实用免疫学方法PDF电子书下载

1.2.2可溶性抗原 1

1.2.2d兔丙种球蛋白（RγG）及人血清白蛋白（HSA） 1

1.2.2c小鼠丙种球蛋白 1

1.2.2b钥孔？血兰蛋白素（KLH） 1

1.2.2a鸡丙种球蛋白（FγG）制备 1

目录 1

1.2.1红细胞 1

1.2抗原 1

1.1实用免疫学简介 1

1、实验材料的制备 1

1.2.3蛋白质的快速“透析”（脱盐） 2

1.3半抗原—载体结合物 3

1.3.1二硝基苯酚（DNP）—FγG或KLH 3

1.3.2对氨基苯人血清白蛋白 4

1.4抗血清 5

1.4.1Freund完全佐剂 5

1.4.2兔抗小鼠γ球蛋白 5

1.4.3介面环状试验 5

1.4.4明矾沉淀抗原 5

1.6荧光色素标记抗血清的制备 6

1.5已接触半抗原—载体的小鼠 6

1.6.1标记技术 6

1.4.7山羊或绵羊抗兔γ球蛋白 6

1.4.6兔抗人全血清及血清白蛋白 6

1.4.5兔抗鸡丙种球蛋白 6

1.6.2荧光色素：蛋白质的比值的计算 7

1.6.3荧光色素标记抗血清的分段 7

1.6.4间接和直接免疫荧光 7

1.6.5荧光素标记抗血清的标化 8

1.6.6免疫荧光染色的特异性 10

1.7细胞基本技术 10

1.1.1由血液制备淋巴细胞 10

1.7.2血液脱纤维 10

1.7.3由固体淋巴器官制备淋巴细胞 10

1.7.4吞噬细胞的去除 10

1.7.5腹腔渗出液巨噬细胞 11

1.8动物 12

1.8.1家兔 12

1.8.2小鼠 12

1.8.3小鼠的X线辐射 12

2、淋巴细胞的作用与功能 13

2.1淋巴细胞 13

2.2小鼠的淋巴细胞 13

2.3不同来源淋巴细胞的分离 14

2.3.1从血液分离淋巴细胞 14

2.3.2从淋巴器官制取淋巴细胞 16

2.3.3胸腺与血液白细胞的形态 16

2.3.3a血片 16

2.4活细胞计数 17

2.3.4Way—Grunwald/Giemsa染色法 17

2.3.3b细胞悬液片 17

2.4.1染料排斥试验 18

2.4.2用血球计数计数细胞 19

2.5淋巴细胞的表面膜 19

2.5.1淋巴细胞膜免疫荧光染色 19

2.6结合抗原的淋巴细胞 22

2.6.1绵羊红血球玫瑰花 22

2.7T与B淋巴细胞受体 23

2.7.1受体的范围 23

2.7.1a抗原受体 23

2.7.1bFc与补体受体（结合部位） 23

2.7.2关于T与B淋巴细胞上是否存在免疫球蛋白的问题 23

2.7.3淋巴细胞上Fc受体的检查 24

2.8淋巴细胞表面膜的动力 25

2.8.1淋巴细胞受体的帽状现象 25

2.8.2利用“戴帽”淋巴细胞的实验 26

2.8.3表面受体的重新合成 30

2.9细胞各成份的不同动态 30

2.10摘要和结论 30

3、淋巴细胞及其效应细胞 30

3.1B—效应细胞 30

3.1.1桨细胞与抗体产生（抗FγG） 30

3.1.1a冰冻切片 30

3.1.1e抗原结合 31

3.1.1d染色技术 31

3.1.1c切片或涂片染色以观察产生抗体的细胞 31

3.1.1b游离的细胞 31

3.1.2体外计数分泌抗体的细胞 32

3.1.3体内抗体效应 35

3.2T—效应细胞 36

3.2.1肉垂试验 36

3.2.2对移植物的排斥作用 37

3.2.2a对植皮的排斥 37

3.2.2b免疫学性质 37

3.2.3移植物对宿主的排斥反应 38

3.3摘要和结论 40

4.1.1网状内皮系统的颗粒清除 41

4.1.2数据处理 41

4.1自然免疫性 41

4、体内的细胞动力学 41

4.1.2a算术平均数 42

4.1.2b标准差 43

4.1.2c附注 43

4.1.3被吞噬物质的结局 44

4.1.4RE系统封闭 44

4.2T—B的协同作用 45

4.3耐受性 46

4.3.1耐受性及选择性无应答性 46

4.5超敏状态 47

4.4自身免疫性 47

4.5.1过敏反应性超敏 48

4.5.1a体内过敏反应 48

4.5.1b体外过敏反应 48

4.5.2细胞毒性超敏 49

？免疫复合物性超敏 49

？摘要和结论 49

5、抗体与抗原的相互作用 50

5.1抗体特导性 50

5.2一级结合反应 50

5.2.2a抗原的放射性同位素标记 51

5.2.2改良硫酸铵沉淀技术 51

5.2.1硫酸铵沉淀反应 51

5.2.2b测定 52

5.2.3抗体亲合力的测定 53

5.2.4平衡透析 56

5.3二级相互作用—沉淀反应 57

5.3.1定量沉淀素试验 57

5.3.2抗体特异性的证实 59

5.3.3琼脂沉淀反应 60

5.3.3a单向散射免疫扩散 61

5.3.3b双向扩散试验 63

5.3.3d分子量及扩散系数的测定 65

5.3.4免疫电泳分析 65

5.3.3c相对抗原浓度 65

5.3.4a琼脂凝胶电泳 66

5.3.4b免疫电泳 69

5.3.4c交叉电泳（对流电泳） 69

5.3.4d含抗体基质中的电泳（火箭电泳） 69

5.4二级相互作用—凝集反应 71

5.4.1血球凝集试验 72

5.4.1a一级或二级抗体应答 73

5.4.1b重复接种抗原后抗体滴度的改变 73

5.4.2抗原致敏红血球的凝集试验 74

5.4.2a鞣酸处理的绵羊红血球 74

5.4.2b检定方法 74

5.4.5血型鉴定 75

5.4.3用于类风湿因子测定的乳胶凝集试验 75

5.4.4妊娠试验 75

5.4.6Rh不相容性 76

5.5摘要和结论 76

6、抗体效应系统 77

6.1补体 77

6.1.1溶血性补体的总量 77

6.1.2红细胞的标化 77

6.1.3补体CH50的测定 78

6.2补体结合的正路与旁路 78

6.2.5双相免疫扩散 79

6.2.4C3活化的分析 79

6.2.3测定C3的单向免疫扩散 79

6.2.2抗C3血清 79

6.2.1C3的测定 79

6.3用补体结合试验检查抗体或抗原 80

6.3.1定量补体结合试验 80

6.3.2补体结合试验的应用 83

6.3.2a检查梅毒的Wassermann反应 83

6.3.2b甲状腺微粒体的自身抗体 83

6.3.2c病毒抗体的检查 83

6.4利用抗C3免疫荧光抗体检查抗原抗体复合物 83

6.5吞噬细胞的调理素粘附作用和免疫粘附作用 83

6.5.1人和小鼠的嗜细胞性抗体 84

6.6摘要和结论 86

7免疫球蛋白的分离和结构 87

7.1盐析 87

7.1.1关于免疫球蛋白的粗提纯 87

7.1.2轻链的快速浓缩 87

7.1.3蛋白质浓度对于盐析作用的影响 88

7.2粒析（sizefractionation） 88

7.2.1分子筛原理 88

7.2.2凝胶的基本要求和类型 89

7.2.3溶质的分配系数（KD） 89

7.2.4凝胶层析的应用 90

7.2.6在SephadexG-200上进行血清蛋白的分组 91

7.2.5柱层析装置 91

7.2.7超速离心 93

7.3离子交换层析 93

7.3.1用DEAE—纤维素进行兔IgG的分批（batch）制备 93

7.3.2IgG制品的检定 94

7.3.3在DEAE—纤维素柱上通过离子强度梯度洗脱法制备IgG 94

7.3.4从脐带血中提制IgG 97

7.3.5从初乳中提制IgA 97

7.3.6从血清中提制IgM 97

7.4制备电泳 98

7.4.1Pevikon板块电泳 98

7.3.8QAE—Sephadex柱层析 98

7.3.7从血清中提制IgE 98

7.4.2蛋白质区带的洗脱 99

7.4.3蛋白质含量测定 99

7.5等电聚焦 99

7.5.1pH梯度 100

7.5.2分析等电聚焦 100

7.5.3制备等电聚焦 103

7.6免疫球蛋白分子的结构 103

7.6.1IgG还原至重链和轻链 103

7.6.2轻链及重链决定簇（基）的检测 105

7.7用蛋白酶裂解IgG 105

7.7.1木瓜酶消化 105

7.7.2胃酶消化 107

7.8.1免疫球蛋白的分离 108

7.8摘要和结论 108

7.8.2IgG的结构 109

7.8.3IgM的结构 109

7.8.4IgA的结构 110

8、纯化抗体和纯化细胞 111

8.1纯化抗体 111

8.1.1免疫吸附剂的制备 111

8.1.2用免疫吸附剂纯化抗体 112

8.1.3免疫吸附剂回收洗脱物的计算 114

8.2.1排空B细胞以制备T细胞 115

8.2纯化细胞 115

8.1.5免疫吸附剂的实际应用 115

8.1.4关于纯化抗体的试验 115

8.2.2抗原特异性细胞的排空和增集 116

8.2.3抗原免疫吸附剂的制备 117

8.2.4排空及增集细胞群中抗原反应性 117

9、异常免疫球蛋白的检测技术 119

9.1血清蛋白电泳 119

9.2密度计分析 121

9.3免疫电泳 122

9.4免疫球蛋白的定量 125

9.5在SephadexG—200上进行凝胶层析 128

9.5.1凝胶柱制备 128

9.6血清粘度测定 129

9.5.3薄层凝胶层析 129

9.5.2分离手续 129

9.7尿Bence—Jones蛋白的分析 130

9.7.1尿的浓缩 131

9.7.2区带电泳 131

9.7.3免疫电泳 131

9.8冷球蛋白（cryoglobulin）的检测 131

10、其它免疫化学方法 133

10.1定量免疫吸附 133

10.1.1原理 134

10.1.2抗球蛋白的分析 134

10.2亲和力测定 135

10.3.1测定的原理 136

10.3放射免疫测定 136

10.3.2操作方法 137

10.4酶联吸附免疫测定 137

10.4.1基本原理 138

10.4.2酶标记方法 139

10.4.3试验方法 141

10.4.4ELISA的应用 143

11、细胞免疫学的高级技术 144

11.1T—B对半抗原—载体结合物的协同作用 144

11.1.1DNP空斑形成细胞的检定 144

11.1.2红细胞的三硝基苯基化 145

11.1.3DNPFab′抗绵羊红细胞（SRBC）的致敏 145

11.1.3a指示细胞的致敏 146

11.1.3b检测小室的制备 147

11.1.4抗—DNP检定 147

11.2半抗原—载体对异种载体的协同作用 148

11.3淋巴细胞循环 149

11.3.1个体发生的游走型式 149

11.3.2淋巴细胞的“定居” 149

11.3.3细胞的器官内分布 151

11.4免疫系统的处理 151

11.4.1用X射线抑制免疫应答 151

11.4.2放射抵抗性 152

11.5.1外科去腔上囊术 153

11.5淋巴系统的外科和化学处理法 153

11.5.2外科胸腺切除术 154

11.5.2a新生小鼠的胸腺切除 154

11.5.2b新生小鸡的胸腺切除 154

11.5.2c成年的腔上囊切除术及胸腺切除术 155

11.6免疫重建小鼠 155

11.7小鼠胸导管造管术 155

11.8细胞特异性抗原及抗血清 157

11.8.1抗淋巴血清 157

11.8.2ALS体内的作用方式 157

11.8.3体内免疫粘连 158

11.8.4抗T或抗B异种抗血清 158

11.8.6抗小鼠脑 159

11.8.5对淋巴细胞膜同种异体抗原的抗血清 159

11.8.7同种异体血清间接免疫荧光 160

11.9补体介导的细胞溶解 161

11.9.1染料排除试验 161

11.9.251Cr标记的细胞溶解 163

11.10淋巴细胞的标记放射自显影术 164

11.11离体T淋巴细胞 166

11.11.1致有丝分裂应答 166

11.11.2全血技术 168

11.11.3淋巴母细胞转化的形态学测定 168

11.11.5培养技术 169

11.11.6细胞介导的细胞毒性 169

11.11.4混合淋巴细胞反应 169

11.11.7混合淋巴细胞反应（MLR）与细胞介导的细胞溶解（CMC） 170

11.11.8用PHA母细胞进行CMC 171

11.12淋巴细胞产生的可溶性因子 172

11.12.1巨噬细胞游走抑制试验 172

11.13抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCMC） 173

12、免疫学动物实验操作方法 175

12.1注射 175

12.1.1注射前的准备 175

12.1.2皮内注射 175

12.1.2.1小白鼠 175

12.1.2.2豚鼠与大动物 175

12.1.4.1家禽 176

12.1.4肌肉注射 176

12.1.3.1小白鼠 176

12.1.3皮下注射 176

12.1.3.2其它动物 176

12.1.4.2其它动物 177

12.1.5小白鼠腹腔注射 177

12.1.6静脉注射 177

12.1.6.1小白鼠 177

12.1.6.2大白鼠 178

12.1.6.3豚鼠 178

12.1.6.4家兔 178

12.1.7.1小白鼠 179

12.1.8豚鼠角膜注射 179

12.1.7.2豚鼠 179

12.1.7脚掌注射 179

12.1.6.6家禽 179

12.1.6.5其它动物 179

12.1.9家禽肉垂注射 180

12.2移植 180

12.2.1小白鼠尾皮移植 180

12.2.2家禽肉垂移植 181

12.2.3小白鼠肾脂囊下移植 181

12.3血液采集 183

12.3.1小白鼠（由眼后静脉丛取血） 183

12.3.4家兔 184

12.3.3豚鼠 184

12.3.2.2心脏采血 184

12.3.2.1眼后静脉丛取血 184

12.3.2大白鼠 184

12.3.5家禽 186

12.3.5.1翅静脉采血 186

12.3.5.2小量或连续取血 186

12.3.6其它动物 186

12.4胸腺切除 186

12.4.1啮齿类 186

12.4.1.1成鼠的胸腺除去 186

12.4.1.2乳鼠的胸腺除去 188

12.4.2日龄雏鸡的胸腺除去 188

12.5.1卵内腔上囊摘除 190

12.5腔上囊摘除 190

12.5.2日龄雏鸡腔上囊摘除 192

12.6麻醉注意事项 193

12.6.1乙醚 193

12.6.2氯仿 193

12.6.3三氯乙烯 193

12.6.4氟烷 194

12.6.5二氧化碳与氧气 194

12.6.6二氧化碳 194

12.6.7戊巴比妥钠 194

12.6.8安眠酮 194

12.6.9一般注意事项 194

13.1概率 195

13、免疫学统计常用方法 195

13.2平均数 196

13.2.1算术平均数 196

13.2.2中位数 199

13.2.3几何平均数 201

13.3离势量数或称变异量数 203

13.3.1全距 203

13.3.2均差 204

13.3.3方差 204

13.3.4标准差 204

13.3.5标准差的应用 206

13.3.6标准误 206

13.3.7置信限 207

13.3.8标准差和标准误的计算方法 208

13.3.8.1用样本均数估计总体均数 208

13.3.8.2用样本百分率估计总体百分率 213

13.4t测验 217

13.4.1两个平均数差别的显著性测验 217

13.4.1.1样本平均数和总体平均数的比较 217

13.4.1.2两个样本均数的比较 222

13.4.2两个百分比（率）差别的显著性测定 226

13.4.2.1样本百分比（率）和总体百分比（率）的比较 226

13.4.2.2两个样本百分比（率）的比较 228

13.5F测验 230

13.5.1方差分析法概要 231

13.5.2完全随机设计资料的方差分析计算法（单因素方差分析） 234

13.5.2.1各组实验对象的变量个数相等时的方差分析法 234

13.5.2.2各组实验对象的变量个数不相等时的方差分析法 236

13.5.3随机区组设计资料的方差计算法（两因素方差分析） 237

13.5.4各组均数之间的相互比较 240

13.5.4.1各组实验对象的变量个数相等的比较 241

13.5.4.2各组实验对象的变量个数不相等的比较 242

13.6相关与回归 245

13.6.1直线相关 246

13.6.2直线回归 247

13.6.3相关系数及相关系数的显著性测验 248

13.6.4回归方程的计算方法 250

13.6.5回归系数的显著性测验 251

13.7x2测验 256

13.7.1有两种反应的单组实验——1×2表法 256

13.7.2有两种以上反应的单组实验——1×n表法 257

13.7.3两组实验和两种反应——2×2表法 257

13.7.4两组以上实验和两种以上的反应——n1×n2表法 262

附录 271

Ⅰ、缓冲液和培养基 271

Ⅱ、常用的免疫化学数据表 275

Ⅲ、相对离心力计算图 277

Ⅳ、硫酸铵饱和度计算图 278

Ⅴ、生物制品（抗原和抗体）的国际标准和参考制品 278