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第一篇 抗体的制备、纯化及标记 3

一、免疫血清的制备及效价检测 3

实验1 弗氏佐剂的制备及与抗原的混合 3

实验2 抗原免疫兔子 5

实验3 免疫血清的分离与保存 6

实验4 双向琼脂扩散试验检测兔抗羊IgG血清效价 8

实验5 凝集实验检测兔抗大肠杆菌抗血清效价 10

二、单克隆抗体的制备 12

实验6 单克隆抗体的制备 12

三、抗体的纯化 18

实验7 盐析法纯化免疫球蛋白 18

实验8 亲和柱层析法纯化免疫球蛋白 20

实验9 SDS-PAGE法检测免疫球蛋白纯度 22

四、抗体的标记 25

实验10 异硫氰酸荧光素标记IgG抗体 25

实验11 R-藻红蛋白标记IgG抗体 26

实验12 辣根过氧化物酶标记IgG抗体 28

实验13 生物素标记IgG抗体 30

第二篇 利用标记抗体进行的检测 35

一、免疫荧光法 35

实验14 直接免疫荧光法标记人T细胞 35

实验15 间接免疫荧光法检测大肠杆菌 37

实验16 免疫荧光法显示细胞的微管 38

二、酶免疫测定 41

实验17 间接ELISA检测兔抗羊IgG抗体效价 43

实验18 夹心ELISA法检测小鼠血清IL-2 46

实验19 酶联免疫斑点试验检测IFN-γ分泌细胞数目 48

实验20 ELISPOT法检测小鼠脾脏抗羊IgG抗体形成细胞数目 50

实验21 应用免疫组化ABC法检测小鼠脾脏Thy1.2阳性细胞的分布 51

实验22 免疫印迹试验 53

第三篇 免疫细胞的分离与鉴定 59

一、免疫细胞分离 59

实验23 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 61

实验24 Percoll不连续密度梯度离心法分离NK细胞 63

实验25 小鼠脾脏淋巴细胞分离及活率测定 65

实验26 肿瘤浸润淋巴细胞的制备 66

实验27 黏附法分离单核细胞和淋巴细胞 68

实验28 尼龙毛柱法分离T细胞与B细胞 69

实验29 E-花环形成法从单个核细胞中分离T细胞 71

实验30 免疫磁珠分选法分离小鼠脾脏CD4＋T淋巴细胞 73

实验31 流式细胞仪检测小鼠IFN-γ分泌细胞 74

实验32 小鼠髓源性DC的分离及诱导培养 76

二、免疫细胞鉴定 79

第四篇 机体免疫功能检测 83

一、细胞吞噬相关功能检测 83

实验33 体外试管法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验 83

实验34 中性红法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能 85

实验35 利用流式细胞仪检测巨噬细胞吞噬活性 87

实验36 巨噬细胞一氧化氮产生量的测定 88

实验37 中性粒细胞呼吸爆发的检测 90

二、细胞增殖及活力检测 92

实验38 MTT比色法检测淋巴细胞活力 92

实验39 ATP生物荧光检测法检测抗癌药物对肿瘤细胞活力的影响 94

三、细胞介导的细胞毒试验 96

实验40 51Cr释放试验 97

实验41 乳酸脱氢酶释放试验 98

实验42 涂片染色法检测凋亡细胞 100

实验43 Annexin V-FITC/PI双染色法检测凋亡细胞 102

实验44 凋亡细胞DNA电泳 104

实验45 TUNEL技术检测凋亡细胞 106

四、APC抗原提呈功能分析 110

实验46 树突状细胞抗原提呈能力检测 110

五、免疫球蛋白的定量 112

实验47 单向免疫扩散法检测小鼠血清IgG、IgM、IgA 112

实验48 夹心ELISA法检测小鼠肠液中分泌型IgA水平 114

六、补体的细胞毒作用检测 116

实验49 补体的细胞毒作用检测 116

参考文献 118

附录一 常用溶液配制方法 121

附录二 荷瘤小鼠模型建立方法 123

一、腹水瘤小鼠模型建立方法 123

二、小鼠移植性实体瘤模型的建立 124

附录三 南京大学生命科学学院本科生免疫学实验教学内容及安排 126