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第一章 绪论 贲长恩 1

第一节 组织化学发展的基础 1

（一）细胞生物学与组织化学 1

（二）生物化学与组织化学 3

（三）分子生物学与组织化学 3

第二节 组织化学发展简史 4

（一）组织化学的兴起 4

（二）组织化学的发展 5

（三）组织化学的分支 6

（四）近代组织化学的进展 6

（五）我国组织化学发展概况 7

（一）组织化学方法的种类 10

第三节 组织化学技术的基本要求 10

（二）组织化学技术要求 11

第二章 组织化学基本理论 贲长恩 13

第一节 组织化学的特征 14

（一）组织化学的要求 14

（二）研究方法 15

第二节 组织化学反应的基本条件 18

第三节 组织化学的基本原理 19

一、蛋白质与氨基酸 19

（一）米伦反应 20

（二）二硝基氟苯法 20

（三）四氯化联（二）茴香胺法 20

（四）二羟基-二萘基-二硫化物法 21

（二）甲基绿法 22

（一）Feulgen反应 22

（五）铁氰化铁法 22

二、核酸与核蛋白 22

（三）甲基绿-派洛宁法 23

三、碳水化合物 23

（一）碳水化合物分类 24

（二）PAS反应原理 25

四、脂类（脂质） 26

五、无机成分 27

六、酶组织化学基本原理 28

七、同工酶组织化学基本原理 29

八、某些生物活性物质的组织化学 29

九、凝集素组织化学基本原理 30

十一、免疫组织化学基本原理 31

十、荧光组织化学基本原理 31

十二、定量组织化学基本原理 32

十三、原位杂交组织化学基本原理 32

十四、放射自显影术的基本原理 33

第三章 组织化学的基本技术 王彦 36

第一节 样品的取材 37

一、取材的原则和要求 37

二、取材的样品规格 37

第二节 组织样品的固定 38

一、主要固定剂和常用固定液 38

（二）浸透固定方法 44

（三）灌流固定方法 44

二、固定方法 44

（一）原位固定方法 44

（四）培养细胞和外周血细胞固定方法 45

三、固定液的选择 46

四、微波固定方法 47

五、固定后的处理——漂洗 48

第三节 切片制备 48

一、冰冻切片机切片 49

二、半导体制冷切片机切片 49

三、恒冷箱切片机切片 50

四、显示酶组织化学的石蜡切片法 51

五、显示电镜酶组织化学的切片法 51

第四节 孵育反应 52

三、孵育的方法 53

一、配制孵育液的要求 53

二、孵育的温度和时间 53

四、孵育时的对照切片 54

（一）用去除底物的孵育液进行反应 54

（二）用特异性抑制剂 54

（三）阳性对照 54

五、影响孵育的因素 54

六、孵育后的切片处理 55

七、切片的封固及封固剂 56

八、酶反应产物异常 57

第五节 透射电镜组织化学技术 57

第六节 电镜免疫组织化学技术 65

第七节 扫描电镜免疫组织化学技术 72

第八节 电镜冷冻蚀刻复型技术 75

第九节 电镜负染色技术 80

第四章 蛋白质和氨基酸 王士平 84

一、单纯蛋白质 84

二、结合蛋白质 85

第一节 显示氨基的方法 86

一、茚三酮-希夫反应 86

二、二硝基氟苯法 87

三、汞-溴酚蓝法 89

第二节 显示羧基的方法 90

一、羧基萘甲酸肼化物重氮蓝-B反应 90

第三节 显示酪氨酸的方法 92

一、米伦反应之一 92

三、米伦反应之三 93

二、米伦反应之二 93

四、四唑盐反应 94

五、重氮化偶联反应 95

第四节 显示半胱氨酸和胱氨酸的方法 96

一、铁氰化铁染色示-SH 97

二、汞橙反应示-SH 97

三、碱性四唑盐反应示-SH 99

四、碱性四唑盐示-SH和S-S键 99

五、DDD重氮蓝-B反应示-SH和S-S键 100

六、过甲酸-阿尔新蓝反应示S-S键 102

第五节 显示精氨酸的方法 103

一、坂口反应之一 103

二、坂口反应之二 104

三、坂口反应之三 105

一、DMAB-S酸反应 106

第六节 显示色氨酸的方法 106

二、四唑盐反应 107

第七节 显示组氨酸的方法 107

一、重氮磺胺酸-天青A法 107

二、四唑盐反应 108

第八节 蛋白质的酶消化反应 108

一、胃蛋白酶的消化反应 108

二、胰蛋白酶的消化反应 109

三、糜蛋白酶的消化反应 110

四、胶原酶的消化反应 110

五、弹性蛋白酶的消化反应 110

二、二硝基苯基化作用 111

一、脱氨基作用 111

第九节 蛋白质氨基酸残基的封闭反应 111

三、甲基化作用 112

四、脱甲基作用 112

五、氧化作用 113

六、碘氧化作用 113

七、硫醇盐封闭法 114

八、苯甲酰化作用 114

第五章 核酸与核蛋白 王士平 116

第一节 RNA和DNA的化学结构 117

第二节 显示DNA的方法 117

一、Feulgen反应 117

二、HNAH-Feulgen反应 120

三、TCA-Feulgen-固绿法 122

第三节 显示RNA的方法 123

四、Schiff试剂块染法 123

第四节 对比显示DNA和RNA的方法 125

一、甲基绿-派络宁反应（Elias法） 125

二、甲基绿-派络宁反应（Kurnick法） 126

三、甲基绿-派络宁反应（张作干法） 127

四、棓花青-铬明矾反应 128

五、吖啶橙反应 129

六、Feulgen-亚甲基蓝反应 130

七、Turchini反应 131

第五节 核酸的提取 132

一、DNA的提取 133

二、RNA的提取 133

一、脱氧核糖核酸酶的消化反应 134

第六节 核酸的消化反应 134

三、DNA和RNA的同时提取 134

二、核糖核酸酶的消化反应 135

第七节 显示核蛋白的方法 135

一、碱性固绿反应 136

二、肝素-阿尔新蓝反应 137

第六章 碳水化合物 石嵩山 139

第一节 碳水化合物的化学 139

一、单糖 139

二、寡糖和多糖 143

三、糖蛋白和蛋白聚糖 145

第二节 碳水化合物的组织化学命名和分类 146

一、碳水化合物的组织化学命名 146

二、碳水化合物的组织化学分类 147

一、高碘酸-希夫反应 149

第三节 显示糖原的方法 149

二、胭脂红染色法 151

第四节 显示酸性糖共轭物的方法 152

一、阿尔新蓝染色显示酸性糖共轭物 152

二、异染性技术显示酸性糖共轭物 152

（一）原理 152

（二）快速甲苯胺蓝染色法 153

（三）天青A异染法 153

（四）硫萱异染法 153

三、金属离子结合法 154

（一）胶体氢氧化铁法显示酸性糖共轭物 154

（二）高铁二胺法 155

（三）高铁二胺-硫碳酰肼-蛋白银-醋酸银物理显影法显示硫酸化酸性糖共轭物 156

（四）阳高子胶体金法显示硫酸化糖共轭物 157

第五节 糖共轭物的鉴别染色技术 158

一、变换阿尔新蓝染液pH的染色法 158

二、阿尔新蓝临界电解质浓度法显示和鉴别酸性糖共轭物 159

三、醛品红-阿尔新蓝染色区分硫酸化和羧酸化糖共轭物 160

四、阿尔新蓝-PAS反应显示酸性和中性糖共轭物 160

第七章 脂类和脂蛋白 王士平 163

第一节 显示脂类的脂溶性染料染色法 165

一、苏丹黑-B示脂类法 165

二、苏丹Ⅲ或Ⅳ示脂类法 167

三、溴-苏丹黑示脂类法 167

四、油红O示脂类法 168

五、硫酸尼罗蓝示脂类法 169

一、四氧化锇示脂类法 170

第二节 显示脂类的化学方法 170

二、四氧化锇-萘胺示脂类法 171

三、铜-二硫草酰胺示游离脂肪酸法 172

四、脂肪酶-硝酸铅反应示脂肪酸法 173

第三节 显示磷脂的方法 174

一、酸性氧化苏木精示磷脂法 174

二、丙酮-硫酸尼罗蓝示磷脂法 176

三、高甲酸-Schiff反应示磷脂法 176

四、溴化反应示磷脂法 177

五、氢氧化钠-酸性氧化苏木精示神经鞘磷脂法 178

六、胞质反应示缩醛磷脂法 179

第四节 显示胆固醇的方法 180

一、高氯酸-萘醌（PAN）示胆固醇法 180

七、luxol牢固蓝示髓磷脂法 180

二、Schultz反应示胆固醇法 182

三、毛地黄皂苷反应示胆固醇及胆固醇酯法 182

四、酶的方法示胆固醇及胆固醇酯 183

第五节 脂质的提取法 184

一、吡啶提取法 184

二、选择性提取法 185

第六节 显示脂色素的方法 186

一、硫酸尼罗蓝示黑色素及脂褐素法 186

第八章 无机成分 李叔庚 188

第一节 无机阳离子的组织化学 188

一、铁的显示法 188

二、钙的显示法 191

三、铝的显示法 194

五、铍的显示法 197

四、砷的显示法 197

六、钡的显示法 198

七、铋的显示法 199

八、镍的显示法 199

九、铜的显示法 200

十、金的显示法 203

十一、铅的显示法 203

十二、镁的显示法 205

十三、银的显示法 206

十四、钾的显示法 207

十五、锌的显示法 208

第二节 无机阴离子的组织化学 212

一、磷酸根（盐）的显示法 212

二、碳酸根（盐）的显示法 213

第九章 酶组织化学基本原理 贲长恩 214

第一节 酶的名称及分类 215

（一）酶的命名 215

（二）酶的分类 215

第二节 酶的定位及反应 219

（一）酶的定位 219

（二）酶的反应 223

第三节 光镜酶组织化学证明法 224

（一）金属-金属盐法 224

（二）偶联偶氮色素法 225

（三）色素形成法 226

（四）其它显示法 228

第四节 电镜酶细胞化学证明法 231

（一）氧化还原酶 232

（二）转移酶 239

（三）水解酶 241

（四）裂解酶 249

（五）异构酶 250

（六）连接酶 251

第五节 酶反应各种因素 251

（一）酶反应特征 251

（二）酶的确定 254

（三）酶反应产物及其原理 254

（四）影响酶定位的因素 255

（五）酶的动力学 255

（一）生物化学方面的要求 258

（二）形态学方面的要求及酶组织化学的局限性 258

第六节 酶组织化学的基本条件 258

第七节 影响酶活性的基本条件 260

（一）检测法的选择 260

（二）固定 260

（三）切片标本的制作 262

（四）缓冲液的选择和调节机制 263

（五）温度对酶反应速度的影响 264

（六）pH值对酶反应的影响 265

（七）捕捉剂 266

（八）激活剂 267

（九）抑制剂 267

第八节 人工产物 268

第九节 对照实验 269

第一节 磷酸酶 272

第十章 水解酶 朴英杰 272

一、碱性磷酸酶 273

二、酸性磷酸酶 278

三、5′-核苷酸酶 283

四、葡萄糖-6-磷酸酶 285

五、三磷酸腺苷酶 287

六、核苷二磷酸酶 293

第二节 羧酸酯水解酶 294

一、非特异性酯酶 299

二、脂酶 306

三、乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶 308

四、磷酯酶 310

一、硫胺素焦磷酸酶 313

第三节 焦磷酸酶 313

二、硫胺素单磷酸酶 315

三、硫胺素三磷酸酶 316

四、无机焦磷酸酶 317

第四节 糖苷酶 320

一、酸性-α-葡萄糖苷酶 320

二、β-葡萄糖苷酶 322

三、α-半乳糖苷酶 323

四、酸性-β-半乳糖苷酶 324

五、α-甘露糖苷酶 326

六、β-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶 326

七、β-葡萄糖苷酸酶 328

第五节 肽酶 329

一、微粒体氨基肽酶 330

二、二肽酰肽酶Ⅱ 333

三、二肽酰肽酶Ⅳ 334

第十一章 转移酶 王彦 338

一、乙酰基转移酶 338

二、氨基转移酶 340

三、谷氨酰基转移酶 341

四、氨甲酰基转移酶 343

五、鸟氨酸氨甲酰转移酶 343

六、糖基转移酶 344

第十二章 裂解酶 彭俊云 347

一、醛缩酶 347

二、枸橼酸合酶 349

三、腺苷酸环化酶 350

四、苹果酸合酶 351

五、碳酸酐酶 352

六、鸟氨酸脱羧酶 354

七、鸟（嘌呤核）苷酸环化酶 356

第十三章 氧化酶 文建国 358

一、细胞色素氧化酶 359

二、过氧化物酶 361

三、过氧化氢酶 365

四、多巴胺-β-羟化酶 366

五、单胺氧化酶 371

六、葡萄糖氧化酶 374

七、黄嘌呤氧化酶 377

八、尿酸氧化酶 379

九、氨基酸氧化酶 381

十、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（磷酸）氧化还原酶 383

第十四章 脱氢酶 李叔庚 387

第一节 概述 387

第二节 辅酶非依赖性脱氢酶 392

一、琥珀酸脱氢酶 392

二、二氢乳清酸脱氢酶 394

三、胆碱脱氢酶 395

第三节 辅酶Ⅰ（NAD）依赖性脱氢酶 396

一、乙醇脱氢酶 396

二、山梨醇脱氢酶 398

三、尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶 400

四、乳酸脱氢酶 401

五、β-羟基丁酸脱氢酶 404

六、苹果酸脱氢酶 406

七、谷氨酸脱氢酶 407

第四节 辅酶Ⅱ（NADP）依赖性脱氢酶 409

一、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶与葡萄糖酸-6-磷酸脱氢酶 409

二、异柠檬酸脱氢酶 411

第五节 与类固醇有关的脱氢酶 412

一、类固醇3β-醇脱氢酶 412

二、17β-羟基类固醇脱氢酶 415

三、20α-羟基类固醇脱氢酶 416

第十五章 异构酶 李叔庚 419

一、拓扑异构酶 420

二、葡萄糖氨基-6-磷酸异构酶 422

三、3β-羟固醇脱氢酶/△5-△4异构酶 423

五、尿嘧啶核苷二磷酸葡萄糖醛酸表异构酶 424

四、二硫蛋白异构酶 424

第十六章 合成酶 彭俊云 427

一、一氧化氮合酶 427

二、乙酰辅酶A羧化酶 430

第十七章 同工酶 舍英 433

第一节 同工酶的种类、特性及生物学意义 434

第二节 同工酶的分析方法 436

一、同工酶的分离精制 436

二、同工酶的电泳方法 439

三、同工酶的免疫学和同位素标记 444

四、同工酶的重氮盐色素方法 445

五、同工酶的基因表达及其多态性 446

一、乳酸脱氢酶 447

第三节 同工酶的应用 447

二、碱性磷酸酶 449

三、酸性磷酸酶 452

四、5′-核苷酸酶 454

五、乙酰胆碱酯酶 457

六、肌酸激酶 460

七、精氨酸激酶 464

八、超氧化阴离子自由基岐化酶 465

九、磷酸甘油酸变位酶 467

十、磷酸甘油酸激酶 469

十一、精子顶体蛋白酶 470

十二、腺苷激酶 474

（一）碱性磷酸酶 479

第二节 水解酶 479

一、磷酸酶 479

第一节 概述 479

第十八章 电镜细胞化学 朴英杰 王士平 479

（二）酸性磷酸酶 481

（三）5′-核苷酸酶 482

（四）葡萄糖-6-磷酸酶 483

（五）三磷酸腺苷酶 484

（六）核苷二磷酸酶的电镜显示法 488

二、羧酸酯水解酶 490

（一）非特异性酯酶 490

（二）酯酶 491

（三）乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶 492

（四）磷脂酶 493

（二）硫胺素焦磷酸酶 495

（一）硫胺素单磷酸酶 495

三、焦磷酸酶 495

（三）硫胺素三磷酸酶 496

（四）无机焦磷酸酶 497

四、糖苷酶 500

五、肽酶 500

（一）微粒体氮基肽酶 500

（二）二肽酰肽酶Ⅱ 500

（三）二肽酰肽酶Ⅳ 501

第三节 转移酶 502

一、氨甲酰基转移酶 503

（一）天冬氨酸氨甲酰基转移酶 503

（二）鸟氨酸氨甲酰基转移酶 504

二、脂酰基转移酶 505

三、氨酰基转移酶 507

四、糖基转移酶 509

（一）糖原磷酸化酶 509

（二）分枝糖基转移酶 510

（三）UDP葡萄糖-糖原葡萄糖基转移酶 511

五、氨基转移酶 512

（一）天冬氢酸氨基转移酶 512

（二）4-氨基丁酸氨基转移酶 513

第四节 氧化酶 515

一、细胞色素氧化酶 515

二、过氧化物酶 517

三、过氧化氢酶 520

四、多巴胺-β-羟化酶 521

五、单胺氧化酶 524

六、葡萄糖氧化酶 528

七、黄嘌呤氧化酶 531

八、尿酸氧化酶 532

九、氨基酸氧化酶 534

十、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（磷酸）氧化酶 536

第五节 脱氢酶 538

一、辅酶非依赖性脱氢酶 542

（一）琥珀酸脱氢酶 542

（二）二氢乳清酸脱氢酶 544

（三）胆碱脱氢酶 545

二、辅酶依赖性脱氢酶 546

（一）β-羟基丁酸脱氢酶 546

（二）尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶 548

（三）乙醇脱氢酶 549

（四）山梨醇脱氢酶 550

（五）葡萄糖-6-磷酸脱氢酶与葡萄糖酸-6-磷酸脱氢酶 552

（六）异柠檬酸脱氢酶 554

（七）苹果酸脱氢酶 555

（八）乳酸脱氢酶 557

（九）谷氨酸脱氢酶 561

第六节 裂合酶 563

碳酸酐酶 563

第七节 细胞器的电镜酶细胞化学 565

一、溶酶体 565

二、线粒体 566

三、内质网 568

四、高尔基复合体 569

五、微体 570

六、细胞膜 571

七、小结 573

第八节 功能基的电镜显示法 573

一、氨基（-NH2）的电镜显示方法 573

（一）氢醌-TNBT法 573

（二）二硫代氨基甲酰化法 574

（三）羟基萘甲醛法 575

二、巯基（-SH）显示法 575

（一）DDD-FBBBN法 575

（二）FBBBN法 577

（三）形成硫醇盐的汞橙法 578

三、复合糖类的电镜显示法 579

（一）连二羟基的高碘酸盐-硫卡巴肼-蛋白银染色法 579

（四）MC（mercuric chloride）法 579

（二）羧基的胶体（透析）染色法Rinehart和Abal-Haj 580

（三）羧基的钌红染色法 581

（四）硫酸基（-OSO3H）的高铁二胺染色法 582

第九节 酶以外成分的电镜细胞化学 王士平 582

一、蛋白质的电镜细胞化学 582

（一）对苯二酚高铁氰化物反应示氨基 582

（二）茚三酮-蛋白银反应示氨基 584

（三）对氯汞苯甲酸反应示巯基 584

（四）六亚甲四胺银反应示巯基 585

（五）丙烯醛反应示蛋白质 586

二、核酸的电镜细胞化学 587

（一）氨银反应示DNA 587

（六）磷钨酸反应示蛋白质 587

（二）Feulgen-六亚甲四胺银反应示DNA 588

（三）Feulgen-希夫-乙醇铊反应示DNA 589

（四）醋酸铀反应示RNA 590

（五）铟反应示DNA和RNA 591

（六）电镜用酶消化反应示核酸 592

三、糖类的电镜细胞化学 594

（一）过碘酸-硫碳酰肼-蛋白银反应示糖的羟基 594

（二）高铁二胺-硫碳酰肼-蛋白银-乙酸银显影法 595

（三）渗析铁反应示酸性糖 596

（四）钌红反应示酸性糖 597

（五）高碘酸-六亚甲四胺银反应示多糖 598

（六）伴刀豆球蛋白A-过氧化物酶-二氨基联工苯胺-四氧化锇反应示糖残基 599

（七）胶体金标记的外源凝集素反应示糖残基 600

（一）羟胺反应示甘油酯 601

四、脂类的电镜细胞化学 601

（二）脂肪酶-硝酸铅反应示甘油酯 602

（三）四氧化锇反应示磷脂 603

（四）毛地黄皂苷反应示胆固醇 603

（五）电镜用脂类提取法 604

五、胺类的电镜细胞化学 605

（一）亲铬性反应 605

（二）亲银性反应 606

六、色素的电镜细胞化学 607

（一）二氨基联苯胺反应示血红素蛋白 607

（二）镀银反应示黑素体 608

七、无机物的电镜细胞化学 609

（一）锑酸钾反应示钠离子 609

（二）硫化银反应示重金属 610

（三）Perls反应示铁离子 611

（四）草酸铵反应示钙离子 611

（五）乳酸银反应示氯离子 612

（六）醋酸铅反应示磷酸盐离子 613

第十九章 某些生物活性物质的组织化学 熊希凯 614

第一节 概述 614

第二节 肽类 615

一、P物质（SP） 615

二、生长抑素（SOM） 617

三、脑啡肽（EnK） 620

四、β-内啡肽（M-EnK） 622

五、新内啡肽（N-EnK） 623

六、血管活性肠肽（VIP） 625

七、缩胆囊素（CCK） 626

八、降钙素基因相关肽（CGRP） 628

九、心房钠尿肽、心房颗粒（ANP、ASG） 629

第三节 氨基酸类物质 631

一、γ氨基丁酸（GABA） 631

二、谷氨酸（Glu） 633

三、甘氨酸（Gly） 634

第四节 生物胺类 635

一、5-羟色胺（5-HT） 635

二、多巴胺（DA） 637

三、去甲肾上腺素（NE） 639

第五节 神经营养素 640

一、神经生长因子（NGF） 641

二、脑源性神经营养因子（BDNF） 643

三、纹状体源性神经营养因子（SDNF） 645

四、胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF） 646

五、神经营养素（NT3-NT6） 648

第六节 生长因子 650

一、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF） 650

二、生长相关蛋白（GAP-43） 651

三、神经特异性烯醇酶（NSE） 653

四、神经节苷脂（GM1） 653

五、胰岛淀粉样多肽（IAPP） 654

六、突触素 655

七、睫状神经营养因子（CNTF） 656

第七节 细胞因子 658

第八节 其他 660

一、信号传导子和转录激活子-3（STAT3） 660

二、钙结合蛋白（GaBP） 661

三、S-100蛋白 662

四、转化生长因子β（TGFβ） 663

五、胶质原纤维酸性蛋白（GFAP） 664

六、肿瘤坏死因子（TNF） 665

第二十章 凝集素组织化学 葛振华 670

第一节 概述 670

第二节 生物医学常用的凝集素 675

（一）刀豆素-A（ConA） 675

（九）莲凝集素（石子柏凝集素LTA） 676

（八）荆豆凝集素-1（UEA-1） 676

（七）蓖麻凝集素-1（RCA-1或RCA-120） 676

（六）凝集素1（BS-1） 676

（五）花生凝集素（PNA） 676

（四）鲎凝集素（LPA） 676

（三）麦芽凝集素（WGA） 676

（二）兵豆凝集素（LCA） 676

（十）双花凝集素（DBA） 677

（十一）大豆凝集素（SBA） 677

（十二）菜豆凝集素（PHA） 677

（十三）凝集素（VGA） 677

（十四）羊蹄甲凝集素（BPA） 677

第三节 凝集素在细胞分化和成熟方面的应用 680

一、凝集素组织化学在淋巴细胞分化和成熟研究中的应用 680

（一）胸腺中T淋巴细胞的分化和成熟 680

（二）骨髓中性粒细胞、巨噬细胞、红细胞的分化和成熟 681

（一）前肠 682

二、凝集素组织化学在胃肠道上皮细胞分化研究中的应用 682

（四）外周单核巨噬细胞及粒细胞 682

（三）外周淋巴细胞 682

（二）胃粘膜细胞 683

（三）小肠粘膜细胞 684

第四节 凝集素的标记和染色 685

一、辣根过氧化物酶标记凝集素的方法 685

二、凝集素的ABC法 687

三、荧光素标记凝集素的方法 688

四、FITC-UEA-1再加荧光免疫染色 689

五、胶体金标记凝集素 690

第五节 凝集素抗体的制备和免疫细胞化学染色 693

一、凝集素抗体的制备 693

三、凝集素抗体的ABC法 694

二、凝集素抗体的染色 694

第六节 凝集素的电镜技术 695

一、凝集素电镜包埋前染色技术 695

二、凝集素标记胶体金的电镜技术 696

三、Con-A辣根过氧化物酶-胶体金（ConA-HRP-G），用于细胞悬液的电镜技术 697

第二十一章 荧光组织化学 彭俊云 701

第一节 荧光显微镜 702

第二节 组织细胞荧光分类 704

第三节 生物胺荧光组织化学 705

（一）Falck-Hillarp荧光法显示生物单胺 705

（二）乙醛酸诱发生物单胺荧光法 707

（三）新鲜组织块乙醛酸诱发生物单胺荧光法 709

（四）乙醛酸聚合反应显示生物胺对染法 710

（五）邻苯二醛显示组织胺荧光法 711

（一）吖啶橙区分活细胞DNA和RNA荧光组织化学染色法 712

第四节 一般荧光组织细胞化学染色方法 712

（二）吖啶橙原位区分组织细胞DNA和RNA的荧光组织化学染色法 713

（三）吖啶橙荧光染色区别活细胞和死细胞法 714

（四）培养细胞支原体污染和DNA病毒感染的荧光显微镜法（DAPI法） 714

（五）石蜡切片真菌和分支杆菌双重荧光染色法 715

（六）粒性白细胞锌荧光检测法 716

（七）光神霉素快速细胞周期分析DNA荧光染色法 717

（八）活细胞溶酶体吖啶橙荧光染色法 717

（九）荧光组织化学方法显示碱性磷酸酶 718

（十）赫斯特33258荧光法显示核酸 719

（十一）溴化乙啶荧光法显示脱氧核糖核酸 720

（十二）溴化乙啶荧光法显示核糖核酸 721

（十三）高分辨率荧光组织化学法定位内源性碱性磷酸酶活性 721

一、免疫荧光组织化学染色的原理 723

第五节 免疫荧光组织细胞化学技术 723

二、荧光素标记抗体的制备 724

（一）荧光素 724

（二）荧光素标记抗体的方法 725

（三）荧光抗体的质量控制 729

三、免疫荧光组织化学和细胞化学染色技术方法 729

四、非特异性荧光染色背景的消除方法 731

第二十二章 免疫组织化学 孙品伟 735

第一节 抗体的制备 736

一、抗原提取 737

二、抗体制备 738

（一）多克隆抗体的制备 738

（二）单克隆抗体的制备 739

四、抗体标记 741

三、抗体的纯化 741

第二节 组织材料的制备 743

一、标本取材与贮存 743

二、固定 744

三、脱水、包埋 745

四、切片 746

第三节 免疫染色原理与方法 747

一、免疫酶组织化学染色法 748

（一）酶标抗体法 748

（二）非标记抗体酶法 751

二、免疫金-银染色法 757

三、铁标记法 759

四、免疫荧光染色法 760

五、双重或多重免疫染色法 761

第四节 染色对照与非特异性染色 766

一、染色对照 766

二、非特异性染色及其清除 768

第五节 免疫电镜技术 770

一、标本制备 771

二、透射免疫电镜常用方法要点 771

三、扫描免疫电镜术 773

四、冷冻蚀刻免疫电镜术 773

第二十三章 定量组织化学 谢锦玉 贲长恩 777

第一节 显微分光光度术 778

一、显微分光光度计的原理和结构 778

二、显微分光光度计测量的基本方法 780

（一）在细胞生物学研究中的应用 781

三、显微分光光度计的应用 781

（二）对肿瘤细胞DNA定量的研究 782

（三）对抗肿瘤作用机制的研究 783

（四）在运动性肌肉研究中的应用 784

第二节 流式细胞术 786

一、流式细胞计主要构成和原理 786

二、流式细胞计样品制备 787

（一）培养细胞制备 787

（二）新鲜腹水或实体瘤标本制备 787

（三）脱落细胞悬液的制备 788

（四）石蜡包埋样品制备 789

（五）染色方法 789

（六）流式细胞术检测人T淋巴细胞亚群 790

（七）流式细胞术对DNA倍体分析 792

（八）流式细胞术分析Bcl-2基因蛋白 792

三、流式细胞术的应用 792

（一）肿瘤学方面的应用 793

（二）免疫学方面的应用 794

（三）药物抗癌作用方面的应用 795

（四）在肿瘤细胞凋亡研究中的应用 795

第三节 激光扫描共聚焦显微术 798

一、激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）技术的基本原理和结构 799

二、激光扫描共聚焦显微镜的特点 800

三、激光扫描共聚焦显微镜功能 801

（一）激光扫描聚焦显微镜的静态观察 801

（二）激光扫描共聚焦显微镜的动态观察 802

（三）荧光光漂白后的光恢复 803

（四）生物活性物质活性封闭和解封闭的测定 803

（五）粘附细胞分选 803

（六）细胞内激光显微外科 804

四、激光扫描共聚焦显微术的应用 804

（一）对细胞内Ca2+、pH值的动态分析及其它细胞内其它离子的测定 804

（二）对细胞酶活性的测定 805

（三）对细胞物质转运的测定 805

（四）对细胞受体的测定 806

（五）在血液病学研究中的应用 806

（六）在骨、软骨组织细胞和肌腱研究中的应用 806

（八）在针灸经络研究工作中的应用 807

（七）在神经科学中的应用 807

（九）在细胞凋亡研究中的应用 808

（十）抗癌中药作用和机理研究的应用 808

五、几种荧光染料的染色方法 809

附：双光子（多光子）显微镜 811

第四节 X射线显微分析 贲长恩 812

一、X射线显微分析法基本原理 813

（一）特征X射线的产生 813

（二）能谱分析法（EDX） 814

（三）波谱分析法（WDX） 814

（四）EDX与WDX两种分析方法的比较 815

二、生物样品和生物标准样品的制备 816

（一）生物样品的制备 816

（二）生物标准样品制备 817

（一）在细胞学和组织学中的应用 819

三、X射线显微技术的应用 819

（二）在生理学中的应用 820

（三）在病理学中的应用 820

（四）在卫生学中的应用 821

第五节 图像分析仪 贲长恩 822

一、图像分析仪的基本原理 822

二、图像分析仪的构成 823

三、图像分析仪的工作程序 824

（一）图像的形成 824

（二）图像的获取 824

（三）图像的检测 825

（四）图像的分析 826

（五）图像的修正 827

（六）图像系统的误差分析 828

四、图像分析系统在生物、医学方面的应用 830

第六节 体视学技术 贲长恩 832

一、基本理论 833

二、测试方法 834

（一）测格的选择 834

（二）测量的方法 835

三、二维图像的测量 838

四、三维结构参数的计算 839

（一）体积与体积分数 839

（二）表面积密度 841

（三）长度密度与平均厚度 842

五、影响测试的因素 844

（一）误差分析 844

（二）组织切片的影响 845

（三）切片厚度的影响 846

（四）抽样原则 848

六、体视学在生物医学方面的应用 848

（一）在组织细胞学方面的应用 848

（二）在免疫组织化学方面的应用 849

（三）在超微结构方面的应用 851

（四）在扫描电子显微镜方面的应用 852

（五）在病理诊断方面的应用 853

第二十四章 原位杂交组织化学 牛建昭 858

第一节 原位杂交技术基础程序 859

一、组织取材与固定剂的选择 859

二、组织切片的处理 860

三、杂交反应 863

五、杂交体的检测 865

四、杂交后处理 865

第二节 组织细胞原位杂交技术 869

一、细胞和组织切片的制作 869

二、预杂交和杂交 871

三、杂交后处理 871

四、标记与检测法 871

第三节 染色体原位杂交技术 876

一、染色体的制备 876

二、原位杂交 877

三、信号检测 877

四、显带复制 878

五、肿瘤或瘤前组织的染色体原位杂交 878

六、荧光原位杂交 880

一、同位素原位杂交联合免疫组织化学PAP法 883

第四节 原位杂交结合免疫组织化学技术 883

二、地高辛标记联合PAP法 884

三、PCR与原位杂交细胞化学结合法 885

第五节 双重标记原位杂交技术 887

一、结合放射性同位素和非放射性标记探针的双重标记原位杂交 887

二、非放射性标记探针的双重标记原位杂交 888

三、原位引物延伸标记法 890

第六节 电镜原位杂交技术 890

一、生物素标记DNA探针—PA—gold电镜原位杂交技术 891

二、地高辛标记rRNA探针电镜原位杂交技术 892

三、同位素标记cRNA探针电镜原位杂交与染色体制片 894

第七节 原位杂交技术的新进展 894

二、整体原位杂交 895

一、薄片组织的原位杂交 895

三、原位杂交结果的定量分析 899

四、原位PCR法的应用 900

第二十五章 放射自显影术 郭顺根 902

第一节 核物理基础 902

第二节 放射自显影术的基本原理及理论 905

一、放射自显影术的创立与发展概要 905

二、放射自显影术的基本原理 906

三、感光乳胶的性质与种类 906

四、核射线与径迹效应 909

五、潜影形成与消退 911

第三节 放射自显影像制备 912

第四节 放射自显影类型、阅读、复制 916

二、湿贴法 920

一、接触法 920

第五节 放射自显影基本方法 920

三、液体乳胶法 921

四、脱底乳胶膜法 922

第六节 放射自显影的应用 922

一、宏观放射自显影 922

二、显微放射自显影 924

三、染色体自显影 925

四、电子显微镜自显影 925

五、双标记自显影 927

六、液体自显影 928

七、光镜高速自显影 929

第七节 放射自显影术注意事项 930

（一）纯水质量的检验标准 932

（二）用离子交换树脂制备纯水 932

一、水 932

附录1 常用试剂的配制 贲长恩 932

二、溶液浓度的表示方法 933

（一）比例浓度 933

（二）百分浓度 933

（三）分子浓度 933

（四）当量浓度与毫当量浓度 934

（五）稀释浓度 934

三、溶液浓度的计算 934

（一）溶液的配制 934

（二）溶液的稀释 934

（三）溶液的混合 934

（四）溶液浓度的换算 935

（一）酸溶液 936

四、一定百分浓度酸碱溶液的配制 936

五、常用酸碱溶液的配制 936

（二）碱溶液 937

（三）酸碱指示剂溶液的配制 937

六、乙醇稀释表 938

附录2 常用酸碱各种数量值 贲长恩 940

一、常用的市售酸碱浓度 940

二、常用酸碱百分浓度、比重和当量浓度的关系 940

三、实验室中常用酸碱的比重和浓度的关系 942

四、常用酸碱配制当量（N）溶液稀释表 943

五、部分酸的常用浓度表 945

六、各种浓度的酸碱贮存液的近似pH值 945

七、常用固态化合物的当量浓度（或克分子浓度）配制参考表 946

二、国内外一般化学试剂分级标准 947

附录3 化学试剂的规格 贲长恩 947

一、化学试剂的等级 947

三、一般注意事项 948

四、易变质及需要特殊方法保存的试剂 948

附录4 生理性溶液的配制 贲长恩 950

附录5 放射性物质数据和单位 贲长恩 951

一、常用放射性核素数据 951

二、放射性物质测定单位 952

附录6 组织化学主要的缓冲溶液 李叔庚 953

1．醋酸-盐酸缓冲溶液 953

2．0．1mol/L醋酸盐缓冲液 954

3．0．05mol/L柠檬酸盐缓冲液 954

5．三羟甲基氨基甲烷-顺丁烯二酸盐缓冲液 955

4．0．05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液 955

6．0．05mol/L巴比妥缓冲液 956

7．巴比妥—醋酸盐缓冲液 957

8．0．05mol/L二甲胂酸盐缓冲液 957

9．Palitisch缓冲液 958

10．硼酸-硼砂缓冲液 959

11．0．1mol/L磷酸盐缓冲液 959

12．0．05mol/L顺丁烯二酸盐缓冲液 960

13．磷酸盐缓冲生理盐水溶液 961

14．Na2HPO4-NaOH缓冲溶液 961

15．NaHCO3-NaOH缓中液 962

16．KCl-NaOH缓冲溶液 962

17．KH2PO4-NaOH缓冲溶液 963

18．KHC8H4O4（邻苯二甲酸氢钾）-HCl缓冲液 964

19．KHC8H4O4-NaOH缓冲液 965

20．KCl-HCl缓冲液 965

21．甘氨酸-氢氧化钠缓冲液 966

22．甘氨酸-氢氧化钠缓冲液 967

23．0．05mol/L碳酸氢钠-碳酸钠缓冲液 967

24．Mcllvaine氏缓冲液 968

25．Good缓冲液 969

26．Karasson-Schwlt磷酸盐缓冲液 970

27．0．5mol/L Tris-HCl缓冲液 970

28．Tris缓冲生理盐水 970

29．Triton-TBS 970

30．Triton-TBS 970

附录7 组织化学试剂英汉对照 李叔庚 972

附录8 组织化学名词中英对照 李叔庚 983