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第一章 血液标本采集和保存 1

第一节 血液的生理概要 1

一、血细胞的代谢 1

二、血液的理化性质 1

第二节 标本的收集、运送和保存 2

一、标本收集前应考虑的因素 2

二、血液标本的采集 3

三、血液的抗凝 6

四、标本收集时应注意的问题 7

五、血液标本保存及运输 8

六、血标本收集后在存放过程中可能发生的变化 8

第二章 血红蛋白的测定方法 9

第一节 硫酸铜溶液比重法 9

第二节 氰化高铁血红蛋白法(HiCN) 11

第三节 联苯胺法 12

第三章 酶学方法的理论 14

第一节 酶活力测定的基本知识 14

一、酶活性的表示法 14

二、测定酶活性的类型 15

第二节 影响酶活力测定的一些技术因素 18

一、样品处理的影响 18

二、测定条件的影响 19

第三节 双底物动力学 20

一、双底物动力学 20

二、双底物动力学公式及其应用 21

第四节 酶的催化机制 26

一、ALT(丙氨酸氨基转移酶)的催化机制 26

二、LDH(乳酸脱氢酶)的催化机制 27

三、HRP(辣根过氧化物酶)的催化机制 27

一、ALT的底物特异性 29

第四章 血浆丙氨酸氨基转移酶的检测 29

第一节 ALT的动力学性质 29

二、ALT的最适PΗ和稳定性 30

三、ALT的抑制剂 30

第二节 ALT的测定方法 30

一、酮体粉法 30

二、赖氏比色法 31

三、速率法(动力学测定法) 35

第三节 正常人血清ALT参考区间的确定 44

一、赖氏法ALT正常参考区间的确定 44

二、速率法ALT参考区间的确定 45

第四节 ALT阳性的临床意义 46

第五节 供血者ALT是否有必要作为输血检验必测项目的讨论 47

一、ALT有必要做的理由 47

二、ALT没必要做的理由 49

第六节 双波长微孔板赖氏法测ALT含量 50

三、其他国家ALT是否为必测项目 50

第七节 用Tecan加微板赖氏法ALT的标准品最佳参数的选择 52

第八节 采用AuS.Lab软件定量微板赖氏法ALT含量 54

第九节 采用BEPⅢ仪器定量微板赖氏法ALT含量 55

第十节 微板ALT赖氏法和速率法的直线回归方程的建立 56

第十一节 血样贮存温度对赖氏ALT测定值的影响 58

第十二节 2000年度郑州地区无偿献血不合格率原因分析 59

第五章 ELISA检测技术 61

第一节 免疫基础知识 61

一、抗原的分类 61

二、抗体 62

第二节 抗原抗体反应 65

一、抗原抗体反应的原理 65

二、抗原抗体反应的特点 67

三、影响抗原抗体反应的因素 69

四、抗原抗体反应的类型 70

第三节 ELISA测定技术 71

一、酶免疫技术的分类 71

二、ELISA测定的原理和类型 72

第四节 ELISA试剂的制备 78

一、板的包被 78

二、酶结合物 83

三、酶的底物 88

四、洗涤液 90

五、酶反应终止液 90

六、阳性对照品和阴性对照品 90

七、参考标准品 91

八、ELISA常用试剂配制 91

第五节 ELISA最适工作浓度的选择 93

一、标本的采集和保存 95

第六节 ELISA的操作要点 95

二、试剂的准备 96

三、加样 96

四、保温和时间 96

五、洗涤 97

六、显色和比色 99

七、结果判断 100

第七节 ELISA的质量控制 102

一、基本概念 102

二、质量控制血清 104

三、室内质量控制程序 105

四、室间质量评价 109

第八节 ELISA试剂的临床质量评价 112

一、诊断试剂临床质量评价要点 113

一、试剂盒的方法学设计 114

二、临床考核血清盘的制备要求 114

第九节 ELISA检验试剂盒的选用 114

二、试剂盒的运输和贮存 116

三、ELISA试剂盒的选用 116

四、ELISA试剂盒的实验室内质检 117

第十节 间接ELISA检测结果分析 117

第十一节 ELISA诊断试剂盒出现的问题和防止方法 122

一、ELISA失败常见的几个问题 122

二、ELISA常见问题的防止方法 124

第十二节 血站检验科常用检验试剂的pH值 126

第六章 乙型肝炎的检测 127

第一节 乙型肝炎 127

一、生物学性状 127

二、致病性与免疫性 131

三、临床表现 132

五、微生物学检查法 133

四、诊断 133

六、乙型肝炎病毒感染人体后各项指标动态特点和意义 134

七、防治原则 135

第二节 乙型肝炎诊断试剂研制进展 137

一、抗-HBs诊断血清 137

二、血凝试验 137

三、放射免疫试验(RIA) 137

四、酶联免疫测定法(ELISA)试剂 138

五、DNA聚合酶链反应(PCR) 139

六、HBsAg全血金标检测试纸条 139

第三节 检测乙型肝炎时常出现的问题 143

一、强阳性漏检问题 143

二、乙型肝炎假阳性的问题 145

一、HCV的生物学性状 146

第一节 丙型肝炎 146

第七章 丙型肝炎的检测 146

二、HCV感染后的致病性和免疫性 148

三、丙型肝炎病毒感染后ALT特点和意义 151

四、HCV的临床表现 152

五、丙型肝炎的治疗 153

六、HCV疫苗的研制 153

第二节 丙型肝炎诊断试剂研制进展 154

一、抗-HCV的检测 154

二、HCV RNA的检测 157

三、双抗体夹心法检测HCV病毒的抗原 158

第三节 丙型肝炎诊断试剂质量控制参考品的建立 159

第四节 国产抗-HCV ELISA试剂盒的制备及临床评价 159

一、国产第二代抗-HCV ELISA试剂盒的制备 159

二、国产第三代抗-HCV ELISA试剂盒的临床评价 161

一、假阳性比较高 162

第五节 抗-HCV测定中存在的问题 162

二、HCV基因组的变异较大 163

三、阳性判断标准的不统一 164

四、血清中抗-HCV出现较晚 165

五、不同厂家的试剂对同一样品检验结果 165

第六节 郑州地区无偿献血人群抗-HCV调查 166

第七节 OPD底物失效引起抗-HCV检测失控原因分析 167

第八节 洗板次数对抗-HCV OD值的影响 170

第九节 室温放置对抗-HCV测定结果的影响 170

第八章 艾滋病的检测 172

第一节 艾滋病的概述 172

第二节 艾滋病 172

一、生物学性状 172

二、致病性与免疫性 175

三、HIV临床表现 178

五、防治原则 180

四、诊断 180

第三节 HIV诊断试剂的研制发展过程 181

一、测定HIV抗体的试剂(第一代和第二代试剂) 181

二、测定HIV抗原的试剂(第三代试剂) 185

三、同时测定HIV抗原及抗体的试剂(第四代试剂) 186

四、测定HIV联合检测试剂 186

第四节 国内和国外ELISA抗-HIV检测试剂评价 187

第五节 抗-HIV初筛阳性标本确认实验结果分析 187

第六节 国产抗-HIV双抗原夹心法评价 189

第九章 沉淀凝集反应 191

第一节 絮状沉淀试验 191

一、抗原稀释法(Dean-Webb法) 191

二、抗体稀释法(Ramon法) 192

二、直接凝集反应 193

第二节 凝集反应 193

一、凝集反应的特点 193

三、间接凝集反应 194

四、抗球蛋白参与的血凝试验 196

第三节 影响凝集反应的因素 196

一、影响第一阶段的因素 197

二、影响第二阶段反应的因素 198

第十章 梅毒螺旋体血清学检验 199

第一节 螺旋体概述 199

第二节 梅毒螺旋体 199

一、生物学性状 199

二、致病性 200

三、梅毒螺旋体抗体的产生 201

四、防治原则 202

第三节 梅毒螺旋体显微镜检查 203

第四节 梅毒血清学检验 204

二、USR试验 205

一、VDRL试验 205

三、RPR或TRUST试验 206

四、梅毒特异性抗体酶联免疫试验(TP-ELTSA) 207

五、荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS) 207

六、梅毒螺旋体血凝试验(TPHA) 208

七、梅毒螺旋体抗体快速检测试纸法 209

八、微板自动化TRUST法检测梅毒 212

第五节 梅毒血清学检验方法评价 215

第六节 梅毒血清检验结果的临床意义 217

第七节 梅毒血清学常见的假阳性反应 218

一、血型的概念 220

三、白细胞与血小板的血型 220

二、红细胞血型 220

第一节 人类血型 220

第十一章 血型检验 220

四、血清型 221

五、红细胞酶型 221

六、血型研究的用途 221

第二节 ABO血型 221

一、ABO血型分类 221

二、ABO血型抗原与血型物质 222

三、ABO血型抗体 223

四、ABO血型的亚型 225

五、ABO血型的遗传 227

六、ABO血型的分布 228

七、ABO血型异常 228

八、ABO血型鉴定的应用价值 230

二、红细胞悬液的配制 231

一、血型鉴定标本的采集 231

第三节 血型鉴定 231

九、血型抗原的人工改造 231

三、标准血清的制备和要求 232

四、标准红细胞悬液制备 232

五、国内外血型研究的现状 232

六、ABO血型鉴定方法 233

第四节 Rh血型 239

一、Rh血型的发现和分类 239

二、我国部分族的Rh血型分布 239

三、Rh亚型 241

四、Rh缺失 241

五、Rh抗体 241

六、Rh血型的临床意义 241

七、Rh血型的鉴定 242

一、MNSs血型 244

第五节 红细胞的其他血型 244

二、P血型 245

三、Lewis血型 246

四、Kell血型 248

五、Duffy血型 248

六、Kidd血型 248

七、Lutheran血型 249

八、Diego血型 249

九、Xg血型 249

十、Ii血型 249

第六节 交叉配血试验 251

一、交叉配血试验的目的与配血方法的选择 251

二、盐水配血法 251

三、胶体介质配血法 252

四、木瓜酶配血法 252

六、低离子强度盐水(LISS)配血法 253

五、抗人球蛋白配血法 253

七、大量输血的配血法(平板法) 254

八、急症的配血法 255

九、卡式配血法 255

十、ABO同型之间交叉配血不合时的处理 255

第七节 血型鉴定与交叉配血中常见的错误 255

一、责任性错误 255

二、假阴性反应 256

三、假阳性反应 257

第八节 血型鉴定的特殊试验 260

一、抗人球蛋白试验 260

二、吸收试验 262

三、放散试验 263

第九节 新生儿溶血病的检验 264

一、新生儿溶血病及其血清学鉴定 264

二、对孕(产)妇的检查 264

第十节 冷凝集素试验 265

第十一节 常见错血型及配血不合的原因 266

第十二节 郑州地区无偿献血人群ABO血型分布调查 269

第十三节 无偿献血者中B2亚型的发现及研究分析 270

第十四节 B3亚型造成正反定不符结果分析 271

第十五节 输血反应发生后的检查 272

一、输血反应 272

二、输血反应发生后的检查 273

第十二章 PCR技术在输血检验中的应用 275

第一节 血液检测模式的探讨 275

第二节 PCR的基本技术 278

第三节 乙型肝炎病毒的PCR检测 280

第四节 丙型肝炎病毒的PCR检测 282

一、HCV RNA检测方法一 282

二、HCV RNA检测方法二 284

一、荧光定量PCR的诞生 286

第七节 荧光定量PCR 286

第五节 艾滋病病毒的PCR检测 286

第六节 PCR用于血型基因检测 286

二、荧光定量PCR的原理 287

三、荧光定量PCR的临床应用 289

四、荧光定量PCR的优点比较 289

五、荧光定量PCR的仪器 290

六、荧光定量PCR检测HBV、HCV的操作 290

第十三章 检验仪器与设备 292

第一节 酶标仪 292

一、Beer-Lamber定律 292

二、垂直光路光度测定实验 293

三、垂直光路测定优点的实验探讨 294

四、目前酶标仪在国内的应用情况 296

五、酶标仪的性能评价 297

六、几种常见酶标仪的性能比较 298

第二节 血站安全输血全自动检测系统 301

一、全自动化加样系统 302

二、全自动酶标分析系统 305

三、其他全自动化酶免分析系统 309

四、酶免检测系统的选择 310

第三节 洗板机及其他设备 311

第四节 全自动检验系统操作细则 312

第五节 仪器保养与维护 312

一、洗板机保养维护 312

二、Tecan加样器维护 312

三、BEPⅢ酶免系统维护 313

四、FAME酶免系统维护 313

附录 河南省红十字血液中心检验科主要仪器一览表 313

一、质量术语 314

第十四章 质量控制 314

第一节 质量控制的概念及其重要意义 314

二、与质量控制相关的几个概念之间的关系 315

三、质量控制的意义 316

第二节 采血及其血液成分制备的质量控制 317

一、采血的质量控制 317

二、血液成分制备的质量控制 318

第三节 全血及血液成分的质量控制 319

一、全血质量控制 319

二、浓缩红细胞质量控制 322

三、少白细胞的红细胞质量控制 323

四、洗涤红细胞质量控制 323

五、解冻红细胞质量控制 324

六、浓缩血小板质量控制 325

七、新鲜冰冻血浆质量控制 326

八、冷沉淀质量控制 327

九、标签 328

第四节 原辅材料质量控制 328

一、一次性使用塑料采血袋质量控制 328

二、一次性医用注射器质量控制 330

三、血液检测试剂的质量控制 331

第五节 仪器设备质量控制 333

一、成分离心机质量控制 333

二、储血设备质量控制 334

三、压力蒸汽灭菌器质量控制 335

四、采血混匀秤质量控制 338

五、速冻冰箱质量控制 338

二、采血室和成分室的工艺卫生质量检查 339

三、净化台(室)质量检查 339

第六节 工艺卫生质量检查 339

一、采血人员手指的细菌检查 339

第十五章 输血检验试剂制造及检定 341

第一节 辣根过氧化物酶标记免疫球蛋白结合物制造及检定 341

一、定义、组成及用途 341

二、制造 341

三、成品检定 342

四、保存及有效期 342

五、使用说明 342

第二节 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒制造及检定 343

一、定义、组成及用途 343

二、制造 343

三、成品检定 344

四、保存及有效期 344

五、使用说明 344

二、制造 345

第三节 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒制造及检定 345

一、定义、组成及用途 345

三、成品检定 346

四、保存及有效期 346

五、使用说明 347

第四节 人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒制造及检定 347

一、定义、组成及用途 347

二、制造 347

三、成品检定 348

四、保存及有效期 349

五、使用说明 349

第五节 人类免疫缺陷病毒抗体免疫印染法诊断试剂盒制造及检定 350

一、材料 350

二、试剂盒制造 350

五、使用说明 351

四、保存与有效期 351

三、成品检定 351

第六节 性病实验室玻片试验用抗原制造及检定 352

一、定义、组成及用途 352

二、制造 353

三、成品检定 353

四、保存及有效期 354

第七节 梅毒快速血浆反应素诊断试剂制造及检定 354

一、定义、组成及用途 354

二、制造 354

三、成品检定 355

四、保存及有效期 355

五、使用说明 355

二、制造 356

一、定义、组成及用途 356

第八节 梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂制造及检定 356

三、成品检定 357

四、保存及有效期 357

五、使用说明 357

第九节 冻干梅毒螺旋体血凝试验试剂盒制造及检定 358

一、菌种 358

二、抗原 358

三、红细胞制备 358

四、半成品检定 359

五、分装和冻干 359

六、成品检定 359

七、保存与有效期 359

八、使用说明 360

一、定义、组成及用途 361

二、制造 361

第十节 抗A、抗B血型定型试剂(人血清)制造及检定 361

三、成品检定 362

四、保存及有效期 363

五、使用说明 364

第十一节 抗A、抗B血型定型试剂(马血清)制造及检定 364

一、定义、组成与用途 364

二、制造 365

三、成品检定 366

四、保存及有效期 367

五、使用说明 367

第十二节 抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)制造及检定 368

一、定义、组成及用途 368

二、制造 368

三、成品检定 370

五、使用说明 371

四、保存及有效期 371

第十六章 Tecan全自动加样系统编程 373

第一节 简介说明 373

第二节 设置 373

一、系统要求 373

二、加样设备 373

三、软件安装 374

第三节 位置定义 374

一、定义位置 375

二、板架 377

第四节 定义加样程序 383

一、液体参数 384

二、清洗模式 391

三、一次性加样针模式 393

四、组 394

五、步骤 395

六、命令 397

第五节 Method 405

一、Main Windows 406

二、Sample Source and Operation Mode 408

三、Process Option 409

四、Automatic Option 410

五、POS-ID Option 411

六、Database Option 411

七、Export Option 411

八、Wash/DITI Option 412

九、Special Option 412

十、Strategy Option 413

十一、Barcode Option 414

第六节 数据库 414

一、主窗口 415

二、记录排序 416

三、增加记录 416

四、选择记录 417

五、删除记录 417

六、改变状态 417

第七节 Rack Files 417

第八节 Pipetting 420

一、开始加样 421

二、Layout of the inbstrument 423

三、加样过程中可能出现的错误 424

第十七章 澳之风TM(AusFineTM)酶标管理软件简介 425

第一节 系统的总体介绍 425

一、主要功能和特点 425

二、安装软件的相关配置 425

一、系统安装 426

第二节 系统使用编程 426

二、使用简介 427

三、系统设置 427

四、浏览条功能 427

五、系统维护 427

六、检验员操作 431

七、数据查询操作 431

八、试验方法编程 434

第十八章 AT Win软件的编程 438

第一节 AT Win软件的安装 438

一、电脑配置 438

二、硬件配置 438

三、安装AT Win软件 439

第二节 AT Win方法的编辑 443

一、容器编辑 443

二、方法编辑 447

第三节 日常工作 456

一、启动和初始化 456

二、日常工作 457

附录 465

附录一 进口检验仪器常见英文单词短语翻译 465

一、Tecan常见英文单词短语 465

二、BEPⅢ常见英文单词、短语 468

三、AT/FAME系统常见英文单词、短语 471

四、酶标仪常见英文单词、短语 472

五、洗板机常见英文单词、短语 474

六、常见检验专业术语解释 475

附录一 供血者健康检查标准 478

附录三 输血检验操作制度 481

附录四 输血检验中的安全问题 483

附录五 统计图 486