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目录 1

第一章　仪器方法分析 1

一、层析 1

（一）吸附层析 1

1．根据 1

2．柱层析 2

2．材料 3

3．薄层层析 5

（二）分配层析 12

1．根据 12

2．纸层析 13

（三）离子交换层析 16

1．根据 16

2．操作程序 17

3．离子交换剂及其选择 17

4．交换剂的处理与转型 25

5．离子交换柱层析的操作 26

（四）排阻层析 30

1．根据 30

3．凝胶层析 35

1．根据 42

（五）亲和层析 42

2．载体的选择 43

3．配基的选择及其与载体的联接 43

4．亲和柱层析 44

（六）气相层析 47

1．根据 47

2．气相层析仪器装置 47

3．载气 48

4．层析柱 48

5．担体 49

6．固定液 50

7．样品 50

8．检测系统 51

9．定性分析 51

10．定量分析 52

1．根据 54

2．类型 54

11．制备性气液层析 54

（七）高压液体层析 54

3．高压液体层析仪 55

4．检测器 55

5．常用的担体 55

1．根据 56

2．仪器 56

3．溶剂的选择 56

（八）逆流分溶 56

6．流动相的选择 56

4．溶剂的处理 57

（九）膜及空心纤维分离 57

1．根据 57

2．加速小分子透过膜的方法 57

3．常用的材料 58

4．膜分离 58

5．空心纤维分离 59

二、电泳 60

2．影响迁移率的因素 61

1．迁移率 61

（二）迁移率及其影响因素 61

（一）基本根据 61

3．缓冲液 62

4．支持物 62

（三）一般技术 62

1．装置 62

2．支持物的制备和特性 62

3．操作程序 66

（四）特殊技术 67

1．高压电泳 67

2．连续电泳 68

3．不连续电泳 69

4．免疫电泳 70

5．等电聚焦 70

6．等速电泳 71

（五）电泳的应用 71

三、光谱 72

（一）光谱类型及其应用 73

1．原子光谱 73

2．分子光谱 74

2．仪器装置 75

1．根据 75

（二）可见和紫外分光光度法 75

3．光谱法的用途 75

3．应用 79

（三）荧光光谱分析法 83

1．根据 83

2．仪器 83

3．应用 84

2．仪器种类 86

1．根据 86

（四）红外分光光度法 86

3．应用 88

（五）激光拉曼分光光度法 88

1．根据 88

2．应用 88

（六）火焰分光光度法 88

1．根据 88

2．仪器装置 88

2．检测依据 91

1．基本概念 91

（七）电子自旋共振波谱法 91

3．ESR波谱仪的基本结构 92

4．应用 94

（八）核磁共振波谱仪 95

1．基本概念 95

2．检测依据 95

3．NMR波谱仪的基本结构 97

4．NMR波谱法的应用 98

1．基本概念 99

（九）质谱法 99

3．应用 99

2．检测根据 100

3．质谱仪的基本结构 100

4．质谱法的应用 101

（十）旋光谱和圆二色谱法 101

1．基本概念 102

2．检测的根据 102

3．仪器的基本结构 103

4．应用 104

3．仪器的基本结构 105

2．检测的根据 105

（十一）光散射法 105

1．基本概念 105

4．应用 106

（十二）极谱分析法 106

1．基本概念 106

2．检测的根据 106

3．仪器的基本结构 108

4．应用 109

1．分析的依据 110

2．分析的方法和理论 110

（十三）X-射线衍射结构分析 110

四、超速离心 115

（一）基本依据 115

1．离心力 115

2．沉降系数 117

3．沉降速度 118

4．沉降时间 118

5．沉降系数与物质分子量 119

（二）仪器的基本结构及操作技术 119

1．离心管 119

3．制备性超速离心机 120

2．转头 120

4．分析性超速离心机 122

5．超离心法 122

6．密度梯度制备 123

7．分步收集装置 124

（三）应用 125

1．分子量的测定 126

1．附属部件 128

（二）仪器的基本结构与操作 128

（一）根据 128

五、检压法 128

3．大分子构象变化的检测 128

2．大分子的纯度鉴定 128

2．主要装置 129

3．测定方法 130

（三）应用 133

六、放射性同位素法 133

（一）根据 133

2．负电子 134

1．α粒子 134

（三）射线与物质的相互作用 134

2．比放射性 134

1．居里 134

（二）放射性的单位 134

3．γ射线 135

（四）放射性探测 135

1．射线探测器及其种类 135

2．照相乳胶爆光法 135

3．G-M计数管 136

4．闪烁计数器 137

5．荧光熄灭的校正 141

（四）应用 143

七、电子显微镜法 143

（一）根据 143

（二）电镜的结构及其类型 145

1．电镜的结构 145

2．电镜的类型 145

（三）生物样品的制备 146

1．应考虑的因素 146

2．支持膜的制备 147

3．超薄切片法的操作环节 148

4．异丁烯酸酯包埋法 149

5．冰冻刻蚀法 150

6．琼脂过滤法 150

7．负反差法 151

8．同位素自显影等方法 152

（四）固定液的制备及使用 152

1．四氧化锇固定 152

2．戊二醛固定 152

3．双重固定 152

1．DNA的电镜研究 153

（五）投影 153

（六）应用 153

2．核糖体的电镜研究 155

第二章　生物大分子的分析 157

一、生物大分子的制备 157

（一）制备概述 157

1．制备的意义 157

2．制备的根据 157

3．制备方法的分类 157

5．制备程序 158

4．制备方法的选择 158

6．制备过程中的注意事项 159

（二）选材与预处理 159

1．选材的根据 159

2、选材时的注意事项 160

3．预处理工作 160

（三）细胞器分离 160

1．细胞的破碎 160

2．细胞器的分离 162

1．提取 165

（四）生物大分子的制备 165

2．分离纯化 171

3．浓缩 180

4．结晶 181

5．干燥 184

6．储藏保存 185

7．细菌（枯草杆菌）DNA的分离纯化 185

8．植物（豆胚芽）DNA的分离纯化 188

9．动物（大鼠肝）DNA的分离纯化 190

10．大鼠肝nRNA的分离纯化 193

11．大肠杆菌tRNA的分离纯化 195

12．动物（大鼠肝）rRNA的分离纯化 197

13．哺乳动物细胞中mRNA的分离纯化 198

二、核酸及核苷酸的分析 202

（一）概述 202

（二）核酸含量的分析 203

1．生物材料中核酸含量的测定 203

2．紫外吸收法测定核苷及核苷酸含量 206

3．改良苔黑酚法测定RNA的含量 219

4．改良二苯胺法测定DNA的含量 221

5．定磷法测定核酸含量 223

（三）核酸的水解及其组成分析 225

1．核酸的水解 225

2．酵母RNA的组成成分鉴定 226

3．核酸碱基组成的纸层析分析 227

4．核苷酸的簿层层析分析 229

5．核苷酸的醋酸纤维素簿膜电泳分析 231

6．核苷酸的高压纸上电泳分析 233

7．核苷酸的过碘酸氧化法定量分析 235

8．核苷酸的离子交换柱层析分离分析 237

1．RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳 241

（四）核酸大分子的分离分析 241

2．DNA的琼脂糖凝胶电泳 243

3．噬菌体λDNA的酶解片段分离分析 246

5．细胞核及染色质的分离分析 260

6．细胞核DNA生物活性分析 264

7．RNA的蔗糖密度梯度离心 266

4．质粒DNA的分离纯化及分析 268

8．DNA氯化铯密度梯度离心 268

1．氨基酸共有的显色分析法 271

三、蛋白质及氨基酸的分析 271

（一）氨基酸的定性分析 271

2．特殊氨基酸的分析法 272

（二）氨基酸的定量分析 288

1．氨基酸通用的定量分析法 288

2．特殊氨基酸的定量分析 298

（三）蛋白质的定性分析 321

1．蛋白质共有的显色分析法 321

2．复合蛋白质的显色反应 322

1．蛋白质总氮量的测定——凯氏定氮法 323

（四）蛋白质的定量分析 323

2．蛋白质溶液浓度测定法 325

（五）蛋白质纯度分析 328

1．聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳法 328

2．醋酸纤维素簿膜电泳法 331

3．等电聚焦电泳法 333

（六）蛋白质分子量测定法 335

1．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 335

2．凝胶柱层析法 339

3．凝胶薄层层析法 341

4．聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法 347

（七）蛋白质末端分析 351

1．蛋白质NH2末端氨基酸分析 351

2．蛋白质COOH-末端氨基酸分析 373

（八）血清蛋白质的测定 376

1．血清总蛋白 白蛋白及球蛋白的测定 376

2．血清丙种球蛋白测定 379

3．血清粘蛋白测定 380

4．血清蛋白质的纸电泳分析 382

四、酶的活性测定 384

（一）概述 384

1．酶活性测定的重要意义 385

2．酶活性的定义 386

3．酶的分类 386

4．酶活力测定的常用仪器 388

（二）几种重要酶的活力测定 388

1．胰蛋白酶活力测定 388

2．限制性内切酶EcoRI的活力测定 389

3．酰化酶的活力测定 391

4．辣根过氧化物酶活力测定 392

5．过氧化氢酶活力测定 395

6．超氧化物歧化酶的活性测定 396

7．双磷酸核酮糖羧化酶活力测定 398

（三）临床诊断用酶测定技术 400

1．临床诊断常用酶 400

2．谷丙转氨酶活力测定 400

3．乳酸脱氢酶活力测定 402

4．血清精氨酸酶测定 403

5．血清肌酸磷酸激酶测定 406

6．血清淀粉酶活力测定 409

7．血清胆碱酯酶活力测定 411

8．血清醛缩酶活力测定 415

9．碱性磷酸脂酶活力测定 419

10．临床诊断用酶试剂 423

（四）工业酶活性测定 428

1．工业上常用酶 428

2．蛋白酶活力测定 428

3．胰蛋白酶活力测定（药用） 430

4．胃蛋白酶活力测定（药用） 430

5．糖化型淀粉酶活力测定 431

6．液化型淀粉酶活力测定 433

7．葡萄糖异构酶活力测定 434

8．纤维素酶活力测定 437

9．果胶酶活力测定 439

10．黄嘌呤氧化酶活力测定 440

11．磷酸二酯酶活力测定 441

12．尿素酶（尿酶）活力测定 442

13．木瓜蛋白酶活力测定 444

（五）同工酶的测定 445

1．同工酶及测定同工酶的意义 445

2．39种不同酶的同工酶检测技术 445

3．几种重要酶的同工酶测定 464