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第一章 人类基因组基本知识 1

第一节 从DNA到人类基因组 1

一、DNA的化学组成与分子结构 1

二、基因的概念、结构、化学本质与生物学功能 2

三、DNA复制的特点与遗传信息流动的基本规律 4

四、DNA变异与基因突变 5

第二节 人类基因组的结构和功能 6

一、人类基因组的总体构成 6

二、核基因组 7

三、线粒体基因组 7

第三节 细胞的有丝分裂和减数分裂 8

一、细胞周期与有丝分裂 8

二、减数分裂 9

第二章 医学遗传学基本知识 12

第一节 单基因遗传与单基因病 12

一、单基因病的概念与分类 12

二、不同于孟德尔遗传规律的遗传现象 17

三、常见单基因病举例 20

第二节 多基因遗传与多基因病 23

一、多基因遗传的特点 23

二、多基因病的概念与遗传特征 23

第三节 肿瘤与遗传 24

一、体细胞突变学说 24

二、癌基因学说 25

第四节 染色体畸变与染色体病 27

一、人类染色体 27

二、染色体畸变 29

三、染色体病及其主要特征、分类 31

四、异常染色体携带者 36

第五节 遗传性疾病基因诊断的原则及途径 37

一、遗传性疾病基因诊断的原则 37

二、基因检测的标本制备 38

三、基因突变的检测 39

第三章 常用染色体制备技术 45

第一节 外周血淋巴细胞培养及染色体制备 45

一、培养基的准备 45

二、采血接种 45

三、培养 45

四、收获 45

五、微细胞遗传学技术 46

第二节 羊水细胞培养及染色体制备 47

一、羊膜腔穿刺的时间 47

二、羊水的抽取 47

三、羊水细胞培养及染色体制备 47

四、羊水细胞培养中存在的问题 48

五、羊膜腔穿刺的适应证和禁忌证 49

第三节 绒毛细胞的染色体制备 49

一、绒毛的取材 49

二、绒毛的识别 50

三、绒毛细胞的染色体制备 50

四、绒毛细胞染色体制备应注意的问题 51

第四节 胸、腹水、骨髓细胞的染色体制备 52

一、胸、腹水细胞的染色体制备 52

二、骨髓细胞的染色体制备 52

第四章 医学细胞遗传学检验的质量控制 54

第一节 细胞遗传学检验的室内质量控制 54

一、对细胞遗传学检验人员的要求 54

二、建立标准化的操作方法 55

三、制定仪器设备的专人管理制度 55

四、培养基及其他试剂的质量控制 55

五、标本检验的质量控制 56

第二节 细胞遗传学检验的室间质量控制 56

一、室间质控的组织形式 57

二、室间质评的要求 57

三、室间质评的方法 57

第五章 核酸提取技术 58

第一节 通用的核酸提取技术 59

一、DNA提取方法 59

二、RNA提取方法 63

第二节 临床标本核酸提取方法 65

一、临床标本的来源与特点 65

二、临床标本核酸提取方法 66

第三节 核酸浓度与纯度测定 69

一、DNA的测定 69

二、RNA的测定 69

第六章 基因体外扩增技术 71

第一节 聚合酶链反应 71

一、常规聚合酶链反应技术的基本原理与特点 71

二、常规聚合酶链反应技术的基本条件 73

三、常规聚合酶链反应产物的分析 76

四、常规聚合酶链反应的常见问题与解决办法 79

五、常规聚合酶链反应的局限性 81

六、常规聚合酶链反应的临床应用举例 83

七、主要的临床聚合酶链反应相关技术 90

第二节 连接酶链反应 95

一、连接酶链反应技术的基本原理与特点 96

二、连接酶链反应的基本条件 96

三、连接酶链反应产物的分析 99

四、连接酶连反应的常见问题 99

五、连接酶链反应技术的应用范围 99

六、主要的连接酶链反应相关技术 99

第三节 其他体外基因扩增技术 100

一、核酸序列扩增法 100

二、分支探针DNA测定 100

第七章 核酸杂交检测技术 105

第一节 样本的制备 105

第二节 探针标记 106

一、放射性核素标记法 106

二、非放射性标记法 109

第三节 Southern印迹杂交 114

一、限制性内切酶消化DNA 114

二、凝胶电泳 115

三、Southern印迹法 117

第四节 斑点印迹 119

第五节 Northern印迹 120

一、RNA的电泳分离 121

二、Northern印迹法 121

第六节 杂交和漂洗 122

一、放射性标记探针杂交 122

二、非放射性标记探针杂交 123

三、寡核苷酸探针杂交 124

第七节 放射自显影和显色反应 124

一、放射自显影 124

二、非放射性核酸标记物的显示 125

第八节 探针杂交诊断的发展和应用 128

第九节 荧光原位杂交 130

一、荧光原位杂交的原理与方法 130

二、荧光原位杂交在临床诊断中的应用 133

第十节 比较基因组杂交 134

一、比较基因组杂交的原理与方法 134

二、比较基因组杂交的应用 135

第十一节 光谱染色体核型分析 136

一、光谱染色体核型分析的原理和方法 136

二、光谱染色体核型分析的应用 139

第十二节 引物介导的原位DNA合成技术 140

一、引物介导的原位DNA合成技术的基本原理 140

二、引物介导的原位DNA合成技术的操作过程 140

第八章 基因突变分析技术 143

第一节 聚合酶链反应-单链构象多态性突变检测技术 143

一、基本原理 143

二、基本方法 144

三、影响因素 146

四、可能出现的问题与解决办法 146

五、临床应用与局限 147

六、PCR-SSCP技术的进展 147

第二节 双荧光探针杂交突变检测技术 148

一、基本原理 148

二、基本方法 148

三、影响因素 151

四、可能出现的问题与解决办法 151

五、优点与问题 152

第三节 单碱基延伸突变检测技术 152

一、基本原理 152

二、基本方法 152

第四节 基因芯片突变检测技术 154

第五节 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性突变检测 155

一、基本原理 155

二、基本方法 156

三、PCR-RFLP的临床应用 158

四、PCR-RFLP的优点与应用局限性 159

五、PCR-RFLP可能出现的问题与解决办法 159

第六节 等位基因特异性PCR检测突变技术 159

一、基本原理 159

二、基本方法 160

三、ASPCR及MAS-PCR的临床应用 160

四、ASPCR技术的优点与应用局限 163

第七节 突变引物延伸扩增检测突变技术 164

第八节 聚合酶链反应-斑点杂交突变技术 164

一、基本原理 164

二、基本方法 165

三、临床应用 166

四、临床应用优势与局限 167

第九节 DNA测序检测突变 167

第十节 动态突变检测技术 168

一、疾病名称 168

二、疾病特征 168

三、诊断与检测 169

四、遗传咨询 169

五、基因诊断 169

六、基因诊断技术 169

七、临床基因诊断的动态突变疾病 171

第十一节 变性梯度凝胶电泳 172

一、变性梯度凝胶电泳原理 172

二、DGGE突变检测应注意的问题 173

三、DGGE在临床上的应用 173

四、DGGE的优缺点 174

第十二节 异源双链分析 174

一、异源双链分析原理 174

二、HA技术进行突变检测应注意的问题 174

三、HA的优缺点 175

四、主要应用 175

第十三节 蛋白质截短试验 175

一、PTT试验的原理 176

二、PTT试验中的引物设计 176

三、PTT试验结果的检测 176

四、PTT技术在致病基因分析中的应用 177

第十四节 变性高效液相层析 177

第九章 基因连锁分析技术 180

第一节 基于RFLP的基因连锁分析 181

一、基本原理 181

二、基本方法 182

三、临床应用 183

四、RFLP连锁分析中应注意的问题 183

第二节 基于STR的基因连锁分析 184

一、基本原理 184

二、基本方法 185

三、临床应用 186

四、基因连锁分析中STR的选用条件 188

第十章 核酸定量荧光实时检测技术 189

第一节 水解探针技术 190

一、Taqman技术的基本原理 190

二、基本方法 192

三、Taqman技术的临床应用及其评价 193

四、其他Taqman相关技术 193

第二节 杂交探针技术 195

一、双荧光探针杂交技术 195

二、分子信标技术 195

第三节 SYBR Green Ⅰ荧光染料模式 198

一、基本原理 198

二、临床应用 200

第十一章 DNA序列测定技术 202

一、DNA序列分析的原理 202

二、DNA序列测定的方法 205

第十二章 基因芯片技术 209

第一节 基因芯片的制作和使用方法 210

一、基因芯片的制作 210

二、基因芯片的制作方法 211

三、基因芯片的检测方法 213

第二节 基因芯片在医学中的应用 214

第三节 基因芯片技术的现状和发展前景 215

第十三章 临床分子遗传学检验的质量控制 218

第一节 室内质量控制 218

第二节 室间质量评价样品开发 221

第三节 临床分子核酸检验实验室质量控制要求 222

附录一 常用试剂的配制 225

一、各种pH值的Tris缓冲液的配制 225

二、常见的市售酸碱浓度 225

三、常用贮存液的配制 226

附录二 常用名词术语英文缩语释意 228

附录三 国内外部分仪器、试剂供应商名录 230

附录四 常用系谱符号及其含义 231