神经药理学研究技术与方法PDF电子书下载

第1节　概述 1

第2节　培养神经细胞的设备与材料 1

目录 1

第1章　神经细胞培养与检测 1

三、实验材料 2

二、实验设备 2

一、实验室 2

一、神经细胞培养的准备 3

第4节　神经细胞原代分散培养 3

第3节　神经细胞培养类型 3

一、器官培养 3

二、组织块培养 3

三、细胞分离培养 3

三、神经细胞的分散培养（方案之二） 4

二、神经细胞的分散培养（方案之一） 4

四、分离细胞悬液的接种密度和活性评估 5

六、培养神经细胞的鉴别与定性 6

五、培养神经细胞的形态学观察 6

七、神经胶质细胞培养 7

二、神经胶质细胞及细胞株的再培养与保存 9

一、神经细胞株培养 9

第5节　神经细胞株培养 9

三、高钾毒性模型 10

二、过氧化氢（H2O6）损伤模型 10

第6节　培养神经细胞的病理模型 10

一、低糖低氧模型 10

二、细胞活力测定 11

一、形态学观察 11

四、谷氨酸毒性模型 11

五、NO毒性模型 11

六、Aβ毒性模型 11

第7节 培养神经细胞的测定指标与方法 11

三、蛋白总量分析 13

六、电生理特性测定 14

五、羰基化蛋白检测 14

四、DNA损伤检测 14

十、免疫组化研究 15

九、培养神经细胞电特性测定方法和离子通道的膜片钳测定方法 15

七、培养神经细胞的受体反应 15

八、培养神经细胞的突触反应 15

第8节　细胞悬液标本蛋白质定量方法 16

二、双缩脲法 17

一、凯氏定氮法 17

三、Folin（福林）-酚试剂法 18

五、考马斯亮蓝G-250染色法 19

四、紫外分光光度法 19

第9节　培养神经细胞的药理学研究方法评价 20

六、BCA法 20

第1节　概述 22

第2章　神经细胞凋亡 22

一、细胞形态学研究方法 23

第3节　抗神经细胞凋亡药理学研究指标及方法 23

第2节　神经细胞凋亡模型制作方法 23

一、大脑皮层或海马神经元的原代培养． 23

二、小脑颗粒神经细胞的原代培养 23

三、神经细胞凋亡模型 23

二、生物化学研究方法 28

三、分子生物学研究方法 30

四、末端标记法 31

第4节　抗神经细胞凋亡研究方法评价 34

三、突触小体（synaptosome）制备 36

二、脑匀浆（homogenate）制备 36

第3章　神经递质、调质和神经肽 36

第1节　概述 36

第2节　神经标本制备 36

一、试剂与设备 36

第3节 单胺类递质摄取的测定 37

五、离体脑片制备 37

四、粗制线粒体的制备 37

一、HPLC-EC检测法 39

第4节 离体脑组织单胺类神经递质及其代谢产物测定法 39

二、气相色谱测定法 45

三、荧光分光光度测定法 47

四、同位素测定法 52

一、生物检定法 53

第5节 脑内组胺测定方法 53

三、酶-同位素法 54

二、荧光测定法 54

第6节 松果体褪黑素的高效液相测定 55

一、自动分析仪测定法 56

第7节 脑内氨基酸的测定方法 56

二、高效液相色谱测定法 57

四、血、脑色氨酸和酪氨酸荧光微量测定法 58

三、荧光法测定脑细胞谷氨酸释放 58

一、推挽灌流法 59

第8节 在体脑组织递质释放研究方法 59

二、脑内微透析法 60

三、测定步骤 64

二、受体制备 64

第9节 放射受体分析法测定配体和肽类物质 64

一、基本原理 64

五、注意事项 65

四、方法应用 65

一、放射受体分析法 66

第10节 脑内啡肽的测定方法 66

六、方法评价 66

二、放射免疫分析法 67

三、标记化合物的制备 69

二、抗血清的制备 69

第11节 P物质放射免疫测定方法 69

一、免疫原的制备 69

五、标准曲线的制作及样品测定 70

四、脑组织标本的制备 70

六、抗血清质量鉴别 71

一、HPLG-RE-ECD法测定乙酰胆碱 72

第12节 乙酰胆碱的检测 72

七、注意事项 72

二、乙酰胆碱的放射免疫测定法 74

三、全血胆碱酯酶活性测定 76

二、细胞内Ca2＋的调节及钙通道类型 79

一、钙的生理及病理学意义 79

第4章 神经细胞内钙及钙结合蛋白 79

第1节 细胞内游离钙的测定 79

三、实验标本制备 80

四、细胞内游离Ca2＋测定 81

一、放射性标记法测定内钙释放 85

第2节 细胞内钙释放 85

二、荧光分光光度法测定三磷酸肌醇刺激的内钙释放 87

一、钙调素 88

第3节 钙结合蛋白 88

三、IP3受体测定 88

二、钙结合蛋白 95

三、钙调素结合蛋白 96

一、双管离子选择电极制备 98

第4节 整体动物脑细胞外钾、钙离子水平测定 98

四、应用实例——胶质细胞毒素对脑细胞外钾离子水平的影响 99

三、细胞外K＋或Ca2＋水平测定 99

二、标准曲线制备 99

二、线粒体呼吸功能测定 102

一、脑线粒体提取制备 102

第5章 脑能量代谢与线粒体功能 102

第1节 概述 102

第2节 能量代谢研究方法 102

四、ATP酶活性测定 103

三、线粒体呼吸链酶复合体活性测定 103

六、线粒体膜电位（△ψ）的测定 104

五、抗氧化酶（SOD）活性测定 104

十二、线粒体活性成分测定 105

十一、线粒体肿胀测定 105

七、线粒体内游离钙测定 105

八、线粒体细胞色素C含量测定 105

九、膜流动性测定 105

十、线粒体鉴定 105

十三、刃天青法检测线粒体功能 106

一、过氧化脂质（LPO）测定 109

第2节 脂质过氧化产物测定 109

第6章 神经细胞氧化性应激 109

第1节 概述 109

二、脑细胞膜流动性检测 111

三、脂褐素测定 112

四、脂质过氧化氢含量测定 113

五、谷胱甘肽（GSH）测定-柱前衍生液相色谱法 114

一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定 115

第3节 过氧化酶活性测定 115

三、过氧化物酶（POD）活性测定 116

二、过氧化氢酶（CAT）活性测定 116

五、单胺氧化酶活性测定 117

四、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性测定 117

一、DMSO氧化生成甲醛分光光度法 118

第4节 自由基浓度测定 118

三、高效液相（HPLC）电化学检测法 119

二、化学发光法 119

五、自由基捕捉技术 120

四、顺磁共振法 120

一、概述 122

第1节 一氧化氮及其合成酶 122

第7章 神经细胞应激与一氧化氮及一氧化碳 122

三、Griess反应法 123

二、电化学方法 123

四、正铁血红蛋白分光光度法 124

六、荧光检测法 126

五、鲁米诺化学发光法 126

七、高效液相色谱法 129

八、高效液相荧光检测法测定神经元突触体胞液NOS活性 131

十、NADPH-黄递酶（NADPH-d）组化染色法 132

九、电子顺磁共振 132

十二、原位杂交等分子生物学技术 133

十一、免疫组织（细胞）化学法 133

十五、生物学方法 134

十四、cGMP测定法 134

十三、NO间接测定法-L-Arg转化实验 134

十七、NO3-（过氧化亚硝酸根阴离子）测定 135

十六、细胞内NO浓度（［NO］i）测定 135

十八、NO毒性实验 136

二、CO的生物来源和代谢过程 137

一、概述 137

第2节 一氧化碳及其合成酶 137

四、CO的测定方法 138

三、调控CO产生的方法 138

五、血红素氧合酶的测定技术 139

六、CO的神经作用观察 141

一、神经营养物质 144

第2节 神经营养物质及其受体 144

第8章 神经营养因子 144

第1节 概述 144

四、神经营养物质和突触可塑性 145

三、神经营养物质的生理作用 145

二、神经营养物质受体 145

一、鼠的NGF 146

第3节 神经生长因子的纯化 146

五、神经营养物质和Trk受体基因敲除小鼠 146

第4节 体外神经营养因子的活性测定 147

二、人β-NGF的纯化 147

二、体外培养细胞中神经营养因子活性的测定 148

一、神经突起向外生长的测定 148

二、神经营养物质的酶联免疫分析 149

一、神经营养物质的提取 149

第5节 神经营养物质的提取和定量 149

第6节 神经营养物质mRNA的定量 150

二、实验步骤 151

一、实验前准备 151

三、注意事项 152

二、实验过程 153

一、实验前准备 153

第7节 免疫组织化学法检测神经营养物质在中枢神经系统的表达 153

三、注意事项 154

第2节 相关概念 156

第1节 概述 156

第9章 神经干细胞 156

一、神经干细胞培养 157

第3节 神经干细胞研究方法学 157

二、神经干细胞的冷冻保藏与复苏 158

三、神经干细胞的免疫组织化学鉴定法 159

一、细胞内记录技术基本原理 161

第1节 玻璃微电极细胞内记录技术 161

第10章 神经细胞离子通道电生理学 161

三、细胞内记录技术的潜在误差及局限性 162

二、活体细胞内记录及染色技术 162

一、膜片钳技术原理 163

第2节 神经细胞膜片钳技术原理及方法 163

二、离子通道电流的记录方法 166

三、神经细胞离子通道的研究 167

四、电流和电压的命名规则 171

一、脑片膜片钳技术简介 172

第3节 脑片膜片钳研究技术与方法 172

二、脑片膜片钳技术方法 173

四、海马脑片盲法膜片钳技术 177

三、脑片膜片钳技术的优点 177

第1节 概述 180

第11章 神经系统受体 180

第2节 受体结合的研究方案 181

二、组织的选择和制备 182

一、放射配体的选择 182

第3节 膜片放射配体受体结合实验 182

五、孵育条件 183

四、非特异性结合的测定 183

三、缓冲液和佐剂 183

七、饱和动力学研究 184

六、放射配体-受体复合体与游离放射配体的分离 184

八、竞争性结合数据的计算 185

一、冰冻脑片的制备 187

第4节 脑片受体结合的放射自显影方法与技术 187

九、ex vivo和在体结合技术 187

三、放射自显影 188

二、放射性配基结合 188

一、肾上腺素受体 189

第5节 神经受体实验方法与技术 189

四、显微测密度术定量分析图像 189

二、多巴胺受体 193

三、M胆碱能受体 197

四、5-HT受体 198

六、吗啡受体 199

五、组织胺H1受体 199

八、γ-氨基丁酸（GABA）受体 200

七、苯二氮？受体 200

十、1，4-双氢吡啶（DHP）钙通道受体 201

九、氯离子通道开放实验 201

第6节 神经受体药理学研究方法评价 202

第1节 概述 205

第12章 神经细胞内信号传导 205

一、G蛋白提取及纯化 206

第2节 G蛋白的分离纯化及测定 206

一、cAMP荧光测定法 209

第3节 环核苷酸测定 209

二、G蛋白活性检测 209

二、cAMP蛋白质竞争结合法 210

一、［3H］肌醇标记测定肌醇磷脂及PLC活性 212

第4节 肌醇磷脂测定 212

三、环磷酸鸟苷（cGMP）放射免疫测定 212

二、特异受体结合法测定1，4，5-IP3 213

第5节 酪氨酸激酶测定-活细胞及细胞膜样本32P标记 214

一、蛋白激酶C的提取和纯化 215

第6节 蛋白激酶C的纯化和活性测定 215

一、间隙连接蛋白的分离与纯化 217

第7节 细胞间隙连接结构及功能 217

二、蛋白激酶C活性的测定 217

三、免疫荧光染色技术 219

二、电镜观察细胞间隙连接通道的方法 219

四、染料或同位素示踪分子法 220

五、代谢试验 222

一、基本原理 225

第2节 免疫组织（细胞）化学法 225

第13章 免疫学方法在神经药理学研究中的应用 225

第1节 概述 225

二、标记（染色）方法 226

五、抗体稀释度和效价 231

四、酶消化 231

三、秋水仙素对免疫组化染色结果的影响 231

六、免疫组化的非特异性染色和交叉反应 232

八、免疫组化方法的基本过程 233

七、免疫组织化学染色的对照实验 233

九、免疫组化技术在神经药理学研究中的应用实例 234

十、免疫组化双重染色技术 237

十一、受体定位技术 239

十二、免疫电子显微镜技术 242

一、基本原理 245

第3节 酶联免疫测定技术 245

三、酶标记抗体的制备 246

二、在固相包被免疫反应物 246

四、ELISA测定的一般方法 247

五、应用实例 249

一、靶蛋白的放射性标记 250

第4节 免疫沉淀技术 250

三、抗原-抗体复合物的形成及收集 251

二、裂解细胞 251

二、抗血清的制备 252

一、基本原理 252

第5节 放射免疫分析法 252

第6节 免疫印迹技术 253

四、操作步骤 253

三、抗原的标记 253

三、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 254

二、组织和细胞的裂解 254

一、基本原理 254

七、抗体与被测蛋白结合 255

六、封闭硝酸纤维素膜 255

四、蛋白质的电转移 255

五、固定于膜上的蛋白质染色 255

八、酶联抗体显色 256

九、应用实例 256

一、电解损毁法 259

第1节 中枢神经通路损毁方法 259

第14章 脑神经通路损毁模型及中枢给药方法 259

二、化学损毁法 260

三、手术损毁法 261

四、单个神经元的杀伤技术 262

第2节 中枢给药方法 263

五、外周神经的损伤 263

二、大鼠侧脑室给药法 264

一、小鼠脑室给药法 264

四、脑室灌流法 265

三、大鼠脑内神经核团给药法 265

五、一种体内持续给药方法-微量透析泵 268

第1节 概述 271

第15章 抗脑缺血药理学 271

一、全脑缺血动物模型 272

第2节 脑缺血动物实验模型 272

二、局灶性脑缺血模型 273

三、缺血性脑损伤的评价方法 276

四、动物模型中缺血性脑损伤的影响因素 282

五、脑缺血体外模型 283

一、线粒体功能的评价 284

第3节 缺血性神经细胞损伤的机制分析 284

二、自由基及氧化损伤 288

三、半胱氨酸蛋白酶活性分析 289

四、炎性细胞因子测定 292

三、穿梭箱 297

二、避暗法 297

第16章 学习、记忆的行为学研究方法 297

第1节 概述 297

第2节 条件反射法 297

一、跳台法 297

四、迷津 298

六、记忆障碍动物模型 299

五、八臂迷宫法 299

七、操作式条件反射 300

八、用于观察认知功能改善的老年痴呆或记忆障碍模型 302

第4节 LTP结合行为学实验评价促智药物 303

第3节 海马LTP的记录方法 303

第1节 概述 305

第17章 突触可塑性电生理学 305

三、LTP 306

二、强直后增强 306

第2节 突触可塑性的分类 306

一、双脉冲可塑性 306

三、海马回路 307

二、测量峰点非固定波动分析 307

四、LTD 307

五、突触超可塑性 307

第3节 突触可塑性实验的相关术语和参数 307

一、诱发动作电位 307

五、输入／输出曲线 308

四、基础水平线 308

七、计算机数据采集分析系统 309

六、诱导突触可塑性的参数 309

二、实验步骤 310

一、仪器设备 310

第4节 大鼠在体脑内记录突触可塑性的方法 310

第5节 脑片上记录LTP的方法 312

三、注意事项 312

一、仪器设备 313

三、注意事项 314

二、实验步骤 314

四、常用网站 315

第2节 AD动物模型 317

第1节 概述 317

第18章 老年痴呆症（AD）实验模型及抗AD研究 317

一、影响APP转基因鼠模型的相关因素 318

第3节 APP转基因模型 318

二、APP转基因鼠的神经病变特征 319

一、染色原理 320

第5节 β淀粉样蛋白刚果红染色 320

第4节 体外培养神经细胞Aβ损伤模型 320

一、神经细胞培养 320

二、Aβ毒性模型建立 320

二、操作步骤 321

一、基本原理 321

二、标本制备 321

三、实验材料与试剂 321

四、染色过程 321

五、结果 321

第6节 损毁中枢胆碱能神经元的AD动物模型 321

四、注意事项 322

三、观测指标 322

第7节 AD药物治疗的途径和研究展望 323

五、方法评价 323

第2节 帕金森病动物模型 328

第1节 概述 328

第19章 帕金森病（PD）实验模型及抗PD研究 328

一、MPTP模型 329

二、6-羟基多巴胺（6-OHDA）模型 330

三、高铁模型 332

七、槟榔碱致小鼠震颤模型 333

六、L-DOPA诱导的运动障碍动物模型 333

四、机械损伤模型 333

五、利血平模型 333

一、细胞转染的PD体外模型 334

第3节 帕金森病体外细胞模型 334

八、氧化震颤素致小鼠震颤模型 334

九、毒扁豆碱致大鼠震颤模型 334

十、氟哌啶醇致小鼠僵住症模型 334

十一、病毒感染模型 334

十二、方法评价 334

二、药物毒性作用诱导的PD体外模型 335

三、脑中乙酰胆碱酯酶（AchE）活性的测定 336

二、脑中单胺氧化酶（MAO-B）活性测定 336

第4节 帕金森病动物模型的检验方法 336

一、动物旋转试验 336

四、脑区DA神经元定性-TH染色 337

五、DA能神经递质释放测定-快速周期伏安法 338

六、脑内多巴胺及其代谢产物含量测定-高效液相色谱法 343

七、在体测定脑内DA含量变化-微透析法 344

三、NSC的增殖和分化 347

二、NSC的分离、培养与鉴别 347

八、DA受体测定 347

第5节 帕金森病的神经干细胞移植疗法 347

一、NSC的来源 347

四、NSC移植 348

一、非条件反射焦虑模型 352

第2节 可供选择的模型 352

第20章 抗焦虑药理学 352

第1节 概述 352

二、条件反射焦虑模型 360

一、应激模型 364

第2节 抑郁动物模型 364

第21章 抗抑郁药理学 364

第1节 基本原则 364

二、脑损伤模型-大鼠嗅球切除模型 366

四、药物相互作用模型 367

三、操作行为模型-大鼠72秒低频差式强化程序法 367

五、遗传型抑郁动物模型 369

第1节 概述 372

第22章 抗癫痫、抗惊厥药理学 372

一、［3H］-GABA受体结合实验 373

第2节 体外实验方法 373

二、GABAA受体结合实验 374

三、GABAB受体结合实验 375

五、［3H］CPP谷氨酸受体结合实验 376

四、GABA摄取和释放实验 376

六、NMDA受体复合物：［3H］TCP结合实验 377

七、［35S］-TBPS与大鼠皮层匀浆及切片结合实验 379

九、［3H］士的宁敏感的甘氨酸受体 381

八、［3H］甘氨酸与大鼠大脑皮层结合试验 381

一、急性实验性惊厥模型 382

第3节 在体实验方法 382

十、体外海马切片 382

二、慢性实验性癫痫模型 385

三、原发性实验性癫痫模型 388

一、间断性行为实验观察方法 393

第1节 镇静作用 393

第23章 镇静催眠药 393

三、孔板实验 394

二、开阔法实验 394

第2节 催眠作用 395

五、遥测分析大鼠大脑EEG 395

四、联合开阔法实验 395

一、体外实验 396

二、体内实验 397

一、整体动物模型 400

第2节 痛觉模型及测定 400

第24章 镇痛药理学 400

第1节 概述 400

二、受体水平评价阿片类化合物活性 407

三、离体器官实验 410

一、痛觉电生理研究的电刺激法 412

第3节 痛觉电生理学 412

四、脑电图及肌电图的方法 415

三、电压钳和膜片钳技术 415

二、生物电信号记录 415

第4节 痛觉递质与受体 416

一、痛觉递质的测定 417

二、痛觉相关受体的研究 420

第1节 概述 424

第25章 药物依赖性 424

一、小鼠实验方法 425

第2节 镇静催眠依赖性实验 425

三、恒河猴实验方法 426

二、大鼠实验方法 426

一、小鼠实验模型 427

第3节 阿片类成瘾药物依赖性实验 427

二、大鼠实验模型 429

三、恒河猴实验模型 433

四、离体回肠纵肌实验模型 434

一、概述 436

第1节 细胞凋亡 436

第26章 神经药理学研究常用药品与试剂介绍 436

二、凋亡研究用抗体 441

三、凋亡检测试剂盒 450

四、凋亡检测试剂 452

五、细胞凋亡酶类和蛋白质 454

六、Caspase抑制剂 457

七、Caspase底物 458

八、PARP调节剂 460

一、神经科学研究用抗体 461

第2节 神经传递 461

二、神经蛋白质 473

三、神经递质代谢 476

四、神经肽类 484

五、神经递质 506

六、药理学制剂 564

第3节 钙信号系统 579

一、钙通道调节剂 579

二、细胞内钙调节剂 584

三、钙通道抗体 587

四、钙调素和其它钙结合蛋白 590

五、钙相关蛋白抗体 591

六、钙调素拮抗剂 592

七、钙探针 594

八、钙络合剂 595

第4节 一氧化氮与细胞应激 595

一、细胞应激 595

二、氧化氮代谢 609

三、蛋白小体 623

一、细胞因子、生长因子和激素概述 628

二、神经生长因子概述 628

三、神经生长因子试剂 628

第5节 细胞因子、生长因子和激素 628

四、神经生长因子抗体 631

第6节 单价离子通道 632

一、单价离子通道概述 632

二、钾通道概述 633

三、钾通道试剂 634

四、钠通道试剂 638

五、各种离子泵抑制剂 641

六、氯通道 642

七、离子通道抗体 642

八、离子载体 647

九、离子探针 648

第7节 受体 649

一、细胞因子，生长因子和激素受体 649

二、细胞因子，生长因子和激素受体抗体 652

三、神经递质受体 667

四、神经递质受体抗体 670

第8节 G蛋白和环核苷酸 678

一、G蛋白功能 678

二、环核苷酸代谢 690

一、二酰基甘油 702

二、神经节苷脂 702

第9节 细胞信号传导中的脂质 702

三、肌醇磷酸 704

四、磷脂 706

五、磷脂代谢 708

六、神经鞘脂类 712

七、鞘脂类代谢 715

八、其它生物活性脂质 715

九、脂质信号传导抗体 716

第10节 信号传导研究用品 717

一、分析性细胞学试剂盒及供应品 717

二、细胞生长和活力测试盒 720

三、连接物试剂盒 721

四、神经元染料和示踪剂 723

五、细胞溶解酶 723

六、洗涤剂 725

七、蛋白酶抑制剂 727

八、结合型试剂盒 734

九、缓冲液与试剂 736

一、荧光的原理和荧光探针 745

第1节 低分子荧光探针在观察神经功能活动的可视化应用 745

二、荧光的检测装置 745

第27章 图像可视化技术在神经药理学研究中的应用 745

三、荧光可视化法在神经药理学的应用 746

第2节 荧光蛋白的特性及其在生命科学领域的应用 749

一、荧光蛋白的发现经过及其应用 749

二、荧光蛋白的特殊性质 750

三、GFP嵌合蛋白（Chimera protein）的设计 750

第3节 荧光蛋白可视化技术在神经药理学研究中的应用 752

一、利用荧光蛋白可视化技术对神经细胞内信号传导通路的解析 752

二、利用荧光蛋白可视化技术对神经细胞内重要蛋白的观察解析 753

三、细胞内功能蛋白的存在部位和动态的解析 757

附录1 神经科学参考书简介 761

附录2 神经科学及药理学期刊简介 766

中文索引 782