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理论部分 1

第二章 细胞的分化 1

一、细胞分化的概念 1

二、细胞分化的特征 2

(一) 遗传性 2

(二) 繁殖性 3

(三) 组织特异性 3

(四) 反分化 3

(五) 组织功能特异化 4

(六) 分化与适应的比较 4

三、影响细胞分化的环境因素 4

(二) 神经生长因子 7

(一) 纤维母细胞生长因子 7

(三) 上皮细胞生长因子 8

(四) 血小板来源的生长因子 9

四、细咆分化的分子机制 10

(一) 分化细胞核的全能性 11

(二) 动物器官的再生 11

(三) 细胞核移植实验 12

(四) DNA与RNA杂交实验 12

五、细胞分化中基因表达的调控 13

(一) 以基因表达为基础的细胞分化假说 13

(二) 细胞分化中基因调控的实例 15

(三) 正常分化的范例 19

(一) 基因的丢失 27

(二) 基因的修饰 27

一、基因结构的调控 27

第二章 真核细胞基因的调控 27

(三) 基因的扩增和重排 28

二、转录水平的调控 28

(一) 启动子 29

(二) 增强子 30

(三) 转录的起始 31

(四) 转录的终止 32

三、转录后水平的调控 33

(一) 戴帽和甲基化 33

(二) PolyA尾巴的添加 34

(三) RNA的剪接 35

(四) 核和细胞浆间RNA的运输 37

四、翻译水平的调控 38

(五) mRNA在细胞浆内的稳定性 38

(一) 翻译的起始调节 39

(二) mRNA翻译的特异性 40

(三) 翻译的起始因子 41

五、翻译后水平的调控 42

第三章 甾体激素对基因表达的调节 45

一、甾体激素对靶细胞的作用 45

(一) 甾体激素的血浆结合蛋白 47

(二) 甾体激素进入细胞 48

(三) 甾体激素与受体间的作用 49

二、甾体激素对某些特异基因表达的调控 53

(一) 雌激素对基因表达的作用 53

(二) 糖皮质激素对基因表达的调控 56

三、甾体激素—受体复合物与DNA之间的作用模型 59

一、癌是基因疾病 64

(一) 基因突变 64

第四章 癌细胞基因表达的改变 64

(二) 基因调控异常 65

二、分化与反分化 65

三、癌细胞的再分化 66

四、癌细胞基因调控异常的分子机制 70

(一) 癌变过程中基因转录的改变 71

(二) 癌细胞基因转录后调控的改变 73

(三) 癌细胞的翻译凋控 74

五、基因表达的调控与癌变原理 75

第五章 肿瘤基因襄型改变的例证 81

一、肿瘤酶与同工酶活性变化的特点 81

(一) 酶与代谢的不平衡 81

(二) 胚胎型酶与同工酶的基因表达 86

(三) 异位性同工酶的基因表达 92

(四) 肿瘤组织特异酶 93

(五) 肿瘤细胞膜上的酶及蛋白质的改变 93

二、肿瘤酶与同工酶变化的机制 94

(一) 抑制物或激活物的产生 95

(二) 酶的合成与降解 95

(三) 转录水平的凋控 96

(四) 翻译水平的凋控 97

(五) 基因扩增调节 97

三、肿瘤酶与同工酶的临床应用 98

四、肿瘤胚胎抗原的基因表达和临床应用 99

(一) 甲胎蛋白 99

(二) 癌胚抗原 101

第六章 癌基因 103

一、肿瘤病毒及癌基因 103

(一) src基因家族 106

(二) ras基因家族 107

(三) myc基因家族 107

(四) myb基因家族 108

(五) sis基因 109

(六) B1ym、fos，ski基因 109

二、细胞癌基因 109

三、细胞癌基因的致癌作用 112

(一) DNA转化实验 113

(二) 人类癌基因的鉴定 113

四、原癌基因活化的机制 119

(一) 肿瘤病毒插入细胞基因 119

(二) 基因突变 121

(三) 基因的易位 121

(四) 基因扩增 122

五、癌基因产物的功能以及对基因麦型的影响 123

(一) 与酪氨酸蛋白激酶有关的转化蛋白 124

(二) P21 125

(三) myc基因的表达及其调控 126

第七章 染色质的组成成分 129

一、脱氧核糖核酸 129

(一) DNA的高级结构 130

(二) DNA顺序的类别 130

(三) 真核细胞的基因组 132

二、染色质蛋白质 133

(一) 组蛋白 134

(二) 非组蛋白 142

(三) 磷酸化非组蛋白 147

(四) HMG非组蛋白 152

(一) 核小体的结构概况 160

第八章 染色质的结构与功能 160

一、染色质的基本结构单位——核小体 160

(二) 核小体的DNA长度 161

(三) 核心颗粒的形状 163

(四) 核心颗粒中蛆蛋白的排列 164

(五) 组蛋白H_1的位置 164

二、染色质的二级结构——螺旋筒 166

三、染色质的三级结构——套圈的形成 168

四、组蛋白修饰对染色质结构的影响 171

五、常染色质与异染色质 172

六、染色质的转录活性 173

(一) 核酸酶消化 173

(二) 染色质DNase I超敏感区 176

(三) 活性染色质的组蛋白及其修饰 178

(四) 活性染色质非组蛋白 179

(五) 活性染色质与基因的甲基化 183

(六) 转录活性染色质的分级分离 184

七、活性染色质的体外转录 186

第九章 癌细胞核的异常 191

一、癌细胞核的形态异常 191

二、癌细胞的染色体 192

三、癌细胞的特异核蛋白 194

四、细胞癌变过程中核非组蛋白的变化 196

五、癌细胞核非组蛋白磷酸化及DNA转录的变化 199

六、致癌物导致细胞染色质结构的改变 200

(一) DNA的修饰与核小体结构的改变 200

(二) 染色质结构的变化 201

一、染色质组分的组织和种属特异性 205

第十章 肿瘤特异染色质组分及染色质结构的免疫学研究 205

二、分化组织中的特异抗原 206

三、肿瘤特异核抗原 207

四、化学致癌过程中肿瘤特异核抗原的出现 209

五、直肠肿瘤特异核抗原的某些特征 210

六、测定核抗原的免疫学方法 211

(一) 微量补体结合试验 211

(二) 放射免疫测定 211

(三) 酶联免疫测定(Elisa) 211

(四) 免疫学定位 212

(五) 特异抗体的制备 212

一、DNA分子克隆 214

(一) 分子克隆必需的酶 214

第十二章 分子及细胞生物学新技术在肿瘤研究中的应用 214

(二) 载体 218

(三) 宿主 222

(四) 基因库的建造 223

(五) cDNA库的建造 224

(六) 含有特异基因质粒克隆的筛选 226

(七) 应用 227

二、细胞融合 232

(一) 细胞杂交和再造 232

(二) 杂交细胞的筛选 234

(三) 杂交细胞中基因表达的模式 235

(四) 应用 235

三、杂交细胞瘤——单克隆抗体的制备和应用 236

(一) 单克隆抗体的制备 236

(二) 单克隆抗体的特性 238

(三) 应用 240

实验部分 241

第一章 体外转录与翻译的测定 241

实验一 体外转录 241

(一) 细胞核的分离 243

(二) 体外RNA的合成(转录作用) 244

(三) 特异RNA的杂交法测定 250

实验二 特异信息核糖核酸的研究方法 251

(一) 游离型多聚核糖核蛋白体的分离 251

(二) 多聚核糖核蛋白体的免疫沉淀 252

(三) 几种提取RNA的方法 254

(四) 寡胸腺嘧啶纤维素层析柱纯化信息RNA 258

(五) 信息RNA的分部分离 259

实验三 体外mRNA的翻译 262

(六) mRNA的鉴定 262

(一) 麦胚无细胞蛋白质合成系统 264

(二) 兔网织红细胞裂解液系统 267

(三) 翻译反应中特定产物的鉴定 269

实验四 DNA和RNA的体外放射性同位素标记 271

(一) 双链DNA的缺口翻译标记法 272

(二) 互补于RNA的放射性单链DNA(cDNA)的合成 273

(三) ~(32)P末端标记的单链DNA的制备 275

(四) DNA或RNA的放射性碘标记 276

(五) 从克隆DNA中制备单链~(32)P标记的互补DNA 277

实验五 核酸杂交反应 279

(一) 放射性探针的制备 280

(二) ~(32)P或~3H标记的cDNA与RNA的液相杂交 280

(三) 固相化cDNA/RNA杂交反应——斑点印迹法 282

(四) 细胞浆的斑点印迹杂交法 285

(五) DNA—DNA的再聚反应 286

第二章 基因工程 289

实验六 分子克隆 289

(一) 以限制性内切酶切割DNA片段 289

(二) 以T_4DNA连接酶连接DNA片段 291

(三) S1核酸酶裂解DNA单链末端及切开双链DNA发夹圈 293

(四) DNA末端加上核苷酸同聚物 294

(五) cDNA的合成及克隆 297

(六) 重组DNA转化大肠杆菌 310

实验七 DNA序列测定 329

(一) Maxam—Gilberr法 334

(二) Sanger链终止法 343

(一) 肿瘤染色质抗原的提取及分部分离 352

实验八 肿瘤抗原的免疫 352

第三章 免疫鉴定 352

(二) 染色质抗体的制备 356

(三) 常规免疫法 357

(四) IgG的纯化 358

(五) 杂交细胞瘤制备单克隆抗体 361

实验九 肿瘤特异抗原的免疫学测定 365

(一) 补体结合试验 365

(二) 琼脂双扩散试验 368

(三) 火箭电泳 369

(四) 放射免疫测定 369

(五) 荧光及酶标抗体的制备 371

(六) 核抗原的微量酶联免疫测定法(Elisa) 376

(七) 免疫酶标定位 377

(八) 免疫印迹定位技术 378