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序 1

緒言 4

菌株表 9

第一部份：實驗 15

1.分离有營養缺陷的Tn10插入突變種 16

2.位置於特定基因近旁的Tn10插入因子的分離方法 21

3.Tn10所導致的缺失突變作用 26

4.局部致變作用 30

5.分離與刻畫由羥胺導致的λ點突變噬菌體 34

6.λamp噬菌體缺失突變種的分离 37

7.缺失突變的圖譜 39

8.剎用互補作用篩選λgt—his營養系 42

9.溶菌斑雜合法 47

10.膠體雜合法 51

11.利用電子顯微鏡观察DNA 53

12.λ噬菌體內營養系DNA轉移至質體上的方法 55

13.剎用Tn10引導F’t8lac＋質體插入細菌的染色體中 57

第二部份：程序 61

1.噬菌體溶菌斑的純化 62

Ⅰ 菌株 62

Ⅱ 下劃線法；上劃線法 62

Ⅲ 挑選溶液斑 63

Ⅳ 測定噬菌體的數目 63

2.噬菌體母液的製備 66

Ⅰ 菌株 66

Ⅱ 接種菌體與噬菌體於培養皿上的程序 66

Ⅲ 收集噬菌體 66

3.備P22轉運噬菌體的簡易方法 69

4.噬菌體的純化 71

Ⅰ 利用BeckmanSW50.1廻轉器進行氣化銫階段密度梯度離心實验 71

Ⅱ 使用SW50.1廻轉器進行氣化銫衡定密度梯度離心實驗 72

5.Tn10的移位 75

Ⅰ 制造NK337菌株的有瑕疵轉運噬菌體 75

Ⅱ 添加P22的尾部於其頭部 76

Ⅲ 移位因子的轉運 77

6.由攜帶Tn10的菌株中篩選Tets突變種 80

7.利用紅色培養基測定攜帶β—乳胺酶基因的λ噬菌體 82

8.羥胺的致變作用 84

Ⅰ 噬菌體或者營養系基因突變種的分離 84

Ⅱ 利用噬菌體共同轉運的技術達成局部致變的效果 85

9.λ缺失突變種的篩選 88

10.在活體內進行噬菌體的重組與互補實臉 90

Ⅰ 噬菌體標準的交配法 90

Ⅱ 利用噬菌體的生長能力測定互補作用 91

Ⅲ 利用斑點測驗法測定噬菌體（λ或者P22）突變種的互補作用 91

11.抽取λ噬菌體DNA 96

Ⅰ 甲醯胺法 96

Ⅱ λDNA的快速分離 98

Ⅲ 剎用可由溫度誘發噬菌體的Sam7潛溶菌制造DNA101Ⅳ λDNA的分股 102

12.質體以及細菌DNA的分離 104

Ⅰ 大腸菌質體DNA的大量分離 104

ⅡA 利用菌落或菌液快速地分離質體DNA或者質體及菌體DNA的程序 107

ⅡB 快速分離10m1菌液所含的質體DNA 109

13.排除DNA—CsC1溶液中的EthidiumBromide 111

14.造λgt的雜種 113

Ⅰ DNA的斷裂 113

Ⅱ 利用T4DNA接合酶使DNA共价連接 113

15.λDNA於活體外裝入噬菌體 116

Ⅰ 裝入程序 116

Ⅱ 含有熱誘發噬菌體的菌液的製備 116

16.利用λDNA轉化感染菌體 120

Ⅰ 生長菌體 120

Ⅱ 處理菌體 120

Ⅲ DNA的轉化感染 120

Ⅳ 菌體的貯存 121

17.利用大腸菌質體為媒介製造營養系DNA 123

18.質體DNA的轉化作用 125

19.雜種噬菌體在大腸菌體內的互補作用 127

Ⅰ 利用雜種噬菌體溶裂菌體的現象測定互補作用 127

Ⅱ 利用雜種噬菌體與帮手噬菌體雙重潛溶的現象測定互補作用 128

20.瓊脂糖膠體電泳 132

Ⅰ 瓊脂糖膠體 132

Ⅱ 瓊脂糖膠體中DNA的染色 135

Ⅲ 膠體中核酸的照像法 136

Ⅳ 乙二醛膠體 138

21.轉移DNA於硝化纖維或者重氮化濾紙上的程序 140

Ⅰ 轉移瓊脂糖膠體中的DNA至濾紙上的程序 140

Ⅱ 轉移λ溶菌斑中的DNA至濾紙上的程序 142

Ⅲ 轉移菌落中的DNA至濾紙上的程序 145

22.裂口轉移法製造α—32P—標誌的DNA 147

Ⅰ 作用程序 147

Ⅱ 去氣核糖核苷三磷酸塩 148

Ⅲ 去氧核糖核酸酶 148

Ⅳ 82P併入DNA之程度的測定 148

Ⅴ 輻射性DNA的回收 149

Ⅵ 一般要點 150

23.DNA或RNA在固體上的雜合作用 152

24.固體上32P的自動輻射照像术 155

25.回收瓊脂糖膠體上的DNA 156

Ⅰ 玻璃纖維濾片回收法 156

Ⅱ 碘化鉀衡定密度梯度回收法 158

Ⅲ 利用電泳促成膠體與羥基磷灰石間DNA的轉移 158

26.利用EthidiumBromide迅速估計DNA濃度的方法 160

Ⅰ 瓊脂糖培養皿法 160

Ⅱ 圖環上覆蓋塑膠紙的方法 160

27.製備DNA的電子顯微鏡樣品 161

Ⅰ 水溶液程序 161

Ⅱ 甲醯胺程序 162

28.形成雙股雜合DNA的一般程序 164

Ⅰ 雙股雜合DNA的製造 164

Ⅱ 製備雙股雜合DNA的電子顯微鏡樣品 164

29.λcI857Sam7潛溶的株體內酶類的抽取與純化 166

Ⅰ 一般程序 166

Ⅱ 大腸菌594溶菌液中DNA眾合酶I的純化程序 167

Ⅲ 純化大腸菌E1150溶菌液中的T4DNA接合酶 169

第三部份：附錄 171

1．培養基，药物濃度與補充營養 172

Ⅰ 培養基 172

Ⅱ 药物濃度 177

Ⅲ 補充營養 177

2.營養缺陷突變菌株的鑑定 179

3．細菌，噬菌體與DNA的貯存方法 181

Ⅰ 細菌及噬菌體的貯存 181

Ⅱ 貯存的程序 181

Ⅲ DNA的貯存 182

4.緩衝液以及其他溶液 184

Ⅰ 緩衝液 185

Ⅱ 其他溶液及濃度 186

5．透析膜袋的清洗與處理 188

6．度量衡 189

Ⅰ 微升之量 189

Ⅱ DNA的溶點溫度 190

Ⅲ 离心的速度與時間 191

Ⅳ 單位換算 192

7.利用限制酶修剪DNA 193

Ⅰ 方法 193

Ⅱ 各種限制酶的特性 194

8.λ噬菌體攜帶細菌DNA的能力 197

9.λ噬菌體與pBR322質體的遺传結構圖以及限制酶作用的位置 198

Ⅰ λ遺传結構圖與2媒介噬菌體 198

圖1 λ遺传結構圖 200

圖2 —3限制酶的限制座 201

圖4 λgt1—λBDNA上的EcoRI限制座 203

圖5 λgt4DNA上的EcoRI限制座 204

圖6 λgt5—lac5DNA上的EcoRI限制座 205

圖7 λgt7—ara6DNA上的EcoRI限制座 206

圖8 λ607DNA上的EcoRI限制座 207

圖9 λsep6—lac5DNA上的EcoRI限制座 208

圖10 Charon4DNA上的EcoRI限制座 209

圖11 λ590DNA上的HindⅢ限制座 210

圖12 λ760DNA上的HindⅢ限制座 211

圖13 λgt30—Ec6DNA上的SalI與XhoI限制座 212

圖14 λgt40DNA上的SstI限制座 213

Ⅱ PBR322的遺传結構圖 214

圖15 PBR322的遺传結構圖 215

10.組氨酸操縱基因群的缺失突變圖 216

11．用於主培養皿製備的格子紙规格 217