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第一章 液相色谱法的基本原理 1

第一节 引言 1

第二节 色谱法的分类 1

一、按定相和动相的物态分类 2

二、按实验技术分类 2

三、按分离的机制分类 2

(一)吸附色谱 2

(二)分配色谱 2

(三)离子交换色谱 2

(四)凝胶过滤色谱 3

(五)其它 3

四、按洗脱方式分类 3

(一)洗脱 3

(二)迎头分析 4

(三)置换 4

第三节 色谱法分离的过程 4

第四节 色谱柱及色谱图的重要参数 5

一、色谱柱参数 5

二、色谱图参数 5

第五节 液相色谱的基本理论 6

一、分布常数和质量分布比 6

二、总保留体积与分布常数的关系 7

三、理论塔板和理论塔板高度 7

四、分辨率 8

五、分辨率的另一表示方法 8

六、柱效率 9

(一)涡流扩散 9

(二)分子扩散 10

(三)传质 10

(四)动相流速 11

(五)定相颗粒大小 11

第六节 洗脱峰不对称及其原因 11

一、吸附等温线的类型 11

二、样品量对色谱峰的影响 11

第七节 多组份的分离 12

一、洗脱的一般问题 12

二、有限峰容量问题 14

附录 14

参考文献 16

第二章 离子交换树脂色谱法 17

第一节 引言 17

第二节 离子交换树脂 17

一、强酸性阳离子交换树脂 18

二、强碱性阴离子交换树脂 18

三、弱酸性阳离子交换树脂 19

四、弱碱性阴离子交换树脂 19

第三节 离子交换树脂色谱法的基本原理 25

第四节 离子交换树脂色谱技术 26

一、树脂的选择 26

(一)树脂的类型 27

(二)交联度 27

(三)粒度和形状 27

(四)比重 28

(五)交换量 28

(六)稳定性 28

二、树脂的处理、再生与转型 28

三、离子交换柱的选择 30

四、装柱 30

五、洗脱与收集 30

第五节 离子交换树脂基本性能的测定 31

一、粒度的测定 31

二、含水量的测定 31

三、湿真比重的测定 32

四、交换容量的测定 32

第六节 离子交换树脂在生产和科学研究中的应用实例 34

一、碱性氨基酸的分离制备 34

二、谷氨酸的分离制备 37

三、单核苷酸的分离制备 41

参考文献 41

第三章 离子交换纤维素色谱法 42

第一节 离子交换纤维素的种类 42

第二节 基本原理 44

第三节 色谱分离条件的选择 45

一、离子交换纤维的素的选择 45

(一)类别的选择 45

(二)颗粒大小的选择 45

二、缓冲液的选择 45

第四节 操作步骤 47

一、柱色谱装置 47

二、离子交换纤维素的处理 48

(一)过筛 48

(二)酸、碱处理 48

(三)平衡 48

(四)再生 48

(五)其它 48

三、装柱 49

四、加样 49

五、洗脱 50

(一)阶段洗脱 50

(二)梯度洗脱 50

六、流速及其控制 53

七、洗脱液分析 53

八、洗脱峰纯度鉴定 54

九、脱盐和浓缩 54

第五节 应用实例 54

一、NADP甘露脱氢酶的分离纯化 54

二、人血清免疫球蛋白的分离 56

三、免Υ球蛋白的木瓜蛋白酶水解物的分离 56

附录：离子交换交联葡聚糖和特种离子交换剂 56

一、离子交换交联葡聚糖 56

二、特种离子交换剂 58

三、应用实例 58

参考文献 60

第四章 凝胶过滤色谱法 61

第一节 引言 61

第二节 分子筛原理 61

一、分子筛的基本原理 61

二、几个名词的含义 63

三、分子筛分配系数与分子量的关系 63

第三节 凝胶 66

一、交联葡聚糖 66

二、聚丙烯酰胺凝胶 68

三、琼脂糖 69

第四节 实验操作 70

一、柱 70

二、装柱 71

三、上柱、洗脱与收集 72

四、样品洗脱峰的检测 74

第五节 分子量的测定 75

一、外水体积与内水体积的测定 76

二、kd对IgM的标准线的测定 77

三、方法的局限性 80

第六节 生物高分子的分离纯化 80

一、凝胶的选择 80

二、柱的选用 81

三、洗脱条件 82

第七节 脱盐 82

一、脱盐用的凝胶 82

二、柱的尺寸 83

第八节 蛋白质解离缔合体系的研究方法 83

一、慢缔合体系 84

二、快缔合体系 84

第五章 纸色谱法 87

第一节 基本原理 87

第二节 影响Rf值的主要因素 90

一、样品本身的性质 90

二、溶剂的性质 92

三、pH 92

四、展层温度 92

五、滤纸的性质 93

第三节 实验方法 95

一、滤纸的选择 95

二、溶剂的选择 95

三、样品的制备及加样 95

四、展层方式 96

五、色谱的检出 97

(一)化学方法 97

(二)物理方法 98

(三)微生物法 98

(四)放射性法 98

六、定性检定Rf值的测定 99

七、定量方法 100

(一)洗脱比色法 100

(二)斑点面积法 100

第四节 应用 101

一、多肽及蛋白质的氨基酸分析 101

(一)样品处理 101

(二)点样量 102

(三)展层 102

(四)显色：定性检定 103

(五)定量测定 109

二、糖类的分析 110

(一)单糖和二糖 110

(二)低聚糖和多糖 113

三、脂族酸的分析 114

(一)挥发性脂族酸 114

(二)非挥发性的水溶性脂族酸 115

(三)α-酮酸 117

四、核酸降解物(核苷酸、嘌呤、嘧啶碱基)的分析 119

(一)样品制备 119

(二)色谱分离 119

(三)显色：定性检定 121

(四)定量测定 122

五、抗生素、磺胺类和维生素类的分析 123

(一)青霉素、链霉素等的分析 123

(二)碘胺类的分析 124

(三)维生素类的分析 125

六、有关氨基酸、糖类、脂族酸、嘌呤、嘧啶以及维生素等的其它显色试剂和显色方法 127

(一)氨基酸 127

(二)糖类 129

(三)脂族酸 131

(四)嘌呤、嘧啶等 131

(五)维生素 132

参考文献 133

第六章 薄层色谱法 134

第一节 引言 134

第二节 薄层色谱法的基本原理及其类型 135

第三节 吸附剂的选择和处理 136

一、吸附剂的性能 136

二、吸附剂的处理 137

(一)硅胶 137

(二)氧化铝 138

(三)纤维素 138

(四)葡聚糖 141

(五)聚酰胺 141

第四节 薄层色谱操作技术 143

一、薄板的制备 143

(一)薄板的制备 143

(二)涂布法 144

(三)烧结玻璃板法 144

二、点样 146

三、展层 147

(一)展层剂的选择 147

(二)展层装置 149

(三)展层操作方法 151

四、显色和被检物的检定 152

(一)显色 152

(二)喷雾法 153

(三)Rf值 153

五、薄层色谱图的分析 154

第五节 薄层色谱的定量分析 155

一、洗脱后测定法 155

(一)重量法 156

(二)分光光度法 156

(三)荧光法 158

二、板上测定法 158

第六节 薄层色谱法的应用 159

一、氨基酸和肽及基衍生物的分离 160

二、核酸及核酸类物质的分离 163

三、糖类物质的分离 165

四、类脂物质的分离 167

五、激素物质的分离 170

附录：氨基酸、核苷酸、糖类、脂类和激素薄层色谱参数 173

参考文献 184