盐芥应答非生物胁迫的蛋白质组学分析PDF电子书下载

第一章 绪论 1

1.1 植物应答非生物逆境的蛋白质组学研究 1

1.1.1 植物蛋白质组学研究的意义 1

1.1.2 植物应答非生物逆境的蛋白质组学研究进展 3

1.1.3 植物蛋白质组学领域存在的问题和对未来的展望 19

1.2 植物耐受非生物逆境研究模式植物——盐芥 21

1.2.1 盐芥的基本生物学特征 21

1.2.2 盐芥是植物耐受非生物逆境研究的理想模型 22

1.2.3 盐芥耐受非生物逆境机理研究进展 23

1.3 科学问题的提出和整体试验设计 25

第二章 盐芥应答高盐胁迫的蛋白质组学分析 27

2.1 材料与方法 29

2.1.1 植物材料与胁迫处理 29

2.1.2 生理指标的测定 30

2.1.3 蛋白提取和蛋白定量 30

2.1.4 双向电泳、染色、扫描和软件分析 31

2.1.5 胶内酶解和质谱分析 33

2.1.6 统计处理 34

2.2 结果与讨论 35

2.2.1 盐芥对于高盐胁迫的生理反应 35

2.2.2 盐芥叶片总蛋白响应短期高盐胁迫的蛋白质组学分析 37

2.2.3 盐芥根总蛋白响应短期高盐胁迫的蛋白质组学分析 53

2.2.4 盐芥叶片总蛋白响应长期高盐胁迫的蛋白质组学分析 74

第三章 盐芥响应高盐胁迫的磷酸化蛋白质组学分析 84

3.1 材料与方法 85

3.1.1 植物材料与胁迫处理 85

3.1.2 蛋白提取和蛋白定量 85

3.1.3 双向电泳、染色、扫描和软件分析 86

3.1.4 胶内酶解和质谱分析 86

3.2 结果 86

3.2.1 盐芥根总蛋白的双向电泳和磷酸化染色分析 86

3.2.2 差异磷酸化蛋白点的质谱鉴定 88

3.3 讨论 95

第四章 盐芥根响应高盐胁迫的基因差异表达分析 101

4.1 材料和方法 102

4.1.1 植物材料与胁迫处理 102

4.1.2 cDNA合成和纯化 103

4.1.3 抑制消减杂交 106

4.1.4 制备消减杂交文库 106

4.1.5 EST测序和序列分析 106

4.2 结果 107

4.2.1 短期高盐胁迫的EST文库的构建和序列分析 107

4.2.2 EST序列的功能分类分析 107

4.3 讨论 113

4.3.1 与盐芥其他EST的比较 113

4.3.2 盐芥根对高盐胁迫的感受、信号转导和基因调控 114

4.3.3 根功能的维持参与盐芥根对高盐胁迫的耐受 118

4.3.4 生长素介导的信号通路参与盐芥根对高盐胁迫的耐受 120

第五章 盐芥高盐响应基因enolase的克隆及初步分析 122

5.1 材料与方法 123

5.1.1 RNA提取和cDNA的合成 123

5.1.2 3’RACE获得基因全长 123

5.1.3 原核表达 124

5.1.4 生物信息学分析 125

5.2 结果和分析 126

5.2.1 全长序列的克隆 126

5.2.2 生物信息学分析 127

5.2.3 融合蛋白的表达和纯化 129

第六章 盐芥响应低温、干旱胁迫的蛋白质组学分析 132

6.1 材料与方法 134

6.1.1 植物材料与胁迫处理 134

6.1.2 生长和生理指标的测定 135

6.1.3 蛋白提取、定量和双向电泳 135

6.1.4 Western blot分析 135

6.1.5 实时定量PCR分析 136

6.1.6 统计处理 137

6.2 结果与讨论 138

6.2.1 盐芥对于低温和干旱胁迫的生理反应 138

6.2.2 盐芥叶片可溶性总蛋白的应答低温胁迫的双向电泳分析 140

6.2.3 盐芥叶片低温胁迫差异表达蛋白的质谱鉴定 143

6.2.4 盐芥叶片应答低温胁迫的代谢调整分析 152

6.2.5 盐芥低温响应蛋白mRNA水平和蛋白表达水平的对比分析 164

6.2.6 盐芥叶片总蛋白响应干旱胁迫的双向电泳分析和质谱鉴定 166

6.2.7 干旱胁迫对盐芥叶片蛋白质组的影响 168

6.2.8 盐芥叶片应答干旱胁迫的代谢调整分析 171

附录 174