的实验诊断 257

一、抗核抗体的临床意义及检测方法 257

（二）抗核抗体检测的临床意义 258

（三）抗核抗体的检测方法 258

（四）抗核抗体检测的实验操作 259

二、抗脱氧核糖核酸抗体的临床意义及检测方法 260

（一）抗-DNA抗体概述 260

（二）抗-DNA抗体临床意义 260

（三）抗-dsDNA抗体的检测方法 261

（四）抗-dsDNA检测实验操作（马疫锥虫间接免疫荧光法） 261

三、自身免疫性肝病相关自身抗体临床意义及检测方法 262

（一）自身免疫性肝炎 262

（二）原发性胆汁肝硬化 263

（三）类风湿因子的临床意义及检测方法 264

（四）抗线粒体抗体（AMA）——M2亚型的测定 265

（五）原发性胆汁性肝硬化的病理学改变 266

四、抗肝／肾细胞微粒体抗体Ⅰ型测定 270

（一）免疫荧光法检测抗-LKM1 270

（二）固相放射免疫法检测抗-LKM1 270

五、抗-GOR抗体的检测 271

六、固相放射免疫检测可溶性肝细胞抗原 272

七、免疫荧光法检测抗肝细胞膜抗原抗体 272

八、抗甲状腺球蛋白抗体的检测（抗-TG） 273

（一）IFT检测抗-TG抗体 273

（二）PHA法检测抗-TG抗体 273

（三）ELISA检测抗-TG抗体 274

九、抗甲状腺微粒体抗体的检测 274

（一）单向免疫扩散试验 275

十、抗骨骼肌肌动蛋白抗体的检测 275

十一、血清IgG、IgA、IgM的检测 275

（二）免疫比浊试验 276

（三）免疫胶乳浊度测定法 276

（四）其它血清学方法 277

（五）免疫球蛋白正常参考值 277

十二、IgD与IgE的检测 277

（一）免疫扩散放射自显影试验 277

（二）放射免疫分析技术 278

（三）酶联免疫吸附试验 278

（四）正常参考值及临床意义 279

［附］血清补体含量测定 279

（一）溶血法测定 279

（二）免疫血清学方法测定 282

一、引起肝损伤的常见药物种类 284

第13章 药物性肝炎 284

二、药物性肝损伤的发病机制 289

三、药物性肝损伤的诊断 291

四、药物性肝炎的临床分类 294

五、诊断和鉴别诊断 295

六、诊断实例 296

（一）血清中扑热息痛的含量测定 296

（二）尿中异烟肼及乙酰异烟肼的比色测定 297

第14章 细菌感染与肝胆疾病的实验诊断 299

一、概述 299

二、伤寒、副伤寒、沙门菌、大肠埃希菌和志贺菌的检查 301

三、葡萄球菌、链球菌（肺炎链球菌）的检查 306

四、淋病奈瑟菌的检查 311

五、钩端螺旋体、梅毒螺旋体的检查 312

六、产气荚膜杆菌检查 315

七、结核杆菌检查 317

八、布氏杆菌检查 319

九、Q热检查 321

第15章 引起人类肝炎的其他病毒的实验诊断 323

一、概述 323

（一）疱疹病毒科与肝炎 324

（二）腺病毒科——腺病毒与肝炎 326

（三）微小病毒科——人类微小病毒B19与肝炎 326

（四）披膜病毒科——风疹病毒与肝炎 326

（五）副黏病毒科与肝炎 327

二、巨细胞病毒检查 327

（一）人类巨细胞病毒的分离和鉴定 327

（二）免疫荧光技术检测抗-HCMVIgM 329

（三）酶联免疫吸附试验检测抗-HCMVIgM 331

（四）聚合酶链反应检测HCMVDNA 332

三、EBV检查 335

（一）免疫荧光法检测EBVIgA抗体 335

（二）聚合酶链反应检测EBVDNA 336

（三）酶联免疫吸附试验检测抗-EBVIgM抗体 338

四、风疹病毒检查 339

（一）风疹病毒的分离和鉴定 339

（二）ELISA检测风疹病毒IgM抗体 341

（三）RT-PCR检测RVRNA 342

五、单纯疱疹病毒检查 345

（一）ELISA检测血清的HSV-IgM 345

（二）单纯疱疹病毒的分离鉴定 346

（三）聚合酶链反应检测HSVDNA 347

六、肠道病毒检查 350

（一）免疫电镜技术检测肠道病毒（EV） 350

（二）肠道病毒的分离与鉴定 351

（三）逆转录聚合酶链反应检测肠道病毒RNA 352

七、HIV检查 354

（一）酶联免疫法检测HIVP24抗原 354

（二）酶联免疫法检测抗-HIV抗体 355

（三）HIV确证检测 356

第16章 寄生虫感染与肝胆疾患的实验诊断 358

一、血吸虫检查 358

（一）概述 358

（二）实验诊断 359

二、疟原虫检查 360

（一）概述 360

（二）实验诊断 360

三、阿米巴检查 361

（一）概述 361

（二）实验诊断 362

四、华支睾吸虫检查 363

（一）概述 363

（二）实验诊断 363

五、细粒棘球绦虫检查 363

（一）概述 363

（二）实验诊断 364

（一）概述 364

七、寄生虫的实验诊断技术 364

六、肝片吸虫检查 364

（二）实验诊断 364

（一）粪便检查 365

（二）血液涂片检查 369

（三）十二指肠引流液检查 371

（四）免疫学检查 372

第17章 细胞免疫功能的测定 377

一、概述 377

二、T淋巴细胞亚群检测 378

（一）免疫荧光法 379

（二）免疫酶法——碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶染色法 380

（三）SPA花环法 381

（四）流式细胞仪自动细胞计数法 383

（一）51Cr释放法 384

三、NK细胞活性测定 384

（二）乳酸脱氢酶释放法 385

四、细胞毒试验 386

（一）特异性细胞毒性T细胞活性测定——HBV特异性细胞毒性T细胞试验 386

（二）抗体依赖细胞介导的细胞毒试验——51Cr释放法 388

（三）淋巴因子激活的杀伤细胞活性测定 390

（四）白细胞移动抑制试验 391

五、白细胞黏附抑制试验 394

（一）血细胞计数板法 394

（二）电子血细胞计数器法 395

六、测定细胞免疫功能的皮肤试验 396

第18章 细胞因子的检验 399

一、概述 399

（一）细胞因子的种类 399

（二）细胞因子的生物学效应与应用价值 399

（三）细胞因子与肝纤维化的病理作用 399

（五）细胞因子的检测法 400

（四）肝内CK的产生细胞 400

二、人体干扰素的检验 402

（一）人γ干扰素的测定 402

（二）干扰素α、β、γ诱导的抗病毒活性的检测 404

三、肿瘤坏死因子的检验 405

四、白细胞介素的检验 407

（一）白细胞介素2 407

（二）白细胞介素4 409

（三）白细胞介素6 410

五、生长因子的检验 410

（一）基本概念 414

（二）临床生化检验室内质量控制的基本原理与方法 414

一、临床生化检验质量控制的基本原理和方法 414

第19章 血清生化指标测定 414

（三）临床生化检验室间质评的基本原理与方法 416

二、蛋白质及蛋白质电泳测定 419

（一）血清总蛋白双缩脲测定法 419

（二）血清总蛋白溴甲酚绿测定法 420

（三）血浆纤维蛋白原比浊测定法 422

（四）血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 423

三、脂类及脂蛋白测定 426

（一）甘油三酯磷酸甘油氧化酶测定法 426

（二）胆固醇氧化酶测定法 428

（三）HDL-C磷钨酸-镁沉淀测定法 429

（四）脂蛋白电泳 430

（五）血清ApoAI和ApoB免疫透射比浊测定法 432

四、胆色素测定 433

（一）血清总胆红素和结合胆红素测定——改良J-G测定法 433

（二）尿胆红素、尿胆原的测定 435

（一）凝血因子测定 437

五、凝血障碍测定 437

（二）DIC实验室诊断概述 440

六、糖耐量试验 443

（一）葡萄糖耐量试验 443

（二）半乳糖耐量试验 445

第20章 血清酶活性的测定 447

一、血清酶测定的基本原理 447

（一）血清酶的分类 447

（二）血清酶变化的病理生理机制 448

（三）血清酶的生理变化 449

（四）测定方法、标本处理等对测定结果的影响 450

二、肝脏疾病的酶学诊断 452

（二）肝细胞的不均一性 454

（一）肝组织结构和血清酶活性变化 454

（三）肝血窦的解剖特点 455

三、血清酶活性的测定 455

（一）肝细胞损伤有关的血清酶测定 455

（二）肝胆系统梗阻有关的血清酶活性测定 472

（三）肝纤维化有关的血清酶活性测定 477

四、血清酶活性测定的校准 480

（一）校准方法与公式 481

（二）校准值误差分析 482

第21章 肝脏排泄功能试验 484

一、吲哚青绿试验 484

二、酶法测定血清总胆汁酸 487

三、药物代谢试验 490

（一）安替匹林血浆清除试验 490

（二）静脉色氨酸耐量试验 491

四、碱性磷酸酶试验 493

五、亮氨酸氨基肽酶试验 494

第22章 遗传代谢性肝病的实验室诊断 499

一、概述 499

二、血浆和血清铜的测定 500

（一）比色法 500

（二）原子吸收分光光度法 501

三、尿液中铜的测定——原子吸收分光光度法 502

四、肝组织中铜的测定 503

五、铜蓝蛋白氧化酶的测定 503

六、血清铁的测定 505

（一）亚铁嗪法 505

（二）酶法 506

（一）放射免疫法 507

七、血清铁蛋白的测定 507

（二）酶联免疫吸附试验（ELISA） 508

八、转铁蛋白饱和度的测定 509

第23章 生物芯片简介及其在肝病诊断中的应用 512

一、生物芯片的概念和特点 512

二、生物芯片的分类 513

三、生物芯片的制备和检测 514

（一）芯片载体的表面修饰 514

（二）芯片阵列制作方式 514

（三）杂交探针的种类与制备 515

（四）样品制备和标记 517

（五）分子杂交和杂交微环境 518

（六）杂交信号采集和处理 518

（七）生物信息的分析和提取 519

（二）基因突变分析 521

四、生物芯片在医学中的应用 521

（一）微缩实验室芯片 521

（三）克隆选择及文库筛选 522

（四）测序芯片 522

（五）基因多态性分析 522

（六）基因表达谱分析 522

（七）微生物菌种鉴定、致病机制及抗药性分析 523

（八）药物筛选芯片 523

五、生物芯片在肝病诊断中的应用 523

（一）肝炎病毒联合检测芯片 523

（二）肝炎病毒基因分型芯片 524

（三）肝炎病毒血清学分型及标志物检测蛋白质（或肽）芯片 524

（四）耐药基因突变检测芯片 524

（五）其它 524

一、如何利用常见的搜索引擎去获取肝炎的相关信息 526

第24章 网络技术在肝炎研究信息收集方面的应用 526

二、与肝炎直接相关的专业性网站和其网址 528

（一）与肝炎直接相关的学会、协会和组织 528

（二）与肝炎相关的研究所和实验中心 530

（三）与肝炎相关的专业杂志 531

（四）医学用的专业检索网站 531

（五）与肝炎相关的一些重要的信息收集网站 532

（六）相关的软件信息网站 536

（七）相关的分子生物学信息网站 537

（八）部分国家的肝炎相关网站 537

附录1　HBV、HCV感染的残余危险和HBV、HCV核酸扩增试验标准品的国际标准 542

附录2　部分供应商 545

附录3　本书有关的略语 547