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第一章 细胞培养及其在医学研究中的应用 1

第一节 细胞（组织）培养发展简史 1

早期的启示 1

组织培养发展简史 1

第二节 细胞（组织）培养的基础知识 3

基本概念 3

细胞培养的定义和分类 3

对细胞培养工作者的基本要求 4

细胞培养工作者的注意事项 4

对细胞培养的评价 4

第三节 细胞培养在医学和生物学研究中的主要应用 5

细胞生理学研究 5

放射生物学研究 7

肿瘤及癌变的研究 7

药理及药物筛选研究 8

细胞病理学研究 8

其他方面的研究 9

第二章 细胞培养的主要类型和方法 11

第一节 培养细胞生长方式 11

贴附型 11

悬浮型 12

第二节 细胞培养的基本类型和技术 13

原代培养 13

传代培养 13

细胞系 13

无限细胞系和（或）永生细胞系 13

克隆细胞株 14

第三节 细胞培养的基本方法 14

液体培养方法 14

半固体琼脂培养法 14

第三章 单细胞和球体细胞培养及细胞活力的检测方法 15

第一节 单细胞培养实验 15

实验要求 15

原理 15

克隆方法 16

提高克隆形成率的措施 20

第二节 球体细胞培养实验法 22

球体细胞培养 22

球体细胞和单层细胞混合培养 23

软琼脂克隆形成试验 23

第三节 细胞活力的检测方法 24

台盼蓝排斥试验 24

伊红Y排斥试验 26

苯胺黑排斥试验 26

四唑盐（MTT）比色试验 26

XTT比色试验 27

第四章 肿瘤细胞培养和染色体标本制备 30

第一节 肿瘤细胞培养工作的目的意义 30

细胞生存 30

癌细胞分化 30

癌变 31

人癌病毒 31

肿瘤治疗 31

第二节 肿瘤细胞的原代培养 31

组织 31

体腔液 32

血液 32

第三节 人癌细胞株的鉴定 33

癌细胞在体内的特征 33

癌细胞在体外的特性 33

人癌细胞株的鉴定 33

第四节 传代细胞染色体标本的制作方法 34

秋水仙素处理，积累中期分裂相 34

胰酶消化，分散成单个细胞 34

低渗处理，胀大染色体 34

固定 34

空气干燥法制片 34

染色 35

第五章 神经细胞培养 36

第一节 总论 36

神经细胞的培养类型 36

常用的神经细胞培养法 37

神经细胞系的建立 39

神经细胞的原代培养 39

第二节 培养方法 42

神经元细胞培养 43

海马神经元原代培养 44

鸡胚背根神经节组织块培养 46

新生大鼠大脑皮层神经元分散培养 46

新生大鼠、新生小鼠及鸡胚背根神经节分散细胞培养 47

新生小鼠颈上交感神经元分散细胞培养 47

胚胎小鼠、大鼠、鸡胚脊髓腹角运动神经元培养 48

新生大鼠隔神经元分散培养 49

新生大鼠下丘脑神经元分散培养 49

新生大鼠纹状体神经元培养 49

新生大鼠中脑黑质神经元培养 50

新生大鼠小脑神经元培养 50

新生大鼠脑腺垂体细胞培养 50

神经胶质细胞培养 51

成年大鼠背根节神经元分散培养 52

海马脑片培养 52

新生大鼠海马神经干细胞培养 53

新生大鼠海马神经前体细胞培养 53

心肌细胞培养 53

心肌细胞和交感神经元共同培养 54

海马神经元的无血清培养 55

PC12细胞培养和向神经元诱导分化 55

P19细胞培养和向神经元诱导分化 56

第六章 造血干／祖细胞及其分离培养技术 59

第一节 造血干／祖细胞生物学特性 59

造血干／祖细胞的主要特征 59

造血干／祖细胞表达的主要表面标志 60

造血干细胞的来源 61

第二节 造血干／祖细胞分离技术 61

利用细胞物理性状 61

免疫吸附分离 62

荧光激活的细胞分选 64

第三节 造血干／祖细胞体外培养技术 67

液体培养 67

集落培养（半固体培养） 70

第四节 体内造血重建模型 73

羊胚模型 73

重症联合免疫缺陷病-人骨动物模型 73

NOD／SCID小鼠模型 73

脾集落测试法（同系小鼠模型） 73

第七章 鼠类原代肝细胞分离、培养及实验应用技术 76

第一节 肝脏细胞的种类及生长条件 76

肝细胞的种类及分布 76

肝细胞的原代分离及研究用途 76

原代肝细胞生长的条件 76

第二节 肝细胞的生物学特性 77

第三节 肝细胞原代分离 77

大鼠肝细胞分离 77

小鼠肝细胞原代分离技术 79

肝枯否细胞分离 79

大鼠肝星形细胞分离 79

第四节 肝细胞在实验中的应用 80

第五节 荧光染色技术及其在实验中的应用 81

荧光染色的作用及其特点 81

荧光标记方法分类 81

荧光染色应用示例 81

第六节 原位肽配基细胞化学荧光染色分析 84

第八章 杂交瘤细胞系的建立 85

第一节 细胞培养液的配制及质量控制 85

培养液成分的配制 85

胎牛血清及培养液效价测试 86

污染的控制 87

第二节 杂交瘤细胞实验程序 87

第三节 免疫动物 88

可溶性抗原 89

颗粒性（细胞）抗原 89

第四节 骨髓瘤细胞的培养 89

选择骨髓瘤细胞 89

骨髓瘤细胞系的维持 90

第五节 饲养细胞的制备 90

巨噬细胞 90

脾细胞 91

胸腺细胞 91

第六节 细胞融合 91

骨髓瘤细胞悬液制备 91

免疫鼠脾细胞的制备 91

细胞融合程序 92

脾细胞与骨髓瘤细胞比例 92

加入融合后细胞混合物数量 92

第七节 HAT选择培养液的作用 93

常规方法 93

直接法 93

第八节 筛选分泌抗体的杂交瘤细胞 94

试剂配制 94

操作程序 95

第九节 杂交瘤细胞的克隆化培养 96

杂交细胞直接接种法 96

半固体琼脂培养法 96

有限稀释法 96

第十节 单克隆抗体的大量制备法 96

连续细胞培养法 96

大瓶温箱培养法 97

动物体内培养法 97

第十一节 杂交瘤细胞的冻存与复苏 97

细胞的冻存-液体氮保存 97

细胞的复苏 97

第十二节 单克隆抗体的纯化、鉴定与保存 98

单克隆抗体的纯化 98

单克隆抗体的鉴定 98

单克隆抗体的保存 98

第九章 原位PCR技术理论与实践 99

第一节 原位PC R概论 99

原位PCR发展史 99

原位PCR概念 99

第二节 原位PCR基本原理与设计方案 100

PCR技术 100

原位杂交技术 100

原位PCR技术 100

第三节 原位PCR方法分类 100

第四节 几种常用的IS PCR方法和设计方案 101

直接法原位PCR 101

间接法原位PCR 101

原位反转录PCR 101

原位再生式序列复制反应 103

第五节 原位PCR基本步骤 104

标本种类 104

取材 104

标本制备 104

标本固定 104

扩增前预处理 105

反转录反应 105

原位PCR扩增 105

扩增后处理 106

原位检测 106

对比显色 106

第六节 原位PCR方法的选择 106

是否用原位PCR 106

用何种原位PCR 107

探针及检测系统的选择 107

第七节 原位PCR操作注意事项 108

原位PCR仪 108

试剂 108

加扩增反应液及上机 108

注意无菌操作 108

设置对照实验 108

第八节 原位PCR存在的问题和结果分析 109

原位PCR技术操作的复杂性 109

原位PCR技术的敏感性 110

原位PCR技术的特异性 110

原位PCR技术的定量问题 110

第九节 原位PCR的应用 110

外源性基因检测 110

内源性基因检测 111

原位PCR的应用前景 111

第十节 原位PCR操作程序示例 111

主要试剂配方 111

操作程序 113

对照实验设置 114

结果判定 114

第十章 真核细胞基因转导技术 116

第一节 导论 116

第二节 真核细胞基因转染方法的原理与特点 116

磷酸钙介导转染法 116

DEAE葡聚糖介导转染法 117

电击基因导入法 11

机械法 117

脂质体介导转染法 118

第三节 稳定转染细胞的筛选 119

第四节 病毒转移载体及特点 121

逆转录病毒载体 121

腺病毒载体 121

腺相关病毒载体 121

单纯疱疹病毒载体 122

第五节 重组腺病毒的构建与基因转移 122

第六节 常用的报告基因及检测方法 124

氯霉素乙酰转移酶 124

萤火虫荧光素酶 124

β-半乳糖苷酶 124

绿色荧光蛋白 124

第七节 目的基因的检测 124

DNA水平的分析 124

RNA水平的分析 124

蛋白水平的分析 124

第十一章 信号转导的主要研究技术 126

第一节 细胞信号转导的概念及主要信号转导途径 126

细胞信号转导的概念 126

细胞信号转导的主要途径 127

信号转导通路举例 128

第二节 细胞信号转导异常与疾病 130

信号异常 130

信号转导异常 130

第三节 信号转导研究相关技术 132

概述 132

常用检测方法 132

第十二章 细胞膜片钳技术及应用 139

前言 139

第一节 膜片钳技术概述 139

什么是膜片钳技术 139

膜片钳系统的组成 140

膜片钳技术的基本记录模式 140

膜片钳技术的应用 140

第二节 膜片钳技术实验方法 142

全细胞记录技术 142

其他膜片钳技术方法 145

第三节 pClamp数据采集和处理软件概述 146

pClamp数据采集和处理软件概述 146

Clampex 8数据采集软件 146

Clampfit 8数据处理分析软件 147

第十三章 显微镜的使用方法与显微摄影技术 148

第一节 显微镜的使用方法 148

普通显微镜的使用方法 148

倒置显微镜的使用方法 151

荧光显微镜的使用方法 151

相差显微镜的使用方法 153

第二节 简述显微摄影技术 154

胶卷的选择 154

装胶卷 154

调整控制台 154

光源的调节 155

滤色片的使用 155

色温调节 155

屈光度调整 156

取景与对焦 156

拍摄 156

放大倍率的计算 156

注意事项 156

荧光显微摄影 157

显微数码摄影 157

第十四章 流式细胞技术及其在细胞生物学研究中的应用 159

第一节 流式细胞仪发展史 159

第二节 流式细胞仪的构造和工作原理 161

流式细胞术的概念 161

流式细胞仪的构造和工作原理 161

第三节 流式细胞术的应用 171

细胞DNA含量检测 171

细胞表型分析 171

血小板功能分析与血小板病诊断 173

红细胞疾病诊断 173

细胞内蛋白的分析 173

可溶性蛋白的检测 174

分选 174

第四节 流式样品的制备及结果分析 174

流式样品的制备 174

样品制备中应注意的几个问题 176

如何分析流式报告 177

第十五章 原子力显微镜在生物医学中的应用 190

原子力显微镜工作原理介绍 190

原子力显微镜在生物医学中的应用 191

第十六章 激光扫描共聚焦显微镜技术及其应用 199

第一节 激光扫描共聚焦显微镜基本原理 199

第二节 激光扫描共聚焦显微镜的成像模式 200

单一光切片模式 200

时间间隔与活细胞成像模式 200

Z轴系列及三维成像模式 201

四维成像模式 201

X-Z成像模式 201

反射光成像模式 201

透射光成像模式 201

第三节 激光扫描共聚焦显微镜在生物医学中的应用 202

定量荧光测定 202

定量共聚焦图像分析 202

三维重组分析生物结构 202

动态观察生物结构 203

荧光光漂白恢复（FRAP）技术 203

荧光共振能量转移（FRET）技术 204

第四节 激光扫描共聚焦显微镜与荧光显微镜的区别 205

基本构造 205

光源 205

分辨率 205

扫描及检测装置 206

样品要求 206

应用 206

第五节 样品制备过程中应注意的几个问题 206

样品厚度 206

生物结构的保存 206

染色过程 207

提高信噪比 207

抗光漂白能力 207

第十七章 电子显微学简介 209

第一节 性能场发射枪电子显微镜日趋普及和应用 210

场发射枪透射电子显微镜用户数量日益增加 210

出现新一代的场发射枪扫描电子显微镜 210

第二节 发展新一代球差校正器和单色器以提高电镜的分辨率 210

第三节 电镜分析工作的计算机化 211

第四节 电子显微镜的分析精度逼近原子尺度 211

第五节 电子显微镜在纳米材料研究中的应用 211

第六节 低温电镜技术和三维重构技术是当前生物电子显微学的研究热点 212

中英文对照索引 213