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第一章 核酸的生物化学 1

第一节 核酸概述 1

一、核酸的发现 1

二、核酸的分类 2

三、核酸的功能 2

第二节 核酸的分子组成 2

一、元素组成 2

二、核酸的基本结构单位——核苷酸 2

第三节 核酸的分子结构 6

一、核酸中核苷酸的连接 6

二、DNA的分子结构 8

三、RNA的分子结构 11

一、核酸的酸碱性质 15

第四节 核酸的理化性质 15

二、核酸的高分子性质 16

三、核酸的紫外吸收 16

四、核酸的变性和复性 16

第五节 DNA的生物合成 18

一、DNA生物合成的概念 18

二、DNA的复制合成 18

三、反转录合成 24

四、DNA的修复合成 25

第六节 RNA的生物合成 25

一、RNA生物合成的概念 25

二、转录体系的组成 26

三、转录过程 28

四、转录后加工过程 28

第一节 PCR的基本原理 34

第二章 基因扩增及其相关检测技术 34

一、模板核酸 36

二、引物 36

三、缓冲液 36

四、Mg2+ 36

五、三磷酸脱氧核苷酸（dNTP） 36

六、耐热DNA聚合酶 36

第二节 PCR反应的基本条件及其对PCR的影响 36

七、温度和循环参数 37

第三节 PCR扩增产物的分析法 37

四、PCR-ELISA法 38

第四节 PCR反应相关检测技术 38

五、荧光探针标记法 38

三、微孔板夹心杂交法 38

二、点杂交 38

一、凝胶电泳分析法 38

一、原位PCR技术 39

二、标记PCR和彩色PCR 39

三、反向PCR 39

四、不对称PCR 40

五、多重PCR 40

第五节 其它基因扩增检验技术 40

一、连接酶链反应 40

二、依赖核酸序列的扩增 41

三、转录依赖的扩增系统 41

四、Qβ复制酶反应 42

五、bDNA 42

二、影响PCR结果的因素 45

一、PCR实验包括的步骤 45

第一节 PCR技术 45

第三章 聚合酶链反应测定的技术要点 45

第二节 PCR的应用 46

一、在感染疾病中的应用 47

二、PCR在诊断病原体感染时的优缺点 47

第三节 PCR假阳性或假阴性的预防和对策 47

一、对产物污染的预防 47

二、对于交叉污染、培养物及其它污染的预防应采取综合性防范措施 49

三、出现污染现象后的措施 49

四、假阴性的预防及对策 49

第四节 实验设备及试剂的规范化和标准化 49

一、实验室设置及设备的规范化 49

二、实验试剂的标准化 49

三、操作人员的要求 50

第四章 临床基因扩增检验实验室的设置、质量管理体系的建立及其技术验收 52

第一节 临床标本的接收 52

第二节 基因扩增检验实验室设置的一般要求及工作流程 52

一、试剂准备区 53

二、标本制备区 53

三、扩增区 54

四、产物分析区 54

第三节 有关临床基因扩增检验实验室技术验收有关问题的解释 55

一、实验室设置和设备 55

二、设施和环境 55

三、人员 55

九、质量控制 56

八、报告 56

七、记录 56

五、检测方法 56

四、设备管理和质控物 56

六、标本管理 56

十、抱怨 57

十一、其它有关技术验收的内容 57

第四节 临床基因扩增检验实验室如何准备技术验收 57

第五章 临床基因扩增检验标本的处理、保存及核酸提取方法 66

第一节 临床标本的处理和保存 66

一、血清（浆）标本 66

二、全血标本 66

六、脓液 67

八、组织 67

七、体液 67

五、棉拭子 67

四、痰 67

三、外周血单个核细胞 67

第二节 核酸的提取方法 68

一、DNA提取的经典方法 68

二、RNA的提取 69

三、核酸提取的改良方法 71

一、结核分枝杆菌（TB） 78

第一节 关于结核分枝杆菌等几项检测的具体应用 78

第六章 PCR测定的临床应用及测定结果的临床意义 78

二、沙眼衣原体（Ct） 79

三、HBV-DNA 80

四、HCV-RNA 81

五、人类组织相容性抗原（HLA） 81

第二节 遗传病检测 82

一、PCR结合等位基因特异性寡核苷酸（ASO）探针法 82

第三节 肿瘤研究中的分子生物学检测 83

四、单链构象多态分析（PCR-SSCP） 83

二、PCR扩增特异等位基因（PASA） 83

三、限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP） 83

第四节 临床应用评价应注意的共同问题 84

一、假阳性和假阴性 84

二、阳性率与“金标准” 84

三、临床实践是判断PCR结果的最重要依据 84

第七章 基因扩增检验技术在遗传病诊断及基因配型中的应用 88

第一节 基因扩增检验技术在遗传病诊断中的应用 88

一、基因探针技术的应用 88

二、PCR技术及其在遗传病基因诊断中的应用 88

三、无创产前基因诊断技术 91

四、生物芯片技术 91

五、展望 91

第二节 PCR技术在HLA-DRB1基因配型中的应用 92

第二节 定量PCR方法 98

第一节 PCR扩增的理论模式 98

第八章 定量聚合酶链反应测定技术及其临床应用 98

一、使用外标准的定量PCR方法 99

二、动力学方法 99

三、内标定量方法 100

第三节 定量PCR测定的临床应用及应注意的问题 101

第九章 临床基因扩增检验实验室常用仪器设备 105

第一节 PCR热循环仪（DNA扩增仪） 105

一、PCR扩增仪的原理及发展状况 105

二、PCR扩增仪的使用与保养 109

三、国内常见荧光定量PCR仪介绍 110

第二节 高速／冷冻离心机 111

一、使用方法 112

二、注意事项 112

四、几种高速离心机性能介绍 113

三、维护和保养 113

第三节 加样器（移液器） 114

一、加样器的类型 114

二、加样器的技术指标 115

三、加样器的使用 116

四、加样器的性能测试 119

五、加样器的校准——加样器校准标准操作程序（SOP） 119

六、注意事项 121

七、维护 122

八、故障排除 122

第四节 洗板机 122

一、洗板机机理的研究 123

二、洗板机的发展状况 123

三、国内常见洗板机简介 123

四、选购洗板机的注意事项 124

五、洗板机使用中的注意事项 125

第十章 PCR热循环式核酸扩增仪 128

第一节 简介 128

第二节 核酸扩增反应仪 128

一、PCR仪的由来和发展 128

二、选用PCR仪的标准 129

三、选用优化的PCR程序的重要性 130

四、如何测定热循环仪孔与孔之间的差别 131

五、使用热循环仪的几个基本注意要点 132

六、精密度（Precision） 136

五、偏差（Bias） 136

四、准确度（Accuracy） 136

三、室间质量评价（ExternalQualityAssessment,EQA） 136

二、室内质量控制（InternalQualityControl,IQC） 136

一、质量保证（QualityAssurance,QA） 136

第一节 定义 136

第十一章 临床基因扩增检验的质量保证 136

七、重复性条件（RepeatabilityConditions） 137

八、批（Run） 137

九、均值（Mean） 137

十、标准差（StandardDeviation,SD或s） 137

十一、变异系数（CoefficientofVariation,CV） 137

十二、正态分布（GaussianDivtribution） 137

第二节 质量保证、室内质控和室间质评之间的关系 138

第三节 标本收集、运送、保存及其质量控制 139

一、标本收集 139

第四节 室内质量控制（IQC） 140

三、标本运送 140

二、标本保存 140

一、测定前质量控制 141

二、核酸样本的制备、扩增检测及其质量控制 143

三、统计学质量控制 145

四、室内质控数据的评价 155

五、室内质控的局限性 155

第五节 室间质量评价（EQA） 155

一、EQA的程序设计 155

二、EQA的局限性 160

第十二章 临床聚合酶链反应试剂盒的选用和质检 164

第一节 PCR或RT-PCR试剂盒的组成 164

第二节 影响PCR试剂盒质量的因素 164

一、核酸提取方法 164

三、核酸扩增方法 165

二、核酸扩增所需的原材料 165

五、试剂盒的运输和贮存 166

第三节 临床PCR试剂盒的分类 166

第四节 临床PCR试剂盒的选用原则 166

四、产物检测 166

第五节 临床PCR试剂盒的质检 167

一、内、外包装的质检 167

二、试剂盒测定性能的质检 167

第十三章 临床基因扩增检验技术的进展 171

第一节 探针杂交技术 171

一、荧光探针标记技术 171

二、酶标记探针杂交技术 172

第二节 UNG防污染技术 172

二、核酸提取的标准化和自动化技术 173

第三节 其它相关技术 173

一、内标准技术 173

第十四章 《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》的解释说明 176

第一节 《办法》管辖的基因扩增检验方法 176

第二节 临床基因扩增检验项目的申报和审定 177

第三节 实验室设置审批 177

第四节 实验室工作人员的资格和培训单位的审定 177

第五节 对违反本办法的医疗机构和实验室的处罚 178

第六节 实验室的监督管理单位 178

附录1 临床基因扩增检验实验室管理暂行办法临床基因扩增检验实验室基本设置标准 183

附录2 临床基因扩增检验实验室工作规范 185

附录3 临床基因扩增检验实验室技术验收申请表 192

附录4 临床基因扩增检验实验室技术验收报告 194