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现代发酵微生物实验技术PDF电子书下载
- 电子书积分:9 积分如何计算积分?
- 作 者:诸葛斌,诸葛健主编
- 出 版 社:北京:化学工业出版社
- 出版年份:2011
- ISBN:9787122102997
- 页数:169 页
第一章 显微技术 1
第一节 显微观察 1
一、相差显微镜 1
实验1-1相差显微镜的使用 1
二、荧光显微镜 3
实验1-2荧光显微镜的使用 5
三、电子显微镜 7
实验1-3细菌、酵母菌超薄切片的透射电镜观察 8
实验1-4噬菌体的透射电镜观察 10
实验1-5质粒DNA的透射电镜观察 10
实验1-6酵母细胞的扫描电镜观察 13
第二节 显微摄影 14
实验1-7显微摄影、菌落摄影和凝胶摄影 15
第三节 放射自显影 18
实验1-8硝酸纤维素滤纸上标记DNA的放射自显影 18
第四节 显微操作技术用于单细胞分离 19
实验1-9显微操纵器用于单细胞分离 20
实验1-10显微操纵器用于酵母子囊的解剖及子囊孢子单孢化 21
实验1-11玻璃微型工具的制作 22
第五节 流式细胞仪测定细胞核内DNA的含量 23
实验1-12流式细胞仪计数法 24
第二章 微生物细胞特殊结构的观察 25
第一节 染色技术 25
一、染色的基本原理 25
二、染料 25
三、染色 26
实验2-1真菌的荧光染色与观察 26
第二节 细胞主要结构成分的分离与观察 28
实验2-2革兰阳性细菌细胞壁的制备 29
实验2-3酵母细胞壁甘露聚糖的制备 30
实验2-4细胞壁的形态观察 31
实验2-5革兰阴性菌细胞外膜蛋白的分离 32
实验2-6细菌荚膜的观察 33
实验2-7细菌鞭毛的观察 33
实验2-8微生物细胞核的观察 35
实验2-9细菌染色体DNA的分离与观察 36
实验2-10异染颗粒的观察 37
实验2-11酵母细胞内脂肪颗粒和肝糖颗粒的观察 38
实验2-12酵母液泡及线粒体的提取 39
第三节 芽孢、子囊孢子和假菌丝的观察 42
一、芽孢 42
实验2-13细菌芽孢形成及发芽的观察 44
实验2-14伴孢晶体的观察 44
二、酵母子囊孢子 45
实验2-15酵母子囊孢子的形成及观察 45
实验2-16酿酒酵母单倍体细胞的制备与鉴定 46
三、流式细胞术 47
实验2-17酿酒酵母染色体倍性鉴定 48
四、酵母假菌丝 48
实验2-18酵母假菌丝的观察 49
第三章 噬菌体 50
实验3-1噬菌体的分离与纯化 52
实验3-2高效价噬菌体原液的制备 53
实验3-3溶源菌的鉴定 54
实验3-4抗噬菌体产α-淀粉酶菌株的选育 55
第四章 标记菌种的获得与应用 56
第一节 富集培养技术在获得标记菌种中的应用 56
一、营养缺陷型富集法在原核细胞中的应用 56
实验4-1芽孢杆菌营养缺陷型的筛选 56
二、营养缺陷型富集法在真核细胞中的应用 58
实验4-2酵母营养缺陷型的筛选 59
实验4-3青霉菌营养缺陷型菌株的筛选 59
三、浓度梯度法富集抗性突变株 60
四、富集法在研究次级代谢的重组DNA技术中的应用 61
第二节 营养缺陷型标记菌种的获得 62
一、诱变方法 62
二、淘汰野生型 62
三、检出缺陷型 62
四、营养缺陷型生长谱的确定 63
实验4-4芽孢杆菌营养缺陷型生长谱的确定 65
第三节 呼吸缺陷型标记菌种的获得 66
实验4-5酵母呼吸缺陷型的筛选 67
第四节 抗反馈调节抗性突变株的获得与应用 67
实验4-6氨基酸抗反馈调节突变株的选育 69
第五章 原生质体系列育种技术 71
第一节 工业菌种育种的策略 71
第二节 原生质体融合育种 72
一、原生质体融合育种的特点 72
二、原生质体融合育种步骤与要点 74
三、原生质体再生率和融合率的计算 77
实验5-1芽孢杆菌的原生质体融合 77
实验5-2链霉菌原生质体融合 78
实验5-3小单胞菌的原生质体融合 80
实验5-4酿酒酵母的原生质体融合 81
实验5-5丝状真菌的原生质体融合 82
第三节 原生质体转化育种 85
实验5-6芽孢杆菌原生质体转化 86
实验5-7质粒DNA转化链霉菌原生质体 86
实验5-8酿酒酵母的原生质体转化法 87
实验5-9真菌原生质体转化 88
第四节 原生质体诱变育种 90
实验5-10芽孢杆菌种间融合子F-26-2原生质体诱变育种 90
实验5-11紫外线诱变原生质体选育L谷氨酸高产菌 90
第五节 原生质体技术中的一些特殊技术 92
一、紫外线照射原生质体增加融合率 92
二、供体原生质体的热灭活 92
三、原生质体电融合技术 93
实验5-12电诱导酵母原生质体融合 93
四、遗传转移 93
实验5-13原生质体融合法转移酵母线粒体及杀伤质粒 94
第六章 基因工程育种技术 96
第一节 基因工程的基本过程和原理 96
一、载体 96
二、DNA重组用酶 98
第二节 大肠杆菌基因工程 102
一、大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 102
实验6-1用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌 103
实验6-2用氯化钙制备感受态大肠杆菌 104
实验6-3用PEG制备和转化大肠杆菌感受态细胞 104
实验6-4大肠杆菌的电击转化 105
二、大肠杆菌中质粒的提取与纯化 106
实验6-5质粒的大量提取与纯化 106
实验6-6质粒的小量提取 107
实验6-7用硅胶膜分离法小量提取质粒 108
三、外源基因在大肠杆菌中的高表达 109
实验6-8载体和基因的酶切 111
实验6-9基因与载体的连接 112
第三节 非大肠杆菌微生物基因工程 115
一、芽孢杆菌基因工程 115
实验6-10枯草杆菌感受态细胞的制备和转化 117
实验6-11枯草杆菌染色体DNA的提取 117
实验6-12枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)碱性果胶酶基因的PCR扩增 118
实验6-13从电泳凝胶中分离枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)碱性果胶酶基因 119
实验6-14枯草杆菌转化子质粒的提取和检测 119
实验6-15地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化 120
二、酵母基因工程 121
实验6-16酵母染色体DNA的提取 122
实验6-17酿酒酵母的乙酸锂完整细胞转化法 123
实验6-18单链载体DNA的制备 124
实验6-19酵母菌质粒DNA的提取 124
实验6-20碱性果胶酶基因重组巴斯德毕赤酵母的构建 125
实验6-21羟酸还原异构酶基因多拷贝重组啤酒酵母的构建 129
第四节 其他基因工程育种常用技术 130
实验6-22酿酒酵母W303甘油酯酶GPP2基因敲除技术 130
实验6-23粗糙脉孢菌漆酶基因的定点突变技术 131
第五节 蛋白质纯化技术 133
实验6-24利用His标签进行Ni柱纯化甘油脱氢酶的分离技术 133
实验6-25离子交换色谱技术分离纯化蛋白质 135
第七章 微生物细胞固定化方法 137
第一节 载体结合法 137
一、表面吸附法 138
二、共价结合法 138
实验7-1 Amycolatopsis sp.ST2710的载体固定化 138
第二节 交联法 139
第三节 包埋法 140
一、藻酸钙凝胶包埋法 140
实验7-2酿酒酵母的藻酸钙固定化 141
实验7-3固定化枯草杆菌连续生产耐热α-淀粉酶 143
二、к-角叉胶包埋法 143
实验7-4к-角叉胶一步包埋法 144
实验7-5к-角叉胶二步包埋法 145
实验7-6固定化酵母连续生产酒精 146
实验7-7固定化细胞的回收与活细胞计数 146
三、聚丙烯酰胺凝胶包埋法 147
实验7-8大肠杆菌的聚丙烯酰胺凝胶固定化 147
四、光交联树脂前聚体包埋法 148
实验7-9光交联树脂固定化原生质体 148
第八章 菌种保藏方法与机构 149
第一节 菌种的退化与防治措施 149
一、菌种退化的现象及原因 149
二、防止退化措施 150
第二节 常用菌种保藏 151
一、菌种保藏的原理 151
二、常用的菌种保藏方法 151
实验8-1斜面保藏法 151
实验8-2液体石蜡保藏法 152
实验8-3载体保藏法 152
实验8-4甘油管低温保藏法 154
实验8-5液氮冷冻保藏法 154
实验8-6真空冷冻干燥保藏法 156
第三节 基因工程菌的保藏 157
第四节 著名菌种保藏及专利菌种保藏机构 158
一、中国微生物菌种保藏管理委员会组织系统 158
二、国际著名菌种保藏机构 159
三、国际确认的专利菌种保藏机构(IDA) 167
参考文献 169
- 《钒产业技术及应用》高峰,彭清静,华骏主编 2019
- 《大学计算机实验指导及习题解答》曹成志,宋长龙 2019
- 《生物质甘油共气化制氢基础研究》赵丽霞 2019
- 《现代水泥技术发展与应用论文集》天津水泥工业设计研究院有限公司编 2019
- 《异质性条件下技术创新最优市场结构研究 以中国高技术产业为例》千慧雄 2019
- 《培智学校义务教育实验教科书教师教学用书 生活适应 二年级 上》人民教育出版社,课程教材研究所,特殊教育课程教材研究中心编著 2019
- 《Prometheus技术秘笈》百里燊 2019
- 《中央财政支持提升专业服务产业发展能力项目水利工程专业课程建设成果 设施农业工程技术》赵英编 2018
- 《药剂学实验操作技术》刘芳,高森主编 2019
- 《林下养蜂技术》罗文华,黄勇,刘佳霖主编 2017